Technika zadawania urazowego uszkodzenia mózgu u muchówek Drosophila

Streszczenie

Źródło: Sun, M., et al. A Novel Method to Model Chronic Traumatic Encephalopathy in Drosophila. J. Vis. Exp. (2017).

Ten film demonstruje procedurę zadawania obrażeń urazu głowy u znieczulonych muchówek Drosophila za pomocą urządzenia uderzeniowego z impaktorem napędzanym gazem. Uraz wpływa na funkcje neuronów i upośledza zdolność chodzenia.

Protokół

1. Montaż urządzenia uderzeniowego (Rysunek 1)

1. Wyjąć tłok ze strzykawki tuberkulinowej o pojemności 1 ml. Przeciąć beczkę na znaku 1 ml.
2. Usunąć barierę aerozolową (3 mm wysokości x 4 mm średnicy) z końcówki pipety o pojemności 200 μl i użyć jej jako udaru. Umieścić impaktor w cylindrze strzykawki. Delikatnie postukaj w cylinder, aby przesunąć impaktor do końca końcówki, płaską stroną zakrywając otwór dyszy.
3. Przymocuj końcówkę lufy do plastikowej rurki, która jest podłączona do regulatora przepływu dwutlenku węgla (CO₂) stacji anestezjologicznej Drosophila.
4. Trzymaj lufę pionowo i clamp ją do standardowego stojaka clamp holder, tak aby impaktor pozostał na dnie lufy.
5. Zmodyfikuj końcówkę pipety o pojemności 200 μl, aby uzyskać uchwyt na muchy.
   1. Wytnij 4 mm od końcówki, aby zrobić otwór o średnicy 0,8 mm, pozwalając na odsłonięcie tylko główki muchy.
      UWAGA: Klatka piersiowa i wszystkie inne części korpusu muchy pozostaną wewnątrz końcówki pipety.
6. Zmodyfikuj końcówkę pipety o pojemności 1 000 μl i nasadkę igły strzykawkowej o pojemności 1 ml, aby utworzyć łącznik.
   1. Odciąć 44 mm od otworu końcówki. Weź nasadkę na igłę strzykawki o długości 6 mm i wciśnij ją mocno w pozostały segment końcówki pipety o pojemności 1 000 μl.

2. Działanie urządzenia uderzeniowego

1. Znieczulij pojedynczą 2-dniową dorosłą samicę muchy za pomocą CO₂ na podkładce przeciwmuchowej.
2. Delikatnie przenieś go do uchwytu na muchy za pomocą cienkiej szczoteczki. Delikatnie postukaj w uchwyt, tak aby głowica muchy była widoczna na zewnątrz końcówki. Jeśli trąbka muchowa jest odsłonięta na zewnątrz końcówki, delikatnie wsuń ją z powrotem do końcówki za pomocą igły strzykawkowej o pojemności 1 ml.
   nuta: Upewnij się, że trąba muchowa jest trzymana w uchwycie. W przeciwnym razie mucha może umrzeć z powodu urazu trąbki ssącej.
3. Dokręcić uchwyt muchowy do cylindra strzykawki za pomocą łącznika tak, aby głowica muchy była skierowana w dół.
4. Ustaw ciśnienie gazu na 100 kPa. Dostosuj natężenie przepływu zgodnie z projektem eksperymentu.
5. Szybko włączaj i wyłączaj przełącznik regulatora przepływu, aby impaktor uderzył raz w głowicę muchy.
6. Podnieś uchwyt na muchy i przesuń go nad podkładką na muchy. Odwróć uchwyt na muchę i delikatnie postukaj w bok, aby wypuścić muchę. Pozostawić muchę w pustej fiolce do wyzdrowienia.

Wyniki

Rysunek 1. Schemat urządzenia uderzeniowego. W urządzeniu wykorzystano materiały, które są łatwo dostępne w laboratorium Drosophila: 1) końcówkę pipety o pojemności 200 μl, 2) strzykawkę tuberkulinową o pojemności 1 ml, 3) impaktor, 4) rurkę łączącą podłączoną do stacji anestezjologicznej Drosophila oraz 5) łącznik do dokręcenia końcówki do strzykawki.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Bariera aerozolowa	USA Naukowe	Numer katalogowy: 1120-8810	Używany jako impaktor
Końcówka do pipet 200 ul	USA Naukowe	Numer katalogowy: 1111-0706	Używany jako uchwyt na muchę
Końcówka do pipet 1000 ul	USA Naukowe	Lata 1122-1830	Używany jako łącznik
1 ml strzykawka tuberkulinowa	Becton Dickinson	309625
60 mm szalki Petriego	Fisher Naukowy	FB0875713A	Używany jako areny śledzące
Regulator przepływu	Genesee Scientific	59-122WC
Standardowy uchwyt zaciskowy / stojak	EISCO Naukowy	CH0688
Drobny pędzel	Genesee Scientific	59-204 Rozdział 19-204
Poduszka muchowa	Genesee Scientific	59-114

powiedział: powiedział: