Indukcja i ocena depresji u myszy poprzez przewlekłą ekspozycję na stres

Streszczenie

Źródło: Yan, Z., i wsp. Ocena działania przeciwdepresyjnego Xiaoyaosan na przewlekle zestresowane myszy. J. Vis. Exp. (2019).

Film przedstawia proces tworzenia mysiego modelu przewlekłej depresji wywołanej stresem i oceny zachowań depresyjnych. Przewlekłe stosowanie różnych stresorów wyzwala uwalnianie kortykosteronu, co prowadzi do nadmiernego pobudzenia neuronów i ostatecznie śmierci neuronów, co skutkuje objawami podobnymi do depresji u myszy.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Przygotowanie myszy do procedury eksperymentalnej

UWAGA: Do procedury eksperymentalnej wybrano zdrowe samce myszy C57BL/6J w wieku 12 tygodni, przy czym każda mysz ważyła od 18 do 22 g.

1. Trzymaj myszy pojedynczo w klatkach w typowym pomieszczeniu dla zwierząt laboratoryjnych wolnych od specyficznych patogenów (SPF) (22 ± 1 °C, 12 h/12 h cykl ciemny/jasny, wilgotność względna: 30–40%) przez tydzień przed zabiegiem CUMS.
2. Losowo podziel wszystkie myszy na grupę kontrolną i grupę modelową według ich masy ciała. Każda grupa składa się z 15 myszy.
3. Przed rozpoczęciem eksperymentu ponumeruj myszy w każdej grupie na ogonie za pomocą pisaka.

2. Indukcja depresji u myszy

UWAGA: Aby wywołać depresję, myszy w grupie modelowej i dwie grupy leczone przechodziły przewlekły nieprzewidywalny łagodny stres (CUMS) przez 21 dni. Plan można zmieniać w zależności od sytuacji praktycznej, ale należy przestrzegać zasady, że ten sam stresor nie może być używany w sposób ciągły.

1. Codziennie wystawiaj myszy na działanie dowolnych dwóch z następujących siedmiu czynników stresogennych przez 21 kolejnych dni. Nasz plan modelowania jest zaprojektowany w następujący sposób:
   1. W poniedziałek wystaw myszy na brak pożywienia (opróżnij karmę z każdej klatki na 24 godziny, od 8:00 do 8:00) i brak wody (usuń butelkę do picia z każdej klatki na 24 godziny, od 8:00 do 8:00).
   2. We wtorek wystaw myszy na stres związany z ograniczeniami (trzymaj myszy w małej plastikowej wannie przez 3 godziny, od 8:00 do 11:00) i puste klatki (usuń wyściółkę z każdej klatki na 11 godzin, od 8:00 do 19:00).
   3. W środę wystaw myszy na działanie mokrych i zabrudzonych klatek (wlej wodę do każdej klatki i trzymaj mokre przez 24 godziny, od 8:00 do 8:00) i zatłoczonych klatek (umieść pięć myszy w jednej klatce na 24 godziny, od 8:00 do 8:00).
   4. W czwartek wystaw myszy na stres związany z ograniczeniami i lodowato pływanie (zmuś każdą mysz do pływania w przezroczystym szklanym akwarium z lodowatą wodą przez 5 minut).
   5. W piątek wystawiaj myszy na mokre i zabrudzone klatki oraz pozbawienie jedzenia.
   6. W sobotę wystawiaj myszy na stres związany z ograniczeniami i zatłoczonymi klatkami.
   7. W niedzielę wystawiaj myszy na puste klatki i lodowate pływanie.
2. Rejestruj stan sierści i masę ciała co tydzień, aż do końca modelowania (dzień 21). Oblicz całkowity wynik stanu sierści jako sumę wyników z siedmiu różnych części ciała: głowy, szyi, sierści grzbietowej, sierści brzusznej, łap przednich, ogona i łap tylnych. Wynik jeden oznacza zadbaną sierść, a wynik zero oznacza zaniedbaną sierść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Myszy C57BL/6j	Beijing Vital River of the Charles River Company	SCXK 2011-0004	60 zdrowych samców myszy C57BL/6J w wieku 12 tygodni zakupiono z Beijing Vital River firmy Charles River Company.
Klatka dla myszy	Stylizacja Biotechnologii	34853016	318×202×135 mm
{{}}Woda destylowana			Woda była używana w eksperymencie.
Waga elektroniczna ACS-2EAS	Beijing Hengzhongheng Electronic Technology Co., Ltd.		Służył do ważenia avoirdupois myszy na różnych etapach.
Do analizy danych wykorzystano oprogramowanie SPSS Statistics 21.0	IBM		Oprogramowanie SPSS 21.0, jednoczynnikowa ANOVA lub test nieparametryczny użyto do uzyskania danych ogólnych w oparciu o test normalności i test jednorodności dla wariancji, a do porównań między grupami zastosowano metodę LSD.
Oprogramowanie Graphpad Prism 6.0	Graphpad Software,Inc.USA -		Do rysowania wykresów statystycznych użyto oprogramowania Graphpad Prism 6.0.