$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny komitet ds. opieki nad zwierzętami oraz komisję weterynaryjną JoVE.
1. Iniekcja nerwu wzrokowego
- Znieczulić zwierzę dootrzewnowym wstrzyknięciem ketaminy (75 mg/kg) i medetomidyny (0,5 mg/kg).
nuta: Po indukcji znieczulenia należy obserwować odruchy odstawienia (próba szczypania, odruch rogówkowy i powiekowy itp.) oraz ich brak jako wskazanie do rozpoczęcia operacji. Stale monitoruj zwierzęta przez cały czas trwania operacji i podawaj dodatkowy lek znieczulający (10% początkowej dawki ketaminy na uzupełnienie), jeśli występują odruchy. W eksperymentach wykorzystuje się dorosłe szczury (>12 tygodni).
- Ogolić skórę w obszarze operacyjnym. Umieść zwierzę na podkładce rozgrzewającej (37 °C), aby utrzymać temperaturę ciała podczas zabiegu. Przygotuj skórę poprzez miejscowe stosowanie jodu powidonu. Zastosuj obłożenie chirurgiczne. Stosuj miejscowo maść okulistyczną, aby zapobiec wysuszeniu rogówki w znieczuleniu ogólnym. Utrzymuj aseptykę za pomocą sterylnych narzędzi.
- Wykonaj od 1 do 1,5 cm nacięcia w skórze powyżej oczodołu losowo wybranego oka. Otwórz tkankę podskórną, aby dotrzeć do jamy oczodołu za pomocą cienkich nożyczek do tęczówki. Otwórz spojówkę i przednią torebkę czopa pod mikroskopem operacyjnym.
- Wycofaj mięśnie zewnątrzgałkowe i gruczoły łzowe wewnątrzoczodołowe, aby odsłonić nerw wzrokowy o długości około 3 mm. Otwórz warstwy opony twardej i pajęczynówki wokół nerwu wzrokowego wzdłużnie za pomocą ostrza okulistycznego.
- Włożyć szklaną pipetę do nerwu wzrokowego w odległości 2 mm za gałką oczną. Szklana mikropipeta jest dołączona do strzykawki Hamiltona.
- Wstrzyknij 1% lizolecytyny (0,4 - 1,0 μl, z 0,02% Evan's Blue, który nie ma wpływu na mielinizację) powoli do nerwu przez około 30 sekund.
- Zszyj nacięcie skóry. Zastosuj maść z antybiotykiem, aby zapobiec infekcji. Oczy innych kolegów mogą służyć jako wewnętrzna kontrola zapisów elektrofizjologicznych.
- Umieść zwierzęta na podkładce rozgrzewającej, aby zregenerowały się po znieczuleniu.