Współczulne unerwienie tętnic nerkowych w mysim modelu nadciśnienia indukowanego angiotensyną II

W tym artykule

Streszczenie

Źródło: Wang, M., et al., Poprawa denerwacji nerek złagodziła nadciśnienie wywołane infuzją angiotensyny II. J. Vis. Exp. (2022)

Ten film przedstawia procedurę odnerwienia współczulnego tętnicy nerkowej w mysim modelu nadciśnieniowym indukowanym angiotensyną II, wykorzystującą fenol do zakłócenia funkcji nerwu współczulnego i obniżenia ciśnienia krwi.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Obustronne odnerwienie nerek

Wybierz myszy z podwyższonym ciśnieniem krwi (BP) ≥140/90 mmHg lub 25% wzrostem skurczowego ciśnienia tętniczego/rozkurczowego ciśnienia krwi, 1 tydzień po infuzji Ang II.
Zapisz masę ciała zwierzęcia przed operacją i wybierz zwierzęta o minimalnej wadze 24 g do operacji odnerwienia nerek.
Znieczulij myszy za pomocą pentobarbitalu sodu. Potwierdź głębokość znieczulenia za pomocą ujemnego odruchu szczypania palca u nogi.
Usuń włosy na brzuchu za pomocą golarki. Wykonaj tę procedurę ostrożnie i dokładnie, aby uniknąć zanieczyszczenia chirurgicznego.
Umieść myszy na stole operacyjnym, trzymając brzuch w górze, i przymocuj jego kończyny taśmą. Zdezynfekuj skórę brzucha jodonem powidonu, a następnie użyj trzech chusteczek z 70% etanolem.
Wykonaj 2 cm brzuszne nacięcie brzucha w linii środkowej za pomocą ostrza skalpela. Odciągnąć jelito gazą nasączoną solą fizjologiczną o temperaturze 37 °C, aby odsłonić lewą tętnicę nerkową. Ostrożnie, ale tępo wypreparuj tłuszcz z tętnicy nerkowej za pomocą zakrzywionej pęsety. (Rysunek 1A-C).
Pokrój papier wagowy na prostokąt o tym samym rozmiarze co tętnica nerkowa sterylnymi ostrymi nożyczkami. Dla porównania, przytnij papier wagowy w tym samym rozmiarze, jak pokazano na przerywanej linii na Rysunek 1C.
UWAGA: Krytyczną częścią operacji jest próba przecięcia kilku kawałków papieru do ważenia na raz, aby zachować ten sam kształt.
Zanurz papier wagowy w 10% roztworze fenolu/etanolu na co najmniej 30 sekund. Przykryj powierzchnię lewej tętnicy nerkowej i owiń naczynie papierem wagowym, trzymając je przez 2 minuty (Rysunek 1D). Użyj gazy, aby chronić otaczające tkanki, aby zapobiec dotykaniu przez bibułę ważenia otaczającej nerki i jelita.
UWAGA: Roztwór fenolu jest stabilny w plastikowych probówkach, ale nie w szklanych fiolkach. Dlatego roztwór musi być świeżo przygotowany do każdego eksperymentu.
Wykonaj tę samą procedurę dla prawej tętnicy nerkowej. Wykonaj pozorowaną operację za pomocą papieru wagowego zanurzonego w soli fizjologicznej.
Ustaw mięśnie w ich początkowej pozycji i zamknij otrzewną szwami 6-0 Vicryl w przerywanym szwie. Następnie zamknij skórę przerwanymi nylonowymi szwami 4-0. Monitoruj wszystkie myszy, aż do całkowitego wyzdrowienia.

2. Opieka pooperacyjna

Nałóż jod powidonu na nacięcie i umieść zwierzę w ciepłym kocu elektrycznym w celu rekonwalescencji i monitorowania pooperacyjnego.
Monitoruj myszy dwa razy dziennie, aby ocenić zaczerwienienie, obrzęk i ból lub infekcję jamy brzusznej. Meloksykam (0,5 mg/kg mc., SC) należy podać wszystkim myszom około 1 godziny przed i 24 godziny po zabiegu RDN.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

figure-results-1
Rysunek 1: Procedura RDN z papierem do ważenia. (A,B) Obrazy anatomiczne tętnicy nerkowej myszy C57BL/6 (ex vivo). (C) Część znajdująca się w obrębie dwóch przerywanych linii odnosi się do obszaru pokrytego papierem do ważenia. (D) Pokrycie powierzchni obustronnej tętnicy nerkowej odpowiednim papierem wagowym zanurzonym w 10% roztworze feno...