$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Opieka nad zwierzętami
- W tym eksperymencie użyj 5- do 6-tygodniowych samców myszy C57BL/6J (20-25 g wagi).
- Utrzymuj myszy w cyklu 12 godzin/12 godzin światła/ciemności i upewnij się, że otrzymują jedzenie i wodę ad libitum. Zapewnij takie same ilości jedzenia i wody zarówno grupie pozorowanej, jak i TBI przez cały czas trwania badania.
- Dołoż wszelkich starań, aby zminimalizować ból i dyskomfort zwierzęcia.
2. Indukcja urazowego uszkodzenia mózgu
- Wstrzyknąć ketaminę (80-100 mg/kg)/ksylazynę (10 mg/kg) IP do znieczulenia. Przetestuj głębokość znieczulenia za pomocą odruchu wzrokowego lub odruchu bólowego. Używaj sztucznych łez lub nawilżającej maści do oczu, aby zapobiec wysuszeniu oczu.
- Po znieczuleniu ułóż mysz w pozycji leżącej. Użyj poduszki grzewczej o kontrolowanej temperaturze, aby utrzymać temperaturę 37 °C podczas zabiegu i przez 30 minut po TBI.
- Ogol włosy w miejscu nacięcia.
- Zdezynfekuj skórę głowy 70% etanolem za pomocą trzech naprzemiennych peelingów, a następnie nacinaj skórę głowy w płaszczyźnie strzałkowej.
- Użyj kleszczy, aby cofnąć nacięcie po obu stronach i lekko oddzielić okostną.
- Za pomocą markera narysuj okrąg (o średnicy 3 mm) w prawej okolicy ciemieniowej czaszki, w odległości 2 mm od linii środkowej.
- Wywierć czaszkę wiertarką elektryczną. Upewnij się, że ten krok jest wykonywany ostrożnie, aby chronić oponę twardą przed uszkodzeniem.
- Usuń płat kostny i odsłoń małe okienko kostne (o średnicy 3 mm).
- Umieść plastikową kaniulę (średnica wewnętrzna = 2,5 mm, długość = 8 mm) nad kraniotomią i przymocuj kaniulę do czaszki za pomocą akrylu dentystycznego.
- Napełnij kaniulę sterylnym 0,9% NaCl (sól fizjologiczna) za pomocą strzykawki (5 ml), aby upewnić się, że w kaniuli nie ma pęcherzyków.
- Włącz oscyloskop i amplifier i upewnij się, że rura wysokociśnieniowa urządzenia LFPI jest wolna od pęcherzyków powietrza. Przetestuj urządzenie, dostarczając około 10 impulsów, aż da stały sygnał. Dostosuj kąt położenia początkowego wahadła, aby osiągnąć intensywność impulsu około 2.0 atm.
- Podłącz kaniulę urazową do urządzenia LFPI. Wywołaj uszkodzenie mózgu, pociągając za spust i zwalniając wahadło. Następnie uzyskaj impuls i prześlij go do opony twardej przez cały zamknięty system rurek wypełnionych płynem.
- Operuj myszy w grupie pozorowanej za pomocą tej samej procedury chirurgicznej. Nie wykonuj LFPI.