Indukcja krwotoku podpajęczynówkowego w modelu mysim poprzez perforację wewnątrznaczyniową

Streszczenie

Źródło: Liu, S., et al. Model perforacji wewnątrznaczyniowej krwotoku podpajęczynówkowego w połączeniu z obrazowaniem metodą rezonansu magnetycznego (MRI).J. Vis. Exp. (2021).

Film pokazuje indukcję krwotoku podpajęczynówkowego poprzez perforację wewnątrznaczyniową w modelu mysim. Wykonuje się nacięcie w okolicy szyi znieczulonej myszy, aby uzyskać dostęp do wspólnej tętnicy szyjnej i jej rozwidlenia. Włókno jest wprowadzane przez tętnice w celu perforacji gałęzi tętnicy wewnątrzczaszkowej, wywołując krwotok podpajęczynówkowy.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Przygotowanie zwierząt

1. Wywołać znieczulenie, wstrzykując ketaminę (70 mg/kg) i ksylazynę (16 mg/kg) dootrzewnowo. Utrzymują prawidłową temperaturę ciała, przyczyniając się do szybkiej indukcji głębokiego znieczulenia. Przetestuj odpowiednią sedację za pomocą bodźca bólowego, takiego jak uszczypnięcie palca u nogi, i sprawdź brak reakcji.
2. Ostrożnie ogol włosy na szyi myszy maszynką do golenia, oczyść je 70% etanolem, a następnie betadyną/chlorheksydyną i nałóż 1% lidokainy na powierzchnię skóry w celu miejscowej kontroli bólu.
3. Umieść mysz w pozycji leżącej. Użyj taśmy, aby przymocować kończyny i ogon, delikatnie rozciągając skórę szyi na przeciwną stronę zabiegu. Jednocześnie lekko unieś szyję.
4. Stosować maść okulistyczną (np. 5% dekspantenol), aby zapobiec odwodnieniu oczu podczas operacji.

