Generowanie modelu myszy z urazem rdzenia kręgowego

Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Przygotowanie narzędzi chirurgicznych i niechirurgicznych

1. Sterylizuj narzędzia chirurgiczne i niechirurgiczne w autoklawie.
2. Wyczyść stół operacyjny 70% etanolem i podgrzej poduszkę grzewczą do 37 °C.
3. Umieść poduszkę grzewczą na stole operacyjnym i przykryj ją sterylnymi obłożeniami chirurgicznymi.
   UWAGA: We wszystkich procedurach przetrwania stosuje się technikę "No Touch" w celu utrzymania bezpłodności.

2. Przygotowanie zwierząt i wykonanie laminektomii rdzeniowej T9-T10

1. Zaopatrz się w dorosłe (Balb/c) 10-tygodniowe samce myszy. Wywołać znieczulenie u każdego zwierzęcia za pomocą inhalatora, zaczynając od 5% izofluranu, a następnie zmniejszając do 2-3%, aby utrzymać sedację przez pozostałą część zabiegów.
2. Potwierdź całkowite znieczulenie, wywołując brak reakcji na stymulację nocycepcji wywołaną szczypnięciem ogona/łapy.
3. Ogol włosy na grzbiecie (od głowy do ogona) elektryczną maszynką do strzyżenia, a następnie nałóż krem do depilacji (3 min), aby usunąć pozostałe włosy. Na koniec umyj grzbiet bieżącą wodą/mokrym peelingiem i włóż zwierzęta z powrotem do klatek.
   UWAGA: Jest to konieczne, aby uniknąć dodatkowego podrażnienia skóry i zanieczyszczenia chemicznego w momencie zranienia skóry
4. Następnego dnia nałóż maść okulistyczną na rogówkę, aby chronić oczy przed wysuszeniem podczas zabiegu chirurgicznego. Następnie przeszoruj skórę 3 alternatywnymi preparatami peelingu betadynowego i 70% etanolu.
5. Za pomocą skalpela wykonaj nacięcie skóry (~1,0-1,5 cm) wzdłuż linii środkowej na plecach na poziomie kręgów T8-T12.
   UWAGA: Poziom kręgów jest identyfikowany przez wsteczne liczenie kręgu od T13 przy użyciu położenia pływających żeber, które odpowiadają kręgowi T13.
6. Oczyść podskórną tkankę tłuszczową, aby uzyskać dostęp do mięśni przykręgosłupowych, a następnie powoli je wypreparuj, aby odsłonić wyrostki kolczyste i blaszki po obu stronach.
   UWAGA: Wykonaj tę procedurę bardzo ostrożnie, aby uniknąć nadmiernego krwawienia lub jakiegokolwiek uszkodzenia rdzenia kręgowego w tym momencie.
7. Wykonaj laminektomię, aby odsłonić rdzeń kręgowy (kręgi T9-T10), delikatnie odklejając blaszkę kręgosłupa za pomocą kleszczy do mikropreparacji.
   UWAGA: Wykonaj laminektomię tak, aby nadmiar rdzenia kręgowego został odsłonięty, aby ułatwić powstanie urazu. W grupie kontrolnej wykonuje się tylko laminektomię.

3. Wykonanie T9-T10 Całkowitego Uszkodzenia Rdzenia Kręgowego (SCI)

1. Za pomocą kleszczy zabezpiecz kręgosłup w T8 i podnieś, aby wyolbrzymić krzywiznę kręgosłupa.
2. Za pomocą cienkich nożyczek przeciąć rdzeń kręgowy między kręgiem T9 i T10 aż do dna kanału kręgowego, aby zapewnić całkowite przecięcie.
3. Po zaobserwowaniu całego przekroju pod mikroskopem chirurgicznym, nałóż kawałek tłuszczu podskórnego na miejsce laminektomii, aby zapewnić dodatkową ochronę rdzenia kręgowego przed zamknięciem pola operacyjnego.
4. Na koniec zamknij ranę i zszyj mięśnie przykręgosłupowe i powięź powierzchowną za pomocą szwów ciągłych, a następnie zamknij skórę za pomocą klipsów do szwów.
5. Po SCI obserwuj wypróżnienia następnego dnia; Należy jednak zarządzać pęcherzem moczowym poprzez ręczne opróżnianie pęcherza.
   UWAGA: Skala Basso Mouse Scale (BMS) może być używana do monitorowania postępu odzyskiwania funkcjonalnego kończyn tylnych po SCI w dniu 2, a następnie co tydzień.