Stereotaktycznie sterowana technika ablacji do usuwania kory słuchowej u szczurów

Wszystkie procedury dotyczące modeli zwierzęcych zostały sprawdzone przez lokalny instytucjonalny komitet opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Przygotowanie Szczura

UWAGA: Przeprowadziliśmy eksperymenty na samcach szczurów, aby uniknąć jakichkolwiek zmian hormonalnych.

1. Znieczulić zwierzę za pomocą mieszaniny chlorowodorku ketaminy (30 mg/kg) i chlorowodorku ksylazyny (5 mg/kg) wstrzykiwanego domięśniowo; przy tej dawce szczur powinien być głęboko znieczulony przez około 1 godzinę.
2. Uszczypnij szczura w palec u nogi; brak odruchu wycofania wskazuje, że zwierzę jest całkowicie nieprzytomne. Jeśli szczur zareaguje na uszczypnięcie, należy podać dodatkowe znieczulenie w jednej trzeciej początkowej dawki.
3. Ogolić skórę głowy i zdezynfekować obszar operacyjny jodonem powidonu.
4. Umieść zwierzę na poduszce grzewczej, aby utrzymać temperaturę 38 °C i ustabilizuj głowę zwierzęcia w stereotaktycznej ramie za pomocą dwóch nauszników i pręta do gryzienia. Zachowaj ostrożność, aby uniknąć przekłuwania błony bębenkowej nausznikami.
5. Chroń oczy, nakładając kroplę żelu okulistycznego lub serum soli fizjologicznej na każde oko.

2. Lokalizacja AC w kości skroniowej szczura

1. Za pomocą skalpela wykonaj nacięcie wzdłuż linii środkowej, aby odsłonić czaszkę i cofnąć okostną pokrywającą powierzchnię czaszki.
2. Użyj sterylnej bawełnianej końcówki, aby delikatnie usunąć krew pokrywającą powierzchnię czaszki, aby uwidocznić bregmę, lambdę i międzyuszne 0 zgodnie z atlasem Paxinosa i Watsona mózgu szczura.
3. Wykonaj nacięcie w mięśniu skroniowym w pobliżu jego przyczepu grzbietowego na czaszce za pomocą skalpela. Wyciągnij mięsień za pomocą igły i materiału do szycia i przymocuj materiał szwu do ramy stereotaktycznej; Spowoduje to odsłonięcie kości skroniowej. Jeśli wystąpi krwawienie, spłucz zimnym sterylnym roztworem soli fizjologicznej.
4. Umieść sterylną prostą igłę w stereotaktycznym mikromanipulatorze, upewniając się, że jest w pełni zabezpieczona.
5. Powoli opuść igłę, aż znajdzie się tuż nad powierzchnią czaszki, tak aby końcówka igły była ustawiona na 0 międzyuszne. Ustaw ten punkt jako zero i określ współrzędne od tego punktu.
6. W zależności od obszaru zainteresowania mózgu zmieniaj współrzędne stereotaktyczne. Określ te współrzędne, korzystając z atlasu Paxinos i Watsona mózgu szczura. Po ustaleniu współrzędnych przesuń igłę, aby dopasować te współrzędne.
7. Celuj w AC, używając współrzędnych następujących czterech punktów: A: przednio-tylny (A/P) = -5,8 mm, przyśrodkowo-boczny (M/L) = +/- 6,4 mm; B: A/P= -2,7 mm, M/L= +/- 6,4 mm; C: A/P= -2,7 mm, M/L= +/- 8,67 mm; D: A/P = -5,8 mm, M/L= +/- 8,67 mm. Opuść igłę tuż nad kością skroniową, aby uwidocznić każdy z tych czterech punktów. Za pomocą markera zaznacz punkty na kości skroniowej i połącz je, aby narysować prostokąt; prostokąt posłuży jako przewodnik do otwarcia okna w kości (ryc. 1).

3. Chirurgiczne odsłonięcie AC

1. Otwórz okno za pomocą wiertarki elektrycznej i małego wiertła (Ø 0,6 mm). Wywierć obwód prostokąta z prędkością 8,000 obr./min, aż kość się podda. Schłodzić powierzchnię wiercenia, spłukując zimną sterylną solą fizjologiczną, aby zapobiec uszkodzeniu struktur podkorowych. Kiedy kość ustępuje, można wykryć spadek oporu. Uważaj, aby nie wiercić mózgu.
2. Gdy brzegi są luźne, podciągnij kość pokrywającą za pomocą cienkich kleszczy i przechowuj ją w zimnym sterylnym roztworze soli fizjologicznej.

4. Ablacja AC

1. Za pomocą mikroskopu chirurgicznego (10X) delikatnie odetnij opony mózgowe nożem mikrochirurgicznym i usuń je za pomocą dwóch drobno zakończonych kleszczy. Jeśli wystąpi krwawienie, spłucz zimnym sterylnym roztworem soli fizjologicznej.
2. Delikatnie zassać klimatyzator za pomocą ssącego urządzenia chirurgicznego (ciśnienie -0,24 bara) połączonego ze sterylną igłą o tępej końcówce 20 G. Ten punkt jest krytyczny i należy go wykonać bardzo ostrożnie: odessać tylko sześć warstw korowych, a nie leżącą pod spodem istotę białą.
3. Zasysać, aż perforujące tętnice przestaną krwawić.
4. Po zakończeniu aspiracji przykryj uszkodzony obszar pobraną kością i przyłóż wchłanialną gazę hemostatyczną.
5. Pozwól, aby mięsień skroniowy odzyskał swoją pierwotną pozycję, a następnie zszyj skórę za pomocą klipsów do ran (9 mm). Zastosuj maść z antybiotykiem. Kontynuuj nakładanie maści na ranę dwa razy dziennie przez trzy dni.
   UWAGA: Każda aplikacja składa się z cienkiej warstwy nakładanej na ranę.
6. Buprenorfinę należy wstrzykiwać podskórnie w grzbiet szczura (0,05 mg/kg) jako środek przeciwbólowy 1 godzinę po zabiegu, a następnie co 8 godzin przez 72 godziny.
7. Trzymaj zwierzę na poduszce grzewczej, dopóki się nie obudzi i włóż je z powrotem do klatki w pomieszczeniu, aby mogło dojść do siebie.

Rycina 1: Obrazy kości skroniowej szczura w trzech różnych etapach chirurgicznych. (A) Przeniesienie współrzędnych stereotaktycznych prądu przemiennego do kości skroniowej. Współrzędne czterech punktów to: A: A/P= -5,8 mm, M/L= +/- 6,4 mm; B: A/P= -2,7 mm, M/L= +/- 6,4 mm; C: A/P= -2,7 mm, M/L= +/- 8,67 mm; D: A/P= -5,8 mm, M/L= +/- 8,67 mm. (B) Współrzędne służą jako odniesienie do narysowania prostokąta na powierzchni kości skroniowej, który będzie kierował otwarciem okna. (C) Pokazuje okno otwarte w kości po wierceniu. Opony mózgowe z naczyniami krwionośnymi można zaobserwować na powierzchni mózgu. R: rostralny, D: grzbietowy.