Technika kohodowli do różnicowania ludzkich neuronalnych komórek progenitorowych w neurony

Streszczenie

Źródło: Su, C. T. E., et al. Podejście optogenetyczne do oceny tworzenia połączeń neuronalnych w systemie kokulturowym. J. Vis. Exp. (2015).

Ten film demonstruje metodę różnicowania ludzkich neuronalnych komórek progenitorowych (NPC) w neurony. NPC są wprowadzane do ustalonej kokultury neuronów korowych astrocytów myszy i szczurów, promując różnicowanie NPC w neurony. Różnicowanie potwierdza się poprzez wizualizację komórek pod mikroskopem konfokalnym.

Protokół

1. Wytwarzanie indukowanych pluripotencjalnych komórek macierzystych

1. Hodowla ludzkich fibroblastów w DMEM uzupełniona 10% płodową surowicą bydlęcą (FBS) w płytkach 6-dołkowych.
2. Przed przystąpieniem do przeprogramowywania fibroblastów należy pokryć 6-dołkowe preparaty Matrigel i inkubować przez co najmniej godzinę w temperaturze pokojowej. Przy 80% konfluencji usuń pożywkę z kultur fibroblastów i przemyj raz 1x solą fizjologiczną buforowaną fosforanami (PBS).
3. Dodać wystarczającą ilość 0,25% trypsyny-EDTA, aby pokryć całą płytkę i inkubować w temperaturze 37 °C przez 10 minut.
4. Gdy komórki zostaną usunięte z dołk....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Epi5 Episomalny zestaw do przeprogramowania iPSC	Invitrogen	A15960
DMEM/F12	Lonza	12719F
Matrigel	BD Nauki biologiczne	354277
Podłoże nerwowo-podstawowe	Invitrogen	21103049
Bsa	Sigma	A7906
Pbs	Thermo Scientific	SH30028.02
Probówka wirówkowa o pojemności 15 ml	BD Nauki biologiczne	352096
Trypsyna-EDTA	Invitrogen	25200056
Probówka wirówkowa o pojemności 50 ml	BD Nauki biologiczne	Numer katalogowy: 352070
Płytki 24-dołkowe	Corning	9761146
Płytki 6-dołkowe	Corning	720083
Kolby T25	Corning	430641
System transfekcji neonów	Invitrogen	MPK5000	Do elektroporacji ludzkich fibroblastów
Normalne ludzkie fibroblasty skórne	Komórka promocyjna	Zobacz materiał C12300
pLenti-Synapsyna-hChR2(H134R)-EYFP-WPRE	Addgene powiedział:	Numer katalogowy: 20945

powiedział: