Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
1K wyświetleń
⸱
8 lipca 2025
Źródło: Fang, E. F., et al. Wykrywanie mitofagii in vitro i in vivo w komórkach ludzkich, C. elegans i myszach. J. Vis. Exp. (2017).
Ten film demonstruje test in vivo do badania mitofagii u Caenorhabditis elegans. Po wystawieniu nicieni na działanie leku indukującego mitofagię, występowanie mitofagii ocenia się na podstawie kolokalizacji między DCT-1, receptorem mitofagii na uszkodzonych mitochondriach, a autofagosomalnym białkiem błonowym LGG-1.
1. Wykrywanie mitofagii u C. elegans
UWAGA: Nicień C. elegans stanowi platformę do testowania mitofagii na poziomie organizmu. Do monitorowania mitofagii można wykorzystać dwa szczepy: (1) Rosella (mtRosella) ukierunkowana na mitochondria lub (2) receptor mitofagii DCT-1 połączony z GFP wraz z autofagosomalnym markerem LGG-1 połączonym z Discosoma sp. białko czerwonej fluorescencji (DsRed).
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Mikroskop konfokalny Eclipse TE-2000e | Nikon | #TE-2000E | |
| Oprogramowanie do kolokalizacji | Objętość | #Volocity 6,3 | alternatywne oprogramowanie Zeiss ZEN 2012 |
| Oprogramowanie dla badaczy komórek IN | GE Healthcare Nauki przyrodnicze | #28408974 | |
| Pożywka do hodowli komórkowych | Rybak termiczny | #DMEM–Zmodyfikowany Eagle Medium firmy Dulbecco | |
| Penicylina-Streptomycyna (10 000 U/ml) | Rybak termiczny | #15140122 | |
| Surowica bydlęca płodu | Sigma-Aldrich | #12003C-1000ML | |
| Inkubator do hodowli komórkowych | Rybak termiczny | #Thermo Forma 3110 Inkubator z płaszczem wodnym CO2 | |
| mikroskop epifluorescencyjny | Zeiss | Zeiss Axio Imager Z2 | |
| kamera | Olympus | Olympus DP71 | |
| mikroskop konfokalny | Zeiss | Zeiss Axio Observer Z1 | |
| Oprogramowanie konfokalne | Zeiss | ZEN 2012 | |
| Oprogramowanie do analizy obrazu | Obraz J | analiza kolokalizacji itp | https://imagej.nih.gov/ij/ |
| oprogramowanie do analizy statystycznej | GraphPad Software Inc., San Diego, Stany Zjednoczone | Pakiet oprogramowania GraphPad Prism | |
| Materiał do wykonania kilofa do robaków | Surepure Chemetals | #4655 | Pick wykonany jest z drutu o grubości 30 grubości 90% platyny 10% irydu |
| IR: N2; Ex[pmyo-3 TOMM-20::Rosella] | Zapytanie o materiał do Tavernarakis Nektarios | Utrzymuj transgeniczne zwierzęta w temperaturze 20 °C | |
| IR: N2; Ex[pdct-1 DCT-1::GFP; pmyo-3 DsRed::LGG-1] | Zapytanie o materiał do Tavernarakis Nektarios | ||
| pmyo-3 TOMM-20::Rosella | Zapytanie o materiał do Tavernarakis Nektarios | ||
| pdct-1 DCT-1::GFP | Zapytanie o materiał do Tavernarakis Nektarios | ||
| pmyo-3 DsRed::LGG-1 | Zapytanie o materiał do Tavernarakis Nektarios | ||
| Roztwór parakwatu | |||
| Bufor M9 | |||
| Bufor M9-lewamizolu | |||
| Szkiełka mikroskopowe szklane i nakrywkowe | Fisher Naukowy | #B9992000 | |
| Kleszcze chirurgiczne | STERIS Zdrowie Zwierząt | 19-częściowy pakiet do sterylizacji psów Ekonomiczny | |
| Nożyczki chirurgiczne | STERIS Zdrowie Zwierząt | 19-częściowy pakiet do sterylizacji psów Ekonomiczny | |
| 1x PBS (Biblioteka PBS) | Rybak termiczny | #AM9625 | 10x PBS należy rozcieńczyć do 1x PBS za pomocą ddH2O |
| Shakerze bostońskim | Fisher Naukowy | #11-676-178 | Thermo Scientific MaxQ HP Stołowa orbitalna mała wytrząsarka platformowa na świeżym powietrzu Pakiet A |
| 2% podkładka agarozowa | |||
| Ostrza Vibroslice | Światowe instrumenty precyzyjne | #BLADES-2 | ostrze jednoostrzowe |
| Blachy | Msc | #78803988 | 0,012 cala grubości x 6 cali szerokości x 12 cali długości, blacha ze stali nierdzewnej 430 |
| Tryton X-100 | Detergent | ||
| Dichlorek wioligogenu metylu (hydrat | Sigma-Aldrich | #856177 | parakwat |
| Inkubator dla nicieni | WODNY | Inkubator do utrzymania temperatury 20 °C | |
| Mikroskop stereoskopowy | Olympus | Zobacz materiał SMZ645 | |
| Mikroskop konfokalny | Zeiss | AksjoObserver Z1 | Dla nicieni (krok 2) |
| mikroskop epifluorescencyjny | Zeiss | AxioImager Z2 | Dla nicieni (krok 2) |
| Środek sieciujący UV | Vilber Lourmat | BIO-LINK – BLX-E365 | Źródło światła UV; 356 nm |
