Hydrofobowa metoda oczyszczania tkanki dla próbki tkanki mózgowej szczura

Streszczenie

Źródło: Kirchner, K.N., i wsp., Hydrofobowa metoda oczyszczania tkanki dla tkanki mózgowej szczura. J. Vis. Exp. (2020).

Ten film pokazuje metodę hydrofobowego oczyszczania tkanki z próbki tkanki mózgowej szczura. Próbka jest sekwencyjnie odwadniana w metanolu, traktowana mieszaniną dichlorometanu i metanolu w celu rozpuszczenia lipidów i pigmentów, a następnie przenoszona do eteru dibenzylowego w celu całkowitego oczyszczenia tkanek, co umożliwia szczegółowe obrazowanie bez cienkiego cięcia.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące próbek zwierzęcych zostały poddane przeglądowi i zatwierdzone przez odpowiednią komisję ds. oceny etycznej zwierząt.

1. Oczyszczanie tkanek

1. Inkubuj próbkę w 20% metanolu/80% roztworze wody dejonizowanej przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej (RT).
2. Inkubować próbkę w 40% metanolu/60% roztworze wody dejonizowanej przez 1 godzinę w temperaturze RT.
3. Inkubować próbkę w 60% metanolu/40% roztworze wody dejonizowanej przez 1 godzinę w temperaturze RT.
4. Inkubować próbkę w roztworze wody 80% metanolu/ 20% dejonizowanej przez 1 godzinę w temperaturze RT.
5. Inkubować próbkę w 100% metanolu przez 1 godzinę w temperaturze RT.
6. Inkubować w świeżym 100% metanolu przez noc w temperaturze RT.
7. Inkubować w 66% dichlorometanie (DCM)/ 33% metanolu przez 3 godziny, wytrząsając, w temperaturze RT.
8. Inkubować w eterze dibenzylowym (DBE) bez wstrząsania. Pozostawić próbkę w DBE do momentu jej oczyszczenia i przechowywać w DBE do czasu obrazowania.

Materiały