Obrazowanie in vivo odpowiedzi neuronów zwojowych układu nerwowego za pomocą mikroskopii epifluorescencyjnej

Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Uruchom tastant panel
   1. Użyj ssania, aby usunąć płyn znad kolankowata. Opcjonalnie umieść punkt chłonny, aby złagodzić przesiąkanie i ułatwić nawigację mikroskopem.
   2. Umieść zwierzę na podkładce chłonnej pod mikroskopem. Zlokalizuj zwój kolankowaty: przydatne punkty orientacyjne obejmują dziurę pozostawioną w pęcherzu, dziurę w kości skroniowej i siódmy nerw. Korzystając z filtra FITC/GFP (izotiocyjanian fluoresceiny / białko zielonej fluorescencji) na zakresie epifluorescencji, sprawdź, czy nie ma poszczególnych neuronów kolankowatych z ekspresją GCaMP. Obiektyw 10x (odległość robocza 10 mm) zapewni wystarczającą rozdzielczość do śledzenia aktywności poszczególnych komórek, ale można również użyć obiektywu 20x (odległość robocza 12 mm).
   3. Umieść igłę dozującą do linii degustacyjnej mocno w pysku zwierzęcia. Umieść szalkę Petriego pod pyskiem zwierzęcia, aby złapać płyn.
   4. Upewnij się, że kamera view pole widzenia mikroskopu. Zsynchronizuj początek nagrania wideo z początkiem prezentacji degustacyjnej.
   5. Podczas nagrywania obserwuj kanał na żywo pod kątem odpowiedzi, dryfu i przesiąkania.