Test in vitro do badań przesiewowych interferonów jako silnych inhibitorów wzrostu wirusa Zika

Streszczenie

Źródło: Contreras, D. et al., Zika Virus Infectious Cell Culture System and the In Vitro Prophylactic Effect of Interferons. J. Vis. Exp. (2016)

Wideo demonstruje test in vitro do badania interferonów o działaniu przeciwwirusowym przeciwko wirusowi Zika, ludzkiemu patogenowi. W komórce gospodarza wirus Zika ulega namnażaniu po internalizacji, infekując sąsiednie komórki i tworząc odrębne strefy lub blaszki wirusowe. Interferon typu I, działając jako środek przeciwwirusowy, hamuje namnażanie się wirusa, zapobiegając w ten sposób tworzeniu się blaszek wirusowych w monowarstwie komórki gospodarza.

Protokół

1. Badanie przesiewowe biblioteki cytokin pod kątem infekcji wirusem Zika

1. Wysiewaj naiwne komórki Vero w ilości 1 x 10⁵ komórek na studzienkę za pomocą 12-dołkowej płytki. Po przyłączeniu komórek (6 godzin po wysiewie) dodaj każdą cytokinę w
   wskazane stężenia w duplikatach biologicznych (objętość 2 ml na basenik). Uwzględnij sterowanie samym pojazdem (PBS).
2. Po 12 godzinach od zabiegu należy przeprowadzić infekcję wirusem Zika (MOI 0,1 na 400 μl na studzienkę). Uwzględnij studzienki kontroli ujemnej bez infekcji (makieta).
3. Po 4 godzinach od zakażenia zastąp inokulum wirusowe pożywką traktowaną cytokinami (2 ml). Inkubować komórki w temperaturze 37 °C przez dodatkowe 44 godziny.
4. Po 48 godzinach od zakażenia policz blaszki wirusowe za pomocą mikroskopu z kontrastem fazowym i uzyskaj reprezentatywne obrazy zakażonych komórek w 40-krotnym powiększeniu (ryc. 1).

Wyniki

Rycina 1: Interferony wykazują silną aktywność wirusa anty-Zika. (A) Wykres przedstawiający modulację wzrostu wirusa Zika przez różne cytokiny w porównaniu z modulacją kontroli nośnika. Wartości średnie i odchylenie standardowe są pokazane na wykresie słupkowym. Interferony wykazały istotne statystycznie hamowanie replikacji wirusa Zika (wartość p <0,05). (

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Linia komórkowa Vero	Kontroler ATCC (Kontroler T	Zobacz materiał CCL-81
Szczep wirusa Zika PRVABC59	Centra Kontroli i Prewencji Chorób (CDC)
IŁ-6	Peprotech	200-06
IŁ-1 alfa	Peprotech	200-01A
TNF-alfa	Peprotech	300-01A
Interferon alfa A	Systemy badawczo-rozwojowe	Numer katalogowy: 11100-1
Interferon beta	Peprotech	300-02 p.n.e
Interferon gamma	Peprotech	300-02
Wirówka 5415R	Eppendorf	Zobacz materiał 5415R
Wirówka 5810R	Eppendorf	Zobacz materiał 5810R
Mikroskop immunofluorescencyjny Nikon Eclipse Ti z Nikon Intenselight C-HGFI	Nikon

. TGL powiedział: powiedział: