Technika wywoływania napadów pourazowych w modelu mysim za pomocą urazu urazowego spowodowanego spadkiem masy ciała

Streszczenie

Źródło: Shandra, O. et al., Wywoływanie padaczki pourazowej w mysim modelu powtarzalnego rozlanego urazowego uszkodzenia mózgu. J. Vis. Exp. (2020)

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Procedura spadku wagi

1. Umieść mysz w komorze indukcyjnej. Ustaw przepływ tlenu i próżni na 1 l/min, a poziom izofluranu na 3%−5%. Znieczulaj mysz przez 5 minut.
2. Wyjmij mysz z komory indukcyjnej i umieść ją na podkładce piankowej. Sprawdź, czy nie ma reakcji na uszczypnięcie palca u nogi lub ogona.
3. Lek przeciwbólowy (0,1 mg/kg buprenorfiny) należy podawać podskórnie. Jeśli operacja elektroencefalografii (EEG) jest wykonywana tego samego dnia, buprenorfinę należy podawać podskórnie w połączeniu z niesteroidowym przeciwzapalnym karprofenem (5 mg/kg).
4. Roztwór mleczanu sodu (3 μl na gram masy ciała zwierzęcia) należy podawać podskórnie przed lub po ostatnim uderzeniu. Roztwór mleczanu sodu można mieszać z lekami przeciwbólowymi w celu szybkiego podania w jednym wstrzyknięciu.
   UWAGA: Roztwór mleczanu sodu zawiera mieszaninę chlorku sodu, chlorku potasu, chlorku wapnia i mleczanu sodu w wodzie. Ten krok pomaga zastąpić płyny i elektrolity, wspomagając regenerację.
5. Umieść głowę myszy pod rurką zrzutową (Rysunek 1A) i umieść płaski dysk ze stali nierdzewnej (1,3 cm średnicy, 1 mm grubości i 880 mg wagi) na środku głowy, między linią oczu i uszu.
   UWAGA: Ten dysk rozprasza uderzenie na powierzchni czaszki (Rysunek 1B).
6. Wyjmij kołek w rurze zrzutowej obciążnika, aby zwolnić pręt o wadze 100 g z wysokości 50 cm. Aby wywołać pozorowane obrażenia u myszy kontrolnych, usuń pręt obciążnikowy z rurki, aby zapobiec przypadkowemu zwolnieniu szpilki i spadkowi wagi.
   UWAGA: Głowa zwierzęcia musi być ułożona płasko, tak aby pręt swobodnie opadał na całą powierzchnię dysku.
7. Połóż nieprzytomne zwierzę na grzbiecie w celu odzyskania zdrowia na poduszce grzewczej pokrytej sterylnym ręcznikiem chłonnym z polietylem. Czas odzyskiwania odruchu prostującego (tj. czas, w którym mysz prostuje się od grzbietu) może być mierzony jako odczyt czasu spędzonego bez przytomności.

Wyniki

Rycina 1: Mysi model powtarzalnego rozlanego urazowego uszkodzenia mózgu (TBI). (A) Urządzenie do obniżania wagi. (a1) Rurka zrzutowa masy. (a2) Pręt o wadze 100 g. (a3) Kołek przytrzymujący pręt. (a4) Sznurek do podnoszenia pręta w przypadku zmiany wysokości lub wyjmowania pręta z rurki zrzutowej. (a5

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Buprenorfina	Par Pharmaceuticals, Cos. Inc., Spring Valley, Nowy Jork, Stany Zjednoczone	60969
Myszy C57BL/6	Harlan/Envigo Laboratories Inc		pies, 12-16 tygodni
Myszy C57BL/6	Laboratorium Jacksona		pies, 12-16 tygodni
Karprofen	Zoetis Services LLC, Parsippany, NJ, Stany Zjednoczone	26357	UWAGA: ten lek dodaje się podczas spadku masy ciała tylko wtedy, gdy implantacja elektrody stereotaktycznej zostanie wykonana tego samego dnia
Fluriso płyn do znieczulenia wziewnego	MWI Veterinary Supply Co., Stany Zjednoczone	502017
Tarcza ze stali nierdzewnej			Wykonane na zamówienie
Sterylne chłonne ręczniki z wyściółką polietylenową	Kardynał Zdrowia, Stany Zjednoczone	3520