Wstrzyknięcie wektora wirusowego do rdzenia kręgowego szczura w celu wstecznego śledzenia neuronów

Streszczenie

Źródło: Keefe, KM i wsp. Bezpośrednie wstrzyknięcie wektora lentiwirusowego uwypukla wiele ścieżek motorycznych w rdzeniu kręgowym szczura. J. Vis. Exp. (2019).

Ten film pokazuje wstrzyknięcie wysoce wydajnego wektora wirusowego transportu wstecznego (HiRet) do rdzenia kręgowego szczura w celu śledzenia ścieżek neuronalnych. Wirus ma glikoproteiny do wnikania synaptycznego i gen kodujący białka fluorescencyjne. Igłę wprowadza się do rdzenia kręgowego, a zawiesinę wirusa podaje się w kontrolowanej dawce. Igła jest ostatecznie usuwana po pozostawieniu wystarczającej ilości czasu na dyfuzję wirusa.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Przygotowania przedoperacyjne

1. Na kilka dni przed zabiegiem należy przygotować wyciągnięte szklane igły do wstrzyknięcia wirusa za pomocą szklanych pipet kapilarnych o pojemności 3,5 nanolitra przeznaczonych do iniekcji nanolitrowych. Pociągnij każdą pipetę na dwustopniowym ściągaczu igłowym zgodnie z instrukcjami producenta, aby utworzyć szablony dwuigłowe.
2. Udoskonal końcówkę szablonów igieł, odcinając około 1-2 mm nadmiaru szkła mikronożyczkami. Zmierz przybliżoną wi....

