$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Przygotowanie narzędzi chirurgicznych i niechirurgicznych
- Sterylizuj narzędzia chirurgiczne i niechirurgiczne w autoklawie.
- Wyczyść stół operacyjny 70% etanolem i podgrzej poduszkę grzewczą do 37 °C.
- Umieść poduszkę grzewczą na stole operacyjnym i przykryj ją sterylnymi obłożeniami chirurgicznymi.
UWAGA: We wszystkich procedurach przetrwania stosuje się technikę "No Touch" w celu utrzymania bezpłodności.
2. Przygotowanie zwierząt i wykonanie laminektomii rdzeniowej T9-T10
- Zaopatrz się w dorosłe (Balb/c) 10-tygodniowe samce myszy. Wywołać znieczulenie u każdego zwierzęcia za pomocą inhalatora, zaczynając od 5% izofluranu, a następnie zmniejszając do 2-3%, aby utrzymać sedację przez pozostałą część zabiegów.
- Potwierdź całkowite znieczulenie, wywołując brak reakcji na stymulację nocycepcji wywołaną szczypnięciem ogona/łapy.
- Ogol włosy na grzbiecie (od głowy do ogona) elektryczną maszynką do strzyżenia, a następnie nałóż krem do depilacji (3 min), aby usunąć pozostałe włosy. Na koniec umyj grzbiet bieżącą wodą/mokrym peelingiem i włóż zwierzęta z powrotem do klatek.
UWAGA: Jest to konieczne, aby uniknąć dodatkowego podrażnienia skóry i zanieczyszczenia chemicznego w momencie zranienia skóry - Następnego dnia nałóż maść okulistyczną na rogówkę, aby chronić oczy przed wysuszeniem podczas zabiegu chirurgicznego. Następnie przeszoruj skórę 3 alternatywnymi preparatami peelingu betadynowego i 70% etanolu.
- Za pomocą skalpela wykonaj nacięcie skóry (~1,0-1,5 cm) wzdłuż linii środkowej na plecach na poziomie kręgów T8-T12.
UWAGA: Poziom kręgów jest identyfikowany przez wsteczne liczenie kręgu od T13 przy użyciu położenia pływających żeber, które odpowiadają kręgowi T13. - Oczyść podskórną tkankę tłuszczową, aby uzyskać dostęp do mięśni przykręgosłupowych, a następnie powoli je wypreparuj, aby odsłonić wyrostki kolczyste i blaszki po obu stronach.
UWAGA: Wykonaj tę procedurę bardzo ostrożnie, aby uniknąć nadmiernego krwawienia lub jakiegokolwiek uszkodzenia rdzenia kręgowego w tym momencie. - Wykonaj laminektomię, aby odsłonić rdzeń kręgowy (kręgi T9-T10), delikatnie odklejając blaszkę kręgosłupa za pomocą kleszczy do mikropreparacji.
UWAGA: Wykonaj laminektomię tak, aby nadmiar rdzenia kręgowego został odsłonięty, aby ułatwić powstanie urazu. W grupie kontrolnej wykonuje się tylko laminektomię.
3. Wykonanie T9-T10 Całkowitego Uszkodzenia Rdzenia Kręgowego (SCI)
- Za pomocą kleszczy zabezpiecz kręgosłup w T8 i podnieś, aby wyolbrzymić krzywiznę kręgosłupa.
- Za pomocą cienkich nożyczek przeciąć rdzeń kręgowy między kręgiem T9 i T10 aż do dna kanału kręgowego, aby zapewnić całkowite przecięcie.
- Po zaobserwowaniu całego przekroju pod mikroskopem chirurgicznym, nałóż kawałek tłuszczu podskórnego na miejsce laminektomii, aby zapewnić dodatkową ochronę rdzenia kręgowego przed zamknięciem pola operacyjnego.
- Na koniec zamknij ranę i zszyj mięśnie przykręgosłupowe i powięź powierzchowną za pomocą szwów ciągłych, a następnie zamknij skórę za pomocą klipsów do szwów.
- Po SCI obserwuj wypróżnienia następnego dnia; Należy jednak zarządzać pęcherzem moczowym poprzez ręczne opróżnianie pęcherza.
UWAGA: Skala Basso Mouse Scale (BMS) może być używana do monitorowania postępu odzyskiwania funkcjonalnego kończyn tylnych po SCI w dniu 2, a następnie co tydzień.