Artykuł metodologiczny

Indukcja wad rozwojowych jamistych mózgu za pośrednictwem Cre-LoxP w modelu mysim

8 lipca 2025

W tym artykule

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Źródło: Choi, J. P., et al. Indukcja i obrazowanie mikro-tomografią jamistych malformacji mózgu w modelu mysim. J. Vis. Exp. (2017)

W tym filmie, genetycznie zmodyfikowane mysie szczenię z genem Ccm2 otoczonym miejscami loxP i rekombinazą Cre połączonej z receptorem estrogenowym jest używane do wywoływania mózgowych malformacji jamistych (CCM). Podanie 4-hydroksytamoksyfenu aktywuje Cre w komórkach śródbłonka, prowadząc do delecji Ccm2 i powstania CCM w mózgu.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny komitet ds. opieki nad zwierzętami oraz komisję weterynaryjną JoVE.

1. Indukcja malformacji jamistych mózgu lub CCM w modelach mysich

  1. Krzyż CDH5-CreErt2; Ccm2fl/fl myszy z Ccm2fl/fl do generowania miotów z Cdh5-CreErt2; Ccm2fl/fl (Ccm2iECKO) młode i kontrolne z miotu (Ccm2fl/fl). Zwierzęta Cdh5-CreErt2 i Ccm2fl/fl zostały już wcześniej opisane19.
  2. Rozpuścić 4HT w 100% etanolu i przechowywać w temperaturze -80 °C w podwielokrotnościach 30 μl 4-hydroksytamoksyfenu(4HT) (stężenie: 10 mg/ml). W dniu stosowania rozcieńczyć porcję 4HT w oleju kukurydzianym (0,5 mg/ml).
  3. Wstrzyknąć dożołądkowo 50 μl 4HT (0,5 mg/ml) nowonarodzonym szczeniętom w P1 w celu wywołania eksperymentalnych zmian CCM za pomocą strzykawki insulinowej.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
Nie stwierdzono konfliktu interesów.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
4-hydroksytamoksyfenSigma-AldrichZobacz materiał H6278Aby aktywować Cdh5-CreErt2
Olej kukurydzianySigma-AldrichZobacz materiał C8267-500MLDo rozcieńczania 4-hydroksytamoksyfenu
Strzykawka insulinowa

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

System Cre LoxPdelecja genu CCM2specyficzno dla kom rek r db onkaindukcja 4 hydroksytamoksyfeneminiekcja dokana owarekombinacja genetycznastabilno naczy krwiono nychpowstawanie zmian naczyniowych

Powiązane artykuły