$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Znieczulenie i chirurgia zwierząt
- Zważ i znieczul mysz za pomocą zatwierdzonego schematu znieczulenia przez lokalną komisję ds. opieki nad zwierzętami.
- Wykonaj szczypanie ogona lub palca u nogi kleszczami, aby potwierdzić głębokie znieczulenie przed operacją.
- Umieść mysz w aparacie stereotaktycznym i zamocuj jej głowę.
- Nałóż maść na oczy na oba oczy, aby były wilgotne. Postępuj zgodnie z lokalnymi wytycznymi dotyczącymi opieki nad zwierzętami dotyczącymi analgezji przed- i pooperacyjnej.
- Ogol włosy za pomocą maszynki do strzyżenia chirurgicznego. Wykonaj małe nacięcie (12-15 mm) na środku odsłoniętego pola operacyjnego za pomocą nożyczek. Za pomocą kleszczy delikatnie odciągnij skórę głowy od linii środkowej.
- Delikatnie oddziel skórę i usuń resztki tkanki. Oczyść czaszkę za pomocą patyczków kosmetycznych pokrytych nadtlenkiem wodoru.
- Wywierć dwa małe otwory o promieniu 1,0-1,5 mm po lewej i prawej stronie czaszki, aby umożliwić wprowadzenie mikroelektrod rejestrujących do obszarów M2 pod mikroskopem stereoskopowym (Rysunek 1A).
nuta: Stereotaktyczne lokalizacje obustronnego M2: 1,94 mm przed bregmą, 1,0 mm bocznie do linii środkowej i 0,8-1,1 mm brzusznie do opony twardej.
- Ostrożnie usuń oponę twardą za pomocą wolframowej igły.
- Mikropipety szklane borokrzemianowe (średnica zewnętrzna: 1,0 mm) należy ciągnąć jako mikroelektrody rejestrujące o rezystancji 1-2 MΩ.
- Włożyć dwie oddzielne mikroelektrody rejestrujące wypełnione 0,5 M NaCl do otworów za pomocą mikromanipulatorów mechanicznych (pod kątem 60°, rysunek 1B).
2. Zapisy LFP w obustronnym M2 myszy
- Powoli opuść lewą i prawą szklaną elektrodę do odpowiednich współrzędnych obustronnego M2 (rysunek 1C).
- W celu kontroli jakości przetestuj rezystancję każdej elektrody za pomocą wzmacniacza różnicowego przed wychwyceniem LFP.
- Ustaw proces nagrywania na górnoprzepustowe 0,1 Hz i dolnoprzepustowe 1,000 Hz ze wzmocnieniem 1,000x.
- Zbierz zdigitalizowane surowe dane LFP dotyczące co najmniej 60-sekundowej spontanicznej aktywności w stabilnym stanie, z myszami oddychającymi równomiernie z częstością oddechów 2 oddechów na sekundę w znieczuleniu.
- Po nagraniu powoli podnieś elektrody z mózgu, a następnie poddaj myszy eutanazji przez szybkie zwichnięcie szyjki macicy.
- Zapisz dane i przeanalizuj je w trybie offline.
