Demielinizacja i remielinizacja neuronów rdzenia kręgowego myszy

Streszczenie

Źródło: Keough, M. B., i wsp. Eksperymentalna demienizacja i remielinizacja mysiego rdzenia kręgowego przez ogniskowe wstrzyknięcie lizolecytyny. J. Vis. Exp. (2015)

Ten film przedstawia metodę indukowania demielinizacji w neuronach rdzenia kręgowego myszy za pomocą wstrzyknięć lizolecytyny, a następnie remielinizacji poprzez migrację i różnicowanie komórek prekursorowych oligodendrocytów. Proces ten upośledza, a następnie stopniowo przywraca transmisję sygnału neuronalnego.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Przygotuj strzykawkę do wstrzyknięcia

1. Rozpuścić lizolecytynę w 1% roztworze w roztworze soli fizjologicznej buforowanym fosforanami (PBS; pH 7,4) i przechowywać w temperaturze -20 °C w małych porcjach (75 μl). Rozmrozić fiolkę do temperatury pokojowej (RT).
   UWAGA: Jeśli lizolecytyna nie jest rozpuszczona, sonikuj probówkę w myjce ultradźwiękowej (40 kHz) przez około 30 minut, aby uzyskać jednolity roztwór. ....

Wyniki

Rysunek 1. Montaż strzykawki do wstrzykiwań. (A) Nakrętkę strzykawki do wstrzykiwania nakręca się na płaski koniec szklanej kapilary, a następnie na dwie końcówki w taki sposób, że ich współpracujące końce zazębiają się. Gdy kapilara jest mocno dopasowana do stożkowej tulejki, zespół jest ręcznie przykręcany do końca strzykawki do wstrzykiwania. (B) Odłóż środek gumowego krążka za pomocą metalowej i.......

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Nożyczki sprężynowe	Narzędzia Naukowe	15004-08
Kleszcze	Narzędzia Nauk Pięknych	11254-20
Zwijacz	Narzędzia Naukowe	17003-03
Maszynki do strzyżenia	Philips	QG3330
Komora odzysku ciepła	Usługi Peco	V1200
Taśma chirurgiczna	3M	1527-1
Rękojeść skalpela	Narzędzia Naukowe	10003-12
Ostrze skalpela	Pióro	Nr 15
Włócznia z gąbki	Bóbr Visitec	581089
5-0 Szwy Vicryl	Ethicon	J511G
Zakrzywione nożyczki sprężynowe ToughCut	Narzędzia Naukowe	15123-12
Metalowa igła o grubości 32	BD	305106
Uchwyty do igieł	Narzędzia Nauk Pięknych	12002-14
Kleszcze kątowe	Narzędzia Naukowe	11251-35
Aplikator z bawełnianą końcówką	Purytanin	806-WC
Gaziki	Bezpieczna pierwsza pomoc krzyżowa	3763
10 μL strzykawka	Hamilton	7635-01	Upewnij się, że kupujesz strzykawkę mikrolitrową, a nie gazoszczelną
Złączka zaciskowa	Hamilton	55750-01	Zawiera 2 tulejki i zdejmowaną nakrętkę, ale nakrętka dołączona do strzykawki o pojemności 10 μl jest ciaśniej dopasowana
Zestaw do gruntowania	Hamilton	PRMKIT	Zawiera strzykawkę do zalewania, wyjmowaną igłę piasty i gumowe krążki
Wstępnie naciągnięte szklane kapilary	WPI	TIP10TW1 (opakowanie 10 szt)	Zawiera kapilary o średnicy wewnętrznej 10 μm. Działa również średnica wewnętrzna 30 μm (TIP30TW1)
Ramka stereotaktyczna	David Kopf instrumenty	Model 900
Myjka ultradźwiękowa	Fisher Scientific	FS-20
Szkiełka mikroskopowe	VWR	48311-703
Mikroskop jasnego pola	Olimp	BX51
Lizofosfatydylochoina	Sigma	L1381
PBS	Oxoid	BR0014
Alkohol izopropylowy	Sigma	109827
Ketamina	CDMV
Ksylazyna	CDMV
Jod	Zachodnie Penetone	2021
Wazelina wazelinowa	VWR	CA05971