Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Dwukolorowe, stymulowane obrazowanie rozpraszania Ramana tkanki mózgowej myszy

863 wyświetleń

⸱

29 maja 2025

W tym artykule

Streszczenie

Źródło: Espinoza, R., et al. Dwukolorowe, stymulowane w czasie rzeczywistym obrazowanie rozpraszania Ramana mózgu myszy w celu diagnozowania tkanek. J. Vis. exp. (2022).

Film przedstawia dwukolorowe, stymulowane rozpraszanie Ramana (SRS) wycinków tkanki mózgowej myszy. Dwie zsynchronizowane wiązki laserowe są kierowane na przekrój tkanki w celu wzbudzenia drgań molekularnych, co powoduje względną zmianę intensywności wiązek. Lipidy i białka w tkance są wykrywane za pomocą różnych par częstotliwości wiązek laserowych. Powstałe sygnały są następnie przypisywane do oddzielnych kolorów, tworząc dwukolorowy obraz, który pomaga zidentyfikować białka i lipidy w tkance.

Protokół

Wszystkie procedury dotyczące próbek zwierzęcych zostały poddane przeglądowi i zatwierdzone przez odpowiednią komisję ds. oceny etycznej zwierząt.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

figure-results-1

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Obiektyw achromatyczny 100 mmTHORLABSAC254-100-BSzerokopasmowy, 650 - 1,050 nm, achromatyczny obiektyw o ogniskowej, 100 mm
20 MHz filtr pasmowoprzepustowyMinicircuitsBBP-21.4+Lumped LC Band Pass Filter, 19,2 - 23,6 MHz, 50 Ω
Obiektyw achromatyczny 200 mmTHORLABSAC254-200-BSzerokopasmowy, 650 - 1,050 nm, ogniskowa obiektywu achromatycznego, 200 mm
Achromatyczna półfalaUnion OpticWPA2210-650-1100-M25.4Szerokopasmowa półfala
Achromatyczna ćwierćfalowa płytaUnion OpticWPA4210-650-1100-M25.4Szerokopasmowa ćwiartka falowa
Próbnik wiązkiTHORLABSBSN1110:90 Rozdzielacz wiązki płytowej
Zwierciadło dichroiczneTHORLABSDMSP1000Można stosować inne dichroiki o środkowej długości fali około 1,000 nm.
DMSO (sulfotlenek dimetylu)Sigma Aldrich472301Rozpuszczalnik do kalibracji przesunięcia Ramana. Można stosować inne rozpuszczalniki o znanych pikach Ramana.
Elektrooptyczny modulator amplitudyTHORLABSEO-AM-NR-C1Do modulacji ortogonalnej i obrazowania dwukanałowego potrzebne są dwie EOM. Zalecana jest wersja rezonansowa, aby można było zastosować niższe napięcie sterujące.
Fałszywy skrypt barwienia H&EMatlab https://github.com/TheFuGroup/HE_Staining
Fanout BufferPRL-414BLaboratorium Badań Impulsów1:4 TTL/CMOS Fanout Buffer and Line Driver, do generowania częstotliwości sterowania EOM i odniesienia do blokady
Szybka fotodiodaTHORLABSDET10A2Si Detektor, 1 ns Czas narastania
Dzielnik częstotliwościPRL-220ALaboratorium Badań ImpulsówCzęstotliwość TTL Dzielnik (f/2, f/4, f/8, f/16), do generowania 20MHz z wyjścia laserowego.
Pręty szklane o wysokiej dyspersjiUnion OpticCYLROD01Wysokodyspersyjna soczewka prętowa H-ZF52A 120 mm, SF11 soczewka prętowa 100 mm
Insight DS+Newport System laserowy zdolny do wysyłania dwóch zsynchronizowanych laserów impulsowych (jedna stała wiązka o wartości 1, 040 nm i jedna wiązka przestrajalna, w zakresie 680-1,300 nm) z częstotliwością powtarzania 80 MHz.
Wzmacniacz typu lock-inLiquid InstrumentsMoku LabWzmacniacz typu lock-in do ekstrakcji sygnału SRS z fotodiody. Można również użyć instrumentu Zurich HF2LI lub podobnego instrumentu.
LustraTHORLABSBB05-E03-10Szerokopasmowe zwierciadło dielektryczne, 750 - 1,100 nm. Można również użyć srebrnych luster.
Zmotoryzowany stopień opóźniającyZaberX-DMQ12P-DE52Stopień opóźnienia do precyzyjnej kontroli czasowego nakładania się pompy i laserów Stokesa. Każdy inny zmotoryzowany etap powinien działać.
Kondensor zanurzeniowy olejowyNikonCSC10031.4 NA. Można stosować inne skraplacze z NA>1.2.
OscyloskopTektronixTDS7054Każdy inny oscyloskop o paśmie 400 MHz lub wyższym powinien działać.
Przesuwnik fazySigaTekSF50A2Do przesunięcia fazy częstotliwości modulacji
FotodiodaHamamatsu CorpS3994-01Krzemowa dioda PIN o dużej powierzchni (10 x 10 cm2). Można stosować inne diody o dużej powierzchni i niskiej pojemności.
Rozdzielacz wiązki polaryzacyjnejUnion OpticPBS9025-620-1000Szerokopasmowy polaryzacyjny rozdzielacz wiązki
Refactive Index Database refractiveindex.info
Światło odblaskoweEdmund Optics34-408BBAR Pryzmat kątowy. Można zastosować inne pryzmaty lub retroreflektor.
Wzmacniacz mocy RFMinicircuitsZHL-1-2W+Blok wzmocnienia, 5 - 500 MHz, 50 Ω
Scan MirrorsCambridge Technologies6215HUżyliśmy zestawu luster 5mm ze srebrną powłoką
ScanImageVidrioOprogramowanie sterujące laserowym mikroskopem skaningowym
Filtr krótkoprzepustowyTHORLABSFESH100025,0 mm Premium Filtr krótkoprzepustowy, długość fali granicznej: 1,000 nm. Do skutecznego tłumienia Stokesa mogą być konieczne dwa filtry.
Mikroskop pionowyNikonEclipse FN1Można użyć dowolnej innej ramy mikroskopu. Jeśli dostępny jest laserowy mikroskop skaningowy, można go używać bezpośrednio. W przeciwnym razie do mikroskopu trzeba było dodać skaner galvo i soczewkę skanującą.
Cel zanurzenia w wodzieOlympusXLPLN25XWMP2Wielofotonowy obiektyw 25X ma NA 1,05. Można zastosować inne podobne cele.
{{TAG_ 49}}Scan Mirrors{{}} }{{TAG_ 284}}ScanImage Basic

Przeglądaj więcej artykułów

Obrazowanie SRSobrazowanie dwukolorowesynchronizacja wiązki laserowejdetekcja białek lipidowychwzbudzanie parą częstotliwościdetekcja zmian intensywnościzbieranie sygnału fotodiodywyrównanie drogi wiązki