Pomiar słuchowej odpowiedzi pnia mózgu u myszy

Streszczenie

Źródło: Lee, D., et. al. Zmodyfikowane warunki eksperymentalne dla ubytku słuchu wywołanego hałasem u myszy oraz ocena funkcji słuchu i uszkodzenia zewnętrznych komórek rzęsatych. J. Vis. Exp. (2023)

Ten film pokazuje pomiar słuchowej odpowiedzi pnia mózgu (ABR) u myszy. Elektrody umieszcza się na głowie, za uchem i w pobliżu ogona znieczulonej myszy. Dostarczane są bodźce akustyczne o różnym natężeniu, a generowane sygnały elektryczne są rejestrowane jako przebiegi.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Ocena progu słyszenia oparta na słuchowej odpowiedzi pnia mózgu (ABR)

1. Użyj komercyjnego systemu testowania ABR zaprojektowanego specjalnie dla małych zwierząt.
2. Dootrzewnowo wstrzyknąć mieszaninę tiletaminy i zolazepamu (40 mg/kg) oraz ksylazyny (9,3 mg/kg) myszom w celu znieczulenia ogólnego.
   UWAGA: Ocena ABR trwa ~2 godziny. Upewnij się, że zapewniasz wsparcie termiczne za pomocą poduszki grzewczej i nałóż maść do oczu, aby zapobiec wysuszeniu, gdy mysz jest pod narkozą.
3. Zmierz ABR u myszy w znieczuleniu ogólnym. Umieść podskórne elektrody igłowe (12 mm) w wierzchołku, za małżowiną uszną lewego ucha i z powrotem w pobliżu ogona, aby zmierzyć próg słyszenia.
4. Prezentuj bodźce akustyczne za pomocą głośnika umieszczonego w odległości 1 cm od lewego ucha zwierzęcia.
5. Użyj oscyloskopu, aby kontrolować bodźce akustyczne. Wybierz Fala sinusoidalna dla bodźców i 10 k dla skali okna. Obróć pokrętło Frequency , aby uzyskać żądaną częstotliwość bodźców akustycznych.
6. Dostosuj intensywność bodźca, obracając pokrętło amplitude lub AMLP na generatorze funkcji. Uzyskaj pożądaną intensywność bodźca, przekręcając pokrętło AMLP na odpowiednie napięcie, obliczone na podstawie kalibracji.
7. Zbierz pomiary ABR przy serii intensywności bodźca, od 10 dB poziomu ciśnienia akustycznego lub SPL do 100 dB SPL, z krokiem 10 dB.
   UWAGA: Zmierz próg słyszenia w dźwiękoszczelnym pudełku. Za minimalny poziom intensywności bodźca, który może spowodować zauważalną falę V w zebranym sygnale, przyjęto, że jest to próg ABR (Rysunek 1). Po ocenie ABR należy monitorować zwierzę do momentu wyzdrowienia ze znieczulenia (~1 h).

Wyniki

Rycina 1: Pomiar ABR słuchu. Reprezentatywne wyniki ABR przy częstotliwości 12 kHz, zebrane 13 dnia (1 tydzień po ekspozycji na hałas). Fala V przy każdej intensywności jest oznaczona, jeśli jest dostrzegalna.

Materiały