2. Indukcja SAH

1. Otwórz skórę szyi sterylnym skalpelem, od podbródka do górnej krawędzi mostka (1,5 cm) i tępo oddziel gruczoły ślinowe od otaczającej je tkanki łącznej.
2. Oddziel grupę mięśni wzdłuż jednej strony [w tym przypadku prawej strony] tchawicy, odsłaniając osłonkę tętnicy szyjnej wspólnej (CCA) pokrytą odżywczymi naczyniami krwionośnymi i żyłkami. CCA i nerwy znajdują się w bliskiej odległości od siebie.
3. Odłącz CCA i zostaw wolne 8-0 jedwabny szew wokół CCA bez wcześniejszego podwiązania. Zwróć uwagę na ochronę nerwu błędnego, ponieważ łatwo ulega on uszkodzeniu (ryc. 1A).
4. Potrójne rozwidlenie CCA, tętnicy szyjnej wewnętrznej (ICA) i tętnicy szyjnej zewnętrznej (ECA) jest widoczne wzdłuż dolnej tylnej jednej trzeciej diastazy. Rozciąć dystalny koniec ECA i podwiązać naczynie dwa razy dalej na boki, jak to możliwe.
5. Odłączyć ECA w środku podwójnie podwiązanego segmentu, tworząc kikut naczynia.
6. Wstępnie ustaw jedno podwiązanie filamentu wokół kikuta ECA, nie zamykaj go, dopóki nie zostanie pomyślnie włożony filament.
7. Użyj szwu lub mikroklipsa, aby tymczasowo zamknąć ICA i CCA (ryc. 1B).
8. Wykonaj małe nacięcie (około połowy średnicy ECA) w ECA za pomocą nożyczek mikronaczyniowych. Włóż filament prolenowy 5-0 (alternatywnie 4-0) do ECA i wsuń go do CCA.
9. Lekko zamknij ligaturę na ECA, jednocześnie poluzowując mikroklips na ICA i CCA (Rysunek 1C).
10. Delikatnie pociągnij żarnik do tyłu i wyreguluj kikut ECA w kierunku czaszki, wnikając włókno przez rozwidlenie do ICA (rysunek 1D).
11. Skieruj końcówkę filamentu przyśrodkowo pod kątem ~30° do linii środkowej tchawicy i ~30° do płaszczyzny poziomej. Wepchnij filament do przodu do wnętrza ICA. Po osiągnięciu rozwidlenia tętnicy mózgowej przedniej (ACA) - tętnicy środkowej mózgu (MCA) występuje opór (~9 mm).
12. Przesuń filament o 3 mm dalej, perforując prawy ACA. Natychmiast wycofaj włókno do kikuta ECA, umożliwiając przepływ krwi do przestrzeni podpajęczynówkowej.
13. Utrzymuj żarnik w tej pozycji przez około 10 s (Rysunek 1E). Obecność drżenia mięśni, ipsilateralnej zwężenia wężnicy, trudności z oddychaniem, zmienionego rytmu serca i nietrzymania moczu może być dowodem na udaną operację.
14. Tymczasowo zamknij CCA, aby uniknąć nadmiernej utraty krwi. Natychmiast wyciągnij włókno i podwiąż ECA za pomocą wcześniej ustalonego szwu. Ponownie otwórz CCA i pozwól na reperfuzję i dalszy wysięk krwi do przestrzeni podpajęczynówkowej (ryc. 1F).
15. Po sprawdzeniu, czy nie ma wycieku krwawienia, zdezynfekuj skórę otaczającą ranę, aby zapobiec pooperacyjnym infekcjom skóry, a następnie zszyj ranę niewchłanialnym szwem z włókna poliestrowego 4-0.
16. Umieść mysz w pudełku termicznym do czasu odzyskania przytomności. Poczekaj, aż zwierzę w pełni się obudzi i upewnij się, że odzyskało wystarczającą świadomość, aby utrzymać pozycję leżącą mostka. Nie zwracaj zwierząt do towarzystwa innych myszy, dopóki w pełni nie wyzdrowieją.
17. Podawać paracetamol w dawce 200-300 mg/kg masy ciała w celu złagodzenia bólu pooperacyjnego.
18. Sprawdzaj myszy codziennie po zabiegu.

Wyniki

Rycina 1: Obrazy techniki chirurgicznej krok po kroku.(A) Przedstawienie odsłoniętej anatomii prawej tętnicy szyjnej: zidentyfikowano CCA i jego rozwidlenie na ICA i ECA, a także małe gałęzie ECA (OA i STA). (B) ECA jest mobilizowany z otaczającej tkanki i podwiązywany dwoma szwami przed jego przecięciem. Trzecie podwiązanie należy umieścić luźno w pobliżu rozwidlen...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Krem pod oczy	Bayer	815529836	Bepanthen powiedział:
Szew podwiązany (5-0)	Smi		Jedwabna czerń USP
Źródło światła do mikroskopu	Zeiss	Dioda LED CL 6000
Ketamina	CP-pharma	797-037	100 mg/ml
Paracetamol (40 mg/ml)	bene Arzneimittel	4993736
Filament prolenowy (5-0)	Erhicon powiedział:	EH7255
brzytwa	Wella	Zobacz materiał HS61
Instrument chirurgiczny (drobne nożyczki)	Certyfikat FST	Numer katalogowy: 14060-09
Narzędzie chirurgiczne (kleszcze#1)	AESCULAP	FM001R
Narzędzie chirurgiczne (kleszcze#2)	AESCULAP	FD2855R
Narzędzie chirurgiczne (kleszcze#3)	Hammacher powiedział:	HCS 082-12
Narzędzie chirurgiczne (uchwyt na igłę)	Certyfikat FST	Numer katalogowy 91201-13
Instrument chirurgiczny (nożyczki sprężynowe Vannas)	Certyfikat FST	Numer katalogowy: 15000-08
Mikroskop chirurgiczny	Zeiss	Stemi 2000 C
Szew raniący(4-0)	Erhicon powiedział:	Zobacz materiał CB84D
Xylavet	CP-pharma	Nr kat. 797-062	20 mg/ml