Wywoływanie ostrego zawału mostu w modelu szczurzym za pomocą stymulacji elektrycznej

Abstract

Źródło: Luo, M., et al. Ustalenie ostrego zawału mostu u szczurów za pomocą stymulacji elektrycznej. J. Vis. Exp. (2020)

Ten film demonstruje procedurę wywoływania uszkodzenia tkanek lub zawału w moście znieczulonego szczura za pomocą stymulacji elektrycznej.

Protocol

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Ustalenie zawału u

1. Rozgrzej poduszkę grzewczą bezpośrednio przed znieczuleniem.
2. Przymocuj wiertło do czaszki do uchwytu na ramie stereotaktycznej.
3. Wstrzyknąć szczurom dootrzewnowo 50 mg/kg ketaminy i 5 mg/kg ksylazyny. Sprawdź, czy nie ma reakcji na szczypanie palców.
4. Zamontuj szczura na ramie stereotaktycznej w pozycji leżącej. Umieść listwy uszne nad kanałem słuchowym, aby zabezpieczyć głowę. Upewnić się, że czaszka jest utrzymywana w pozycji poziomej, aby uniknąć przekrzywienia wstrzyknięcia.
5. Utrzymuj znieczulenie za pomocą izofluranu (100% tlenu, 2,5% izofluranu) za pomocą stereotaktycznego stożka nosowego dla szczurów z portami wlotowymi i wylotowymi. Użyj poduszki grzewczej, aby utrzymać temperaturę na poziomie 37 °C i monitoruj ją przez cały zabieg.
6. Użyj maści do oczu, aby zapobiec wysuszeniu rogówki. Użyj kleszczy, aby uszczypnąć łapy, aby upewnić się, że nie ma lekkiej reakcji bólu.
7. Ogol włosy na czaszce za pomocą mikrogolarki. Okrężnie nakładaj peeling chirurgiczny z chlorheksydyną, zaczynając od miejsca nacięcia chirurgicznego i obracając na zewnątrz.
8. Wykonaj 3 cm nacięcie w linii środkowej skalpelem od linii obustronnej bocznej kantu bocznego do 0,5 cm za tylnym ciemiączkiem, które należy zaznaczyć markerem chirurgicznym
.
9. Użyj bawełnianego wacika, aby usunąć krew.
10. Po każdej stronie płata skóry należy umieścić kawałek taśmy chirurgicznej, aby odsłonić skórę głowy (ryc. 1).
11. Delikatnie usuń tkankę łączną z kości czaszki za pomocą bawełnianego wacika zamoczonego w 0,9% NaCl. Jeśli nie zostaną usunięte, tkanki łączne zostaną uwięzione w wierte.
12. Zidentyfikuj bregmę. Wybierz centralny punkt bregmy jako punkt początkowy i zaznacz go czarnym markerem chirurgicznym z cienką końcówką.
13. Umieść wiertło na 6.0 mm AP, 2.0 mm ML (zakres od 0.5 do 3.0 mm, Rysunek 2A).
14. Wykonaj kraniotomię (średnica 1 mm) za pomocą wiertarki automatycznej. Postępuj ostrożnie, ponieważ ten punkt znajduje się blisko zatoki żylnej.
15. Wyjmij wiertło z ramy stereotaktycznej.
16. Umieść sondę 22 G z izolowaną osłoną w ramce stereotaktycznej (Rysunek 3A). Końcówka sondy powinna być umieszczona 2 mm powyżej bliższego końca osłony (Rysunek 3A, B; Rysunek 2B).
17. Upewnij się, że osłonka wchodzi do mózgu 7 mm (7 mm DV, rysunek 2B; Rysunek 1C).
18. Przesuwaj sondę wzdłuż osłony (rysunek 1D), aż końcówka sondy znajdzie się 9 mm poniżej powierzchni mózgu (rysunek 2D).
19. Podłącz elektrody do stymulatora elektrycznego (rysunek 3C). Podłącz anodę do sondy, jak pokazano na rysunku 1D. Podłącz katodę do szczurów (zwykle do ucha szczurów).
20. Włącz stymulator elektryczny i ustaw następujące parametry: szerokość pojedynczego impulsu = 4 050 ms, napięcie = 50 V i prąd = 4 mA (rysunek 3C). Podczas stymulacji elektrycznej szczur będzie wykazywał drżenie. W tym badaniu urządzenie nie było włączane u szczurów z grupy kontrolnej używanych do testów behawioralnych, MRI i TTC.
21. Pozostaw sondę w tej pozycji na 5 minut po stymulacji.
22. Wyjmij sondę z mózgu (Rysunek 1F).
23. Użyj cementu kostnego, aby pokryć kraniotomię. Poczekaj, aż cement wyschnie przed zszyciem rany.
24. Zszyj ranę włóknami poliamidowymi 4-0. Po trzech lub czterech szwach zawiąż standardowe węzły chirurgiczne 2-1-1.
25. Wstrzyknąć szczurom penicylinę (0,25 ml, 80 j.m. rozcieńczoną w 4 ml soli fizjologicznej) dootrzewnowo, aby zapobiec infekcji.
26. Szczurom należy wstrzyknąć podskórnie meloksykam w dawce 2 mg/kg, a następnie powtarzać tę czynność co 24 godziny.
27. Monitoruj szczury co 15 minut, aż do całkowitego wybudzenia i włóż je z powrotem do klatki za pomocą poduszki grzewczej. Zapewnij swobodny dostęp do jedzenia i wody aż do złożenia ofiary.
    nuta: Wszystkie zabiegi powinny być zgodne z zasadami chirurgii aseptycznej. Przed zabiegiem należy założyć top do szorowania, maskę chirurgiczną i sterylne rękawiczki po chirurgicznym peelingu rąk. Zawsze utrzymuj sterylny materiał szwowy w sterylnym polu.

