Indukcja mikrokrwotoków mózgowych w modelu szczurzym przy użyciu lipopolisacharydu

Abstract

Źródło: Li, D., et al. Podostre mikrokrwotoki mózgowe wywołane wstrzyknięciem lipopolisacharydu u szczurów. J. Vis. Exp. (2018).

Ten film pokazuje proces wywoływania zaburzeń bariery krew-mózg (BBB) i mikrokrwotoków mózgowych w modelu szczurzym przy użyciu lipopolisacharydu (LPS). Podkreśla sekwencję odpowiedzi immunologicznych, które prowadzą do zwiększonej przepuszczalności BBB, a następnie uszkodzenia tkanki mózgowej.

Protocol

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Materiały

1. Przygotowanie iniekcji LPS
   1. Dodać 25 ml wody destylowanej do 25 mg proszku LPS pochodzącego z Salmonella typhimurium do końcowego stężenia 1 mg/ml. Wstrzyknięcie należy przechowywać w sterylnej probówce o temperaturze 4 °C.
      ostrożność: LPS jest toksyczny.

2. Zwierzęta

1. Podawać LPS samcom szczurów Sprague-Dawley (SD) w wieku 10 tygodni (średnia waga: 280 ± 20 g) we wstrzyknięciu dootrzewnowym.
   ostrożność: Jeśli szczury są kupowane od innej organizacji, faza adaptacyjna nie powinna trwać krócej niż 7 dni.

3. Zastrzyki LPS

1. Każdemu szczurowi należy wstrzyknąć LPS dootrzewnowo w dawce 1 mg/kg mc. i umieścić szczury z powrotem w klatce domowej.
   nuta: Znieczulenie nie jest konieczne.
2. Sześć godzin później wstrzyknij szczurom tę samą dawkę zastrzyku LPS.
3. Szesnaście godzin później wstrzyknij szczurom tę samą dawkę LPS.
   ostrożność: Wstrzykiwanie szczurom z SD LPS w dawce 1 mg/kg mc. może spowodować 5% śmiertelność. Śmiertelność może jeszcze bardziej wzrosnąć u młodszych lub starszych szczurów lub ciężarnych samic szczurów.
4. Po wstrzyknięciu LPS należy umieścić szczury w klatkach i zapewnić im dostęp do jedzenia i picia ad libitum.
   nuta: Szczury będą wykazywać wyraźną ogólnoustrojową reakcję zapalną, a zatem klatki muszą pozostać czyste przez cały czas trwania eksperymentu. Szczury powinny być często (2x dziennie) monitorowane pod kątem masy ciała, ogólnego wyglądu i postawy po pierwszym wstrzyknięciu LPS. Jeśli szczury zaczną wykazywać zgarbioną postawę, niechęć do poruszania się, znaczną utratę masy ciała (>20%) lub barwienie porfiryną, powinny zostać humanitarnie poddane eutanazji przed 7-dniowym punktem końcowym badania.

Materials

List of materials used in this article

Name	Company	Catalog Number	Comments
Lps	Sigma-Aldrich	L-2630	do indukcji stanu zapalnego
Bufor fosforanowy soli fizjologicznej (PBS)	Solarbio (Słoneczna Biologia	Zobacz materiał P1022	rodzaj roztworu buforowego powszechnie stosowanego w eksperymencie