Rejestracja potencjału pola lokalnego z obu półkul mózgu myszy

Streszczenie

Źródło: Chen, Y., et al. Ocena lateralizacji półkuli z obustronnym zapisem potencjału pola lokalnego w wtórnej korze ruchowej myszy. J. Vis. Exp. (2019).

Ten film demonstruje in vivo rejestrację potencjału lokalnego pola (LFP) z obustronnych obszarów M2 mózgu myszy. Znieczulona mysz jest zabezpieczona i przygotowana do zabiegu. Aby zarejestrować LFP, należy wprowadzić mikroelektrody do docelowych współrzędnych obustronnych obszarów M2, które są odpowiedzialne za złożone ruchy motoryczne.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Znieczulenie i chirurgia zwierząt

1. Zważ i znieczul mysz za pomocą zatwierdzonego schematu znieczulenia przez lokalną komisję ds. opieki nad zwierzętami.
2. Wykonaj szczypanie ogona lub palca u nogi kleszczami, aby potwierdzić głębokie znieczulenie przed operacją.
3. Umieść mysz w aparacie stereotaktycznym i zamocuj jej głowę.
4. Nałóż maść na oczy na oba oczy, aby były wilgotne. Postępuj zgodnie z lokalnymi wytycznymi dotyczącymi opieki nad zwierzętami dotyczącymi analgezji przed- i pooperacyjnej.
5. Ogol włosy za pomocą maszynki do strzyżenia chirurgicznego. Wykonaj małe nacięcie (12-15 mm) na środku odsłoniętego pola operacyjnego za pomocą nożyczek. Za pomocą kleszczy delikatnie odciągnij skórę głowy od linii środkowej.
6. Delikatnie oddziel skórę i usuń resztki tkanki. Oczyść czaszkę za pomocą patyczków kosmetycznych pokrytych nadtlenkiem wodoru.
7. Wywierć dwa małe otwory o promieniu 1,0-1,5 mm po lewej i prawej stronie czaszki, aby umożliwić wprowadzenie mikroelektrod rejestrujących do obszarów M2 pod mikroskopem stereoskopowym (Rysunek 1A).
   nuta: Stereotaktyczne lokalizacje obustronnego M2: 1,94 mm przed bregmą, 1,0 mm bocznie do linii środkowej i 0,8-1,1 mm brzusznie do opony twardej.
8. Ostrożnie usuń oponę twardą za pomocą wolframowej igły.
9. Mikropipety szklane borokrzemianowe (średnica zewnętrzna: 1,0 mm) należy ciągnąć jako mikroelektrody rejestrujące o rezystancji 1-2 MΩ.
10. Włożyć dwie oddzielne mikroelektrody rejestrujące wypełnione 0,5 M NaCl do otworów za pomocą mikromanipulatorów mechanicznych (pod kątem 60°, rysunek 1B).

2. Zapisy LFP w obustronnym M2 myszy

1. Powoli opuść lewą i prawą szklaną elektrodę do odpowiednich współrzędnych obustronnego M2 (rysunek 1C).
2. W celu kontroli jakości przetestuj rezystancję każdej elektrody za pomocą wzmacniacza różnicowego przed wychwyceniem LFP.
3. Ustaw proces nagrywania na górnoprzepustowe 0,1 Hz i dolnoprzepustowe 1,000 Hz ze wzmocnieniem 1,000x.
4. Zbierz zdigitalizowane surowe dane LFP dotyczące co najmniej 60-sekundowej spontanicznej aktywności w stabilnym stanie, z myszami oddychającymi równomiernie z częstością oddechów 2 oddechów na sekundę w znieczuleniu.
5. Po nagraniu powoli podnieś elektrody z mózgu, a następnie poddaj myszy eutanazji przez szybkie zwichnięcie szyjki macicy.
6. Zapisz dane i przeanalizuj je w trybie offline.

Wyniki

Rysunek 1: Schemat procedury jednoczesnego zapisu LFP. (A) Mysz stereotaktyczna z odsłoniętą czaszką i usuniętą oponą twardą w celu obustronnego zapisu in vivo LFP w lewym i prawym M2. (B) Dwie szklane mikroelektrody stykające się z powierzchnią kory mózgowej w otworze wywierconym jednocześnie. (C) Rejestrowanie mikroelektrod i drutów Ag/AgCl jako elektrod odniesienia umieszczonych w odpowiednich...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Wzmacniacz różnicowy AC/DC	Systemy A-M	Wzór 3000
Przetwornik analogowo-cyfrowy	Cambridge Electronic Design Sp. z o.o.	Mikro1401
Szklane mikropipety borokrzemianowe	Firma zajmująca się sprzętem eksperymentalnym do nauczania wiosny w Nankinie	Numer katalogowy: 161230	Średnica zewnętrzna: 1,0 mm
Ściągacz do mikroelektrod	Narishige powiedział:	Komputer PC-10
Zawartość NaCl	Fabryka odczynników chemicznych w Kantonie	7647-14-5
Uchwyt mikroelektrody z pinem	Światowe instrumenty precyzyjne, INC.	MEH3SW10
Kolce2	Cambridge Electronic Design Sp. z o.o.
Mikroskop stereoskopowy	Zeiss	Numer telefonu 435064-9020-000
Aparatura stereotaktyczna	RWD Nauki przyrodnicze	Numer katalogowy: 68045
Uretanowe	Sigma-Aldrich	Numer katalogowy 94300

powiedział: