Indukcja podwyższonego ciśnienia wewnątrzgałkowego w modelu szczurzym

Streszczenie

Źródło: Lani-Louzada, R., i wsp., Kauteryzacja pełnego koła rąbkowego splotu naczyniowego w przypadku chirurgicznie wywołanej jaskry u gryzoni. J. Vis. Exp. (2022)

Ten film pokazuje indukcję i monitorowanie podwyższonego ciśnienia wewnątrzgałkowego (IOP) w modelu szczurzym. Proces ten polega na kauteryzacji rąbkowych naczyń krwionośnych, co skutkuje niedrożnością naczyń i podwyższonym ciśnieniem wewnątrzgałkowym. Szczur może następnie wyzdrowieć, a ciśnienie wewnątrzgałkowe jest regularnie monitorowane zarówno w oczach eksperymentalnych, jak i kontrolnych w celu porównania.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

W niniejszej pracy wykorzystano szczury Lister Hooded obu płci, w wieku 2-3 miesięcy i o wadze 180-320 g. Jednak procedura może być dostosowana do różnych szczepów szczurów w różnym przedziale wiekowym.

Operacja nadciśnienia ocznego i obserwacja kliniczna

1. } Zwierzęta domowe w środowisku o kontrolowanej temperaturze i 12-godzinnym cyklu światła/ciemności (6 rano: światło włączone / 6 wieczorem: światło wyłączone) ze standardowym granulowanym pokarmem napromieniowanym promieniowaniem gamma (Nuvilab® CR-1, Quimtia S/A, Brazylia) i wodą (potrójny filtr, z nietoksycznym węglem aktywnym) dostępnym ad libitum.
2. Przygotuj podstawowy koktajl znieczulający składający się z trzech części 10% chlorowodorku ketaminy i jednej części 2% chlorowodorku ksylazyny (rozcieńczalnik: sterylna woda).
3. Delikatnie przytrzymać zwierzę trzymając skórę grzbietową i wywołać znieczulenie, podając dootrzewnowo 1 μl/g masy ciała mieszaniny (ketamina: 75 mg/kg; ksylazyna: 5 mg/kg). Sprawdź, czy znieczulenie jest prawidłowe po około 5 minutach, wykonując reakcję szczypania palca u nogi.
4. Znieczulenie miejscowe obu powierzchni oczu poprzez wkroplenie 0,5% kropli do oczu chlorowodorku proksymetakainy. Odczekaj 30-60 s i usuń pozostały roztwór z przedniej części gałki ziemskiej, delikatnie dotykając spojówki nosowej lub bocznej opuszkowej małym sterylnym wacikiem.
5. Zmierz wyjściowe ciśnienie wewnątrzgałkowe zarówno eksperymentalnych, jak i przeciwległych oczu kontrolnych, umieszczając zwierzę w brzusznej pozycji odleżynowej na stole tak, aby powierzchnia rogówki była łatwo dostępna dla końcówki tonometru.
6. Użyj przenośnego tonometru aplanacyjnego lub odbicia (Rysunek 1A). Ustaw końcówkę tonometru tak, aby lekko dotykała prostopadle środkowej strefy rogówki. Zdobądź i uśrednij 3-5 wiarygodnych średnich generowanych maszynowo. Każda średnia jest automatycznie obliczana przez urządzenie po sześciu udanych indywidualnych pomiarach.
   1. Załaduj tonometr odbicia sondą i naciśnij raz przycisk pomiaru, aby go włączyć, jednocześnie umieszczając końcówkę urządzenia do góry, aby uniknąć upadku sondy. Po włączeniu na wyświetlaczu pojawi się 00 wskazując, że sprzęt jest gotowy do pomiaru.
   2. Ustaw urządzenie tak, aby końcówka sondy znajdowała się w odległości 1-4 mm od rogówki i uzyskaj pomiary, szybko i ostrożnie naciskając przycisk pomiaru, bez przesuwania urządzenia. Każdy udany pomiar jest identyfikowany krótkim sygnałem dźwiękowym, a po sześciu razach średnia jest wyświetlana na ekranie urządzenia.
      UWAGA: Pomimo długiego doświadczenia z tonometrem aplanacyjnym, w celu optymalizacji całej procedury autorzy zalecają użycie tonometru odbicia, który zapewnia łatwiejsze uzyskanie wiarygodnego pomiaru IOP.
7. Umieść zwierzę w lekkiej bocznej pozycji odleżynowej pod mikroskopem stereoskopowym i starannie zaplanuj operację, oglądając eksperymentalne oko w 40-krotnym powiększeniu. Nie zapomnij o utrzymaniu nawilżenia przeciwległego oka kontrolnego podczas zabiegu poprzez wkroplenie kropli karmelozy sodowej lub hialuronianu sodu.
8. Za pomocą zakrzywionych kleszczy delikatnie popchnij eksperymentalną gałkę oczną do przodu, aby odsłonić układ naczyniowy otaczający 360° rąbka. Drugą ręką delikatnie kauteryzuj naczynia wokół rogówki za pomocą niskotemperaturowego kauteryzacji okulistycznej (1,300 ° F; Bovie Medical, Stany Zjednoczone) (Rysunek 1B-E).
   UWAGA: Wspomniana kauteryzacja ma okrągłą końcówkę, która powinna dotykać rąbka naczyniowego wzdłużnie.
9. Należy uważać, aby nie kauteryzować obwodu rogówki, ponieważ może to spowodować pooperacyjne zmętnienie rogówki, co uniemożliwi ocenę funkcji siatkówki in vivo.
10. Obserwuj pojawienie się małych kolistych śladów kauteryzacji na rąbku twardówki, zatarcie naczyń rąbkowych i rozszerzenie źrenicy w operowanym oku, które są oznakami udanego zabiegu chirurgicznego.
    UWAGA: Ponieważ unaczynienie rąbkowe szczurów i myszy jest anatomicznie podobne, a zastosowana kauteryzacja ma delikatną małą końcówkę, ten protokół może działać również dla oka myszy bez żadnej adaptacji.
11. Po zabiegu należy sprawdzić bezpośrednio po operacji ciśnienie wewnątrzgałkowe w obu oczach, jak opisano w kroku 1.5.
12. Nałóż kroplę octanu prednizolonu (1,2 mg / ml) i utrzymuj ją w kontakcie z przednią powierzchnią oka doświadczalnego przez około 40 s, a następnie zastąp ją maścią okulistyczną z antybiotykami (chlorowodorek oksytetracykliny 30 mg / g plus polimyksyna B 10 000 U/g; lub cyprofloksacyna 3,5 mg / g). Wykonać domięśniowe wstrzyknięcie chlorowodorku tramadolu (pojedyncza dawka; 2 mg/kg), aby zapobiec bólowi po zabiegu.

Wyniki

Rycina 1: Kauteryzacja termiczna splotu naczyniowego rąbka i konsekwencje dla funkcji siatkówki in vivo. (A) Alternatywne metody pomiaru ciśnienia wewnątrzgałkowego u szczurów: tonometria odbicia (lepsza) i tonometria aplanacyjna (gorsza). (B-E) Zabiegu chirurgicznego; Grot strzały: rąbkowy splot naczyniowy; Strzałka: zakrzywion...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Kauteryzacja niskotemperaturowa Fine Tip 10/bx	Bovie Medical Corporation	AA00	Niskotemperaturowa kauteryzacja
Cetamin	Syntec do Brasil Ltda	000200-3-000003	Chlorowodorek ketaminy 10%
Ecofilm	Cristália Produtos Químicos Farmacêuticos Ltda	MS-1.0298.0487	Karmeloza sodowa 0.5%
Hyabak	União Química Farmacêutica Nacional S/A	MS-8042140002	Hialuronian sodu 0.15%
Icare Tonolab	Icare Finlandia Oy	TV02 (numer modelu)	Tonometr
Maxiflox	Cristália Produtos Químicos Farmacêuticos Ltda	MS-1.0298.0489	Ciprofloksacyna 3.5 mg/g
Ster MD	União Química Farmacêutica Nacional S/A	MS-1.0497.1287	Octan prednizolonu 0.12%
Terolac	Cristália Produtos Químicos Farmacêuticos Ltda	MS-1.0497.1286	Ketorolac trometamol 0.5%
Terramicina	Laboratórios Pfizer Ltda	MS-1.0216.0024	Chlorowodorek oksytetracykliny 30 mg/ g + polimyksyna B 10 000 U/g
Tono-Pen XL	Reichert Technologies	230635	Ręczny tonometr cyfrowy
	Carl Zeiss-Stereo		do chirurgii i rozwarstwienia siatkówki

okulistyczna ręczny z odbiciem Mikroskop