Leczenie śródmózgowo-komorowe resyferatoksyną w celu odczulenia TRPV1 w mózgu myszy

Streszczenie

Źródło: Fukushima, A., et al. Leczenie śródmózgowo-komorowe resynitrotoksyną i testy bólu u myszy. J. Vis. Exp. (2020)

Ten film pokazuje procedurę wstrzykiwania do komory mózgowej resiniferatoksyny u myszy w celu odczulania receptorów TRPV1 w mózgu.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Wstrzyknięcie domózgowo-komorowe RTX

1. Anesthetitiz myszy solą sodową pentobarbitalu (60 mg / kg, dootrzewnowo) i sprawdź, czy nie ma utraty odruchu prostowania.
2. W przypadku leczenia domózgowo-komorowego (dożylnie) należy wstrzyknąć 5 μl żywicoferatoksyny (RTX) (20 μg/ml) do prawej komory bocznej. W przypadku grupy kontrolnej należy wstrzyknąć nośnik (10% etanolu, 10% monooleinianu polioksyetylenu (20) sorbitanu i 80% sztucznego płynu mózgowo-rdzeniowego (ACSF)) w ten sam sposób.
   1. Przełóż jednorazową igłę 27 G przez metalową rurkę (średnica wewnętrzna 0,8 mm), aby odsłonić końcówkę igły o średnicy 3,0-3,5 mm (rysunek 1A).
   2. Zdezynfekuj głowę myszy 70% alkoholem i mocno przytrzymaj kości łuskowe myszy palcami (ryc. 1B). nuta: Zwróć uwagę na położenie występów łuskowych, ponieważ te występy będą służyć jako punkty orientacyjne do wstrzyknięcia.
   3. Przesuń igłę bocznie na skórę głowy i znajdź szew strzałkowy, gdy końcówka igły jest zaczepiona o szew.
   4. Przesuń końcówkę o około 1 mm w prawo, a następnie przesuń końcówkę w ruch obrotowy i znajdź szew koronalny. (Rysunek 1B).
   5. Wprowadź igłę powoli i pionowo, wstrzyknij roztwór RTX w około 10 sekund i przytrzymaj go przez około 10 sekund.
   6. Powoli wyjmij igłę i umieść mysz z powrotem w klatce domowej. Krwawienie jest zwykle minimalne lub nie ma go wcale. Jeśli wystąpi poważne krwawienie, należy rozważyć użycie innej myszy.

Wyniki

Rysunek 1: Fotograficzne i schematyczne widoki iniekcji domózgowo-komorowej (i.c.v.). (A) Igła używana do wstrzykiwań dożylnych. (B) Schemat czaszki myszy i ruch końcówki igły. Kości łuskowe są pokazane na n...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Resiniferatoxin	LKT Laboratories	R1774	używany do wstępnych zabiegów s.c./i.c.v. i testu RTX
Sól sodowa pentobarbitalu	Tokio Przemysł chemiczny	P0776	stosowany do znieczulenia
Etanol (99,5%)	Wako Pure Chemical Industries	057-00456	służy do rozpuszczania
RTX Polioksyetylen(20) Monooleinian sorbitanu	Wako Pure Chemical Industries	161-21621	używany do rozpuszczania
RTX 25 mL Microsy-strzykawka	Hamilton	1702LT	używana do wstrzykiwań dożylnych
Jednorazowa igła	TERUMO	NN-2613S	do wstrzykiwań dożylnych

o rozmiarze 26 używana