Results

Rycina 1: Zakład zawału. (A) Otwór wykonany w czaszce. (B) Osłona jest przesuwana do otworu. (C) Wstrzyknięcie osłony. (D) Wstrzyknięcie sondy. (E) Anoda (czerwona strzałka) jest podłączona. (F) Sonda jest wyjęta. (G) Otwór (czerwona strzałka) pozostawiony w powierzchni mózgu.

<...

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Ssanie 4-0	Szanghaj Jinzhong		Chirurgicznych
taśma klejąca	Szanghaj Jinzhong		Chirurgicznych
System znieczulenia zwierząt	Rwd		Nosić maskę podczas korzystania z systemu
Cement kostny	Szanghaj Jinzhong		Instrument chirurgiczny
Utwardzony zacisk	Szanghaj Jinzhong		Instrument chirurgiczny
Ogólne nożyczki do tkanek	Szanghaj Jinzhong		Instrument chirurgiczny
IndoPhors (IndoPhors)	Guoyao z Chin		sterylizacja
Izofluran	Rwd	217181101
Urządzenie do tworzenia zmian chorobowych	Szanghaj Yuyan		Wykonanie zmiany chorobowej
System rezonansu magnetycznego	Bruker Biospin		Potwierdzenie zawału in vivo
Uchwyt na igłę	Szanghaj Jinzhong		Instrument chirurgiczny
Penicilin	Guoyao z Chin		Zapobieganie zakażeniom
Sondy	Anke powiedział:		Potrzebujesz pewnej modyfikacji
Końcówki Q	Szanghaj Jinzhong		Instrument chirurgiczny
Nożyczki do strzyżenia	Szanghaj Jinzhong		Instrument chirurgiczny
Aparatura stereotaktyczna	Rwd
Igła do szycia	Szanghaj Jinzhong		Instrument chirurgiczny
Urządzenia do zatrzymywania tkanek	Szanghaj Jinzhong		Instrument chirurgiczny
Ttc	Sigma-Aldrich	BCBW5177	Do potwierdzenia zawału in vitro