Ustalenie aktywnego zakażenia wirusem HIV w modelu szczurzym

Streszczenie

Źródło: Li, H., McLaurin, et al. Szczurzy model zakażenia mózgu EcoHIV. J. Vis. Exp. (2021).

Ten film demonstruje procedurę wstrzykiwania chimerycznych wirusów HIV do kory mózgowej szczura, gdzie RNA wirusa integruje się z genomem gospodarza, replikuje się i rozprzestrzenia, aby ustalić aktywne zakażenie wirusem HIV w modelu eksperymentalnym.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Operacje stereotaktyczne wirusa EcoHIV-EGFP [Ecotropic HIV Enhanced Green Fluorescent Protein]

1. Znieczulenie szczurów za pomocą 3% sewofluranu. Kiedy szczury nie reagują na szkodliwe bodźce i ich odruchy są nieobecne, przejdź do kroku 1.2.
2. Ogol włosy w okolicy mózgu i dwukrotnie wysterylizuj skórę 70% etanolem i peelingiem na bazie chlorheksydyny. Zabezpiecz szczura w pozycji leżącej w aparacie stereotaktycznym.
3. Wykonaj nacięcie (5-6 cm) przez skórę wzdłuż linii środkowej skóry głowy.
4. Zaznacz dwie pozycje wiercenia na boku 0,8 mm, 1,2 mm rostral do bregma. Wywierć otwór (średnica 0,4 mm) w każdej pozycji czaszki.
5. Napełnić miareczkowany roztwór lentiwirusa EcoHIV (1,04 × 10⁶ j./ml) w strzykawce iniekcyjnej o pojemności 10 μl. Przymocować strzykawkę do aparatu stereotaktycznego.
6. Przesuń igłę w dół blisko powierzchni wierconego otworu. Zmierz i przesuń na głębokość 2,5 mm.
7. Wlać w infuzji 1 μl roztworu wirusa z szybkością 0,2 μl/min. Trzymać igłę w miejscu wstrzyknięcia przez 5 minut. Powoli przesuwać igłę w górę, aż znajdzie się na zewnątrz czaszki szczura.
8. Zszyj skórę jedwabną nicią 4-0.
9. Jednokrotnie wysterylizuj nacięcie 70% etanolem. Podskórnie wstrzyknąć butorfanol (Dorolex, 0,1 mg/kg masy ciała).
10. Przenieś szczura do komory rekonwalescencji z poduszką grzewczą, aż się obudzi.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Roztwór antybiotykowo-grzybiczy	Komórka	30004CI	100-krotny
Szkło nakrywkowe	Firma VWR	637-137
wiertarka
Ethicon Vicryl Plus Antybakteryjny, 4-0 Polyglactin 910 Szew, 27in. FS-2	Med Vet International	VCP422H
Strzykawka Hamilton	Hamilton	Rok 1701
Kleszcze do tęczówki	Światowe instrumenty precyzyjne	Numer katalogowy: 15914
Nożyczki do tęczówki	Światowe instrumenty precyzyjne	500216
Aparatura stereotaktyczna	Instrumenty Kopf	Wzór 900
Vannas Nożyczki	Światowe instrumenty precyzyjne	500086