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
#10 Ostrza skalpela	Roboz	RS-9801-10	Do użytku ze skalpelem.
Strzykawki 1 ml	Becton, Dickinson and Company	309659	Do znieczulającego wstrzykiwania IP, potencjalnych zastrzyków przypominających znieczulanie i zastrzyków z antybiotykiem.
Strzykawki 10 ml	Becton, Dickinson and Company	309604	Do wstrzykiwania soli fizjologicznej zwierzęciu, po operacji.
4.0 Chromowy szew katgutowy	DemeTECH	NN374-16	Do ponownego wiązania mięśni podczas zamykania.
48000 Beveler do mikropipet	World Precision Instruments	32416	Służy do ukosowania końcówek ciągniętych szklanych rurek kapilarnych w celu utworzenia funkcjonalnych szklanych igieł.
5% roztwór jodu Purdue	Products L.P.	L01020-08	Do stosowania w sterylizacji pola operacyjnego.
70% Etanol	N/A	N/A	Do sterylizacji nowo przygotowanych igieł szklanych, modeli zwierzęcych podczas przygotowania chirurgicznego i rąk chirurga podczas operacji, a także wszystkich innych drobnych czynności związanych z utrzymaniem sterylności.
Środek znieczulający (roztwór ketaminy/ksylazyny)	Zoetis	240048	Do utrzymywania zwierzęcia w prawidłowej płaszczyźnie świadomości podczas operacji.
Antybiotyk (Cefazolin)	West-Ward Pharmaceuticals	NPC 0143-9924-90	Do wstrzykiwania podskórnego w celu zapobiegania infekcji po operacji.
Sterylizator koralików	CellPoint	5-1450	Do sterylizacji na gorąco narzędzi chirurgicznych.
Bonewax	Fine Science Tools	19009-00	Do uszczelniania kości w przypadku krwawienia z kości.
Cauterizer	Fine Science Tools	18010-00	Do uszczelniania wszelkich tętnic lub żył przerwanych podczas operacji, aby zapobiec nadmiernej utracie krwi.
Waga cyfrowa	Okaus	REV.005	Do ważenia zwierzęcia podczas przygotowania chirurgicznego.
Elastyczna nasadka do igieł	World Precision Instruments	MF34G-5	Do czyszczenia szklanych igieł i ładowania czerwonego oleju do szklanych igieł.
Gelfoam	Pfizer	H68079	Do uszczelniania kości w przypadku krwawienia z kości.
Szklane rurki kapilarne	World Precision Instruments	4878	Do ciągniętych szklanych igieł - powinny być przeznaczone do wtryskiwaczy nanolitrowych.
Maszynka do strzyżenia włosów	Oster	111038-060-000	Do oczyszczania miejsca operowanego z włosów.
Hemostats	Roboz	RS-7231	Do ogólnego użytku w chirurgii.
Chusteczki	Kimtech Kimtech	34155	Do ogólnego stosowania w chirurgii.
Kleszczyki zakrzywione średniego punktu	Roboz	RS-5136	Do ogólnego użytku w chirurgii.
Mikromanipulator ze skalą noniuszową	Kanetec	N/A	Do precyzyjnego celowania podczas operacji.
Mikronożyczki	Roboz	RS-5621	Do wycinania szklanych szeptów ze świeżo wyciągniętych szklanych rurek kapilarnych.
Mikroskop ze skalą światła i noniusza Ocular	Leitz Wetzlar	N/A	Służy do wizualizacji i pomiaru ukosowania ciągniętych szklanych rurek kapilarnych w funkcjonalne szklane igły.
Sterownik pompy mikrostrzykawkowej	World Precision Instruments	62403	Do kontrolowania szybkości wtrysku.
Nanolitr 2000 Pompa Head Injector	World Precision Instruments	500150	Do ładowania i wstrzykiwania wirusa w kontrolowany sposób.
Ściągacz igieł	Narishige	PC-100	Do podgrzewania i rozsuwania szklanych kapilar w celu uformowania szklanych igieł.
Maść oftalamowa	Dechra Veterinary Products	RAC 0119	W celu ochrony oczu zwierzęcia podczas operacji.
Parafilm	Bemis	PM-996	Aby pomóc w ładowaniu wirusa do nanowtryskiwacza.
Igły PrecisionGlide (25G x 5/8)	Becton, Dickinson and Company	305122	Do stosowania ze strzykawkami 1 ml i 10 ml, aby umożliwić wstrzyknięcie modelu zwierzęcego.
Kleszczyki do zębów szczurów	Roboz	RS-5152	Do chwytania wyrostków kolczystych.
Red Oil	N/A	N/A	Aby zapewnić front do wizualizacji wirusa wnikającego do tkanki podczas wstrzyknięcia.
Retraktory	Roboz	RS-6510	Do utrzymywania otwartej rany pooperacyjnej.
Rimadyl Tablets	Bio Serv	MP275-050	Do leczenia bólu po operacji.
Rongeurs	Roboz	RS-8300	Do usuwania mięśni z kręgosłupa podczas operacji.
Rękojeść ostrza skalpela	Roboz	RS-9843	Do rozcinania skóry i poduszeczki tłuszczowej modelu zwierzęcego podczas operacji.
Nożyczki	Roboz	RS-5980	Do ogólnego użytku w chirurgii.
Klipsy do ran ze stali nierdzewnej	CellPoint	201-1000	Do wiązania skóry rany chirurgicznej podczas zamykania.
Kleszcze do usuwania zszywek	Kent Scientific INS750347		Aby usunąć zszywki, jeśli zostały nałożone nieprawidłowo.
Sterylna tkanina	Phenix Research Products	BP-989	Aby zapewnić sterylną powierzchnię do operacji.
Sterylne aplikatory z bawełnianą końcówką	Puritan	806-WC	Do wchłaniania krwi w ranie pooperacyjnej przy jednoczesnym zachowaniu sterylności.
Sterylna gaza	Covidien	2146	Do czyszczenia obszaru operacyjnego i narzędzi chirurgicznych przy zachowaniu sterylności.
Sterylna sól fizjologiczna	Baxter Healthcare Corporation	281324	Do stosowania w oczyszczaniu krwi i do uzupełniania płynów po operacji.
Rękawice chirurgiczne	N/A	N/A	Do użytku przez chirurga w celu utrzymania sterylnego pola podczas operacji.
Chirurgiczna poduszka grzewcza	N/A	N/A	Do utrzymywania temperatury ciała modelu zwierzęcego podczas operacji.
Mikroskop chirurgiczny	N/A	N/A	Dla lepszej wizualizacji rany pooperacyjnej.
Zszywacz chirurgiczny	Kent Scientific	INS750546	Do nakładania zszywek.
T / Pump Pompa wodna do terapii cieplnej	Gaymar	TP500C	Do pompowania ciepłej wody do konwekcyjnej podkładki grzewczej.
Podkładka do podgrzewania konwekcji wodnej	Baxter Healthcare Corporation	L1K018	Do stosowania w obszarze rekonwalescencji pooperacyjnej w celu utrzymania temperatury ciała nieprzytomnego zwierzęcia.
Haki obciążeniowe	N/A	N/A	Do utrzymywania otwartej rany pooperacyjnej.