Hodowla neuronów zwojowych siatkówki z glejem osłonki węchowej

Streszczenie

Źródło: Portela-Lomba, M., et al. Kokultura aksotomizowanych neuronów zwojowych siatkówki szczura z glejem otoczkowym węchowym, jako model in vitro regeneracji aksonów u dorosłych. J. Vis. Exp. (2020)

Ten film pokazuje procedurę izolacji neuronów zwojowych siatkówki (RGN) z siatkówki szczura i kohodowli ich z komórkami glejowymi otoczki węchowej (OEG). Metoda ta pozwala na badanie potencjału neuroregeneracyjnego OEG po uszkodzeniu neuronalnym.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Przygotowanie ihOEG (Ts12 i Ts14) do testu

UWAGA: Ten krok musi być wykonany 24 godziny przed sekcją RGN i kokulturą.

1. Szkiełka nakrywkowe o średnicy 12 mm należy traktować 10 μg/ml poli-L-lizyny (PLL) przez 1 godz.
   nuta: Szkiełka nakrywkowe można pozostawić na noc w roztworze PLL.
2. Umyj szkiełka nakrywkowe trzykrotnie 1x solą fizjologiczną z buforem fosforanowym (P....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Suplement B-27	Gibco (firma Gibco)	17504044
Kwas D,L-2-amino-5-fosfonowalerianowy	Sigma	283967	Inhibitor receptora NMDA
Zobacz materiał DMEM-F12	Gibco (firma Gibco)	11320033	Pożywka do hodowli komórkowych
FBS (Sieć Usługowa	Gibco (firma Gibco)	11573397	Surowica bydlęca płodu
FBS-Hyklon	Fisher Naukowy	16291082	Surowica bydlęca płodu
L-glutamina	Lonza	BE17-605F
Podłoże nerwowo-podstawowe	Gibco (firma Gibco)	21103049	Pożywka do hodowli komórek nerwowych
System dysocjacji papainy	Korporacja Biochemiczna Worthington	LK003150	Do stosowania w izolacji komórek nerwowych
Pbs	Domowej roboty
PBS-EDTA	Lonza	H3BE02-017F
Penicylina/Streptomycyna/Amfoterycyna B	Lonza	17-745E	Działa bakteriostatycznie i bakteriobójczo
Ekstrakt z przysadki mózgowej	Gibco (firma Gibco)	13028014	Ekstrakt z przysadki bydlęcej
Poli-L- lizyna (PLL)	Sigma	A-003-M