Wpływ indukowanej etanolem blokady zwoju współczulnego na regenerację nerwów w modelu psa

Streszczenie

Źródło: Shionoya, Y., et al. Indukowane etanolem blokowanie zwojów współczulnych szyjki macicy w celu wspomagania regeneracji dolnego nerwu zębodołowego psów za pomocą sztucznego nerwu. J. Vis. Exp. (2018)

Ten film przedstawia psi model regeneracji dolnego nerwu pęcherzykowego (IAN) przy użyciu biodegradowalnego rusztowania i blokady współczulnej indukowanej etanolem. Zabieg polega na chirurgicznym dostępie do zwoju współczulnego szyjki macicy i wstrzyknięciu etanolu w celu wywołania rozszerzenia naczyń krwionośnych. Wynikający z tego wzrost przepływu krwi do miejsca urazu, w połączeniu z regeneracją aksonalną sterowaną komórkami Schwanna, wspomaga regenerację nerwów.

Protokół

Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.

1. Znieczulenie i przygotowanie skóry:

1. Znieczulić psa mieszaniną 5 mg/kg chlorowodorku ketaminy i 1 mg/kg ksylazyny we wstrzyknięciu domięśniowym.
2. Zaintubować rurką dotchawiczą o średnicy 7,5 mm i długości 25 cm.
3. Ustaw psa we właściwej pozycji bocznej. Utrzymać znieczulenie ogólne za pomocą 3,2% sewofluranu z tlenem (1,0 l/min).
4. Użyj poduszki grzewczej, aby utrzymać temperaturę ciała na poziomie 37 °C.
5. Nałóż żel okulistyczny na przednią powierzchnię oczu, aby uniknąć otarcia rogówki.
6. Ostrożnie ogolić pole operacyjne (lewy obszar klatki piersiowej) za pomocą maszynki do strzyżenia chirurgicznego. Rozpyl znaczną ilość roztworu alkoholowego na miejsce operowane. Odczekaj co najmniej 15 sekund. Powtórz aplikację 3 razy.
7. Rejestruj tętno i saturację tlenem podczas operacji.

2. Rekonstrukcja nerwu wyrostka zębodołowego dolnego za pomocą rurki z kolagenem kwasu poliglikolowego (PGA-C): Opracowanie modelu tylko do rekonstrukcji

1. Wstrzyknąć 3 ml 1% lidokainy za pomocą igły 27 G do dziąsła lewej żuchwy jako środek miejscowo znieczulający i przeciwbólowy.
2. Wykonaj 5-centymetrowe nacięcie poprzeczne ostrzem skalpela numer 15 w lewym dziąśle żuchwy, aby odsłonić żuchwę zwierzęcia.
3. Użyj piezoelektrycznych wibracji ultradźwiękowych, aby zmielić bliższą część żuchwy w prostokąt o długości 3 cm × 8 mm przez tylny otwór mentalny.
   UWAGA: Częstotliwość wibracji wynosiła 28 \u2012 32 kHz.
4. Usuń przednią część płytki kostnej żuchwy (wymiary, 3 cm × 8 mm), aby odsłonić lewy IAN (ryc. 1A).
   UWAGA: Miejsce rekonstrukcji odpowiada wierzchołkowi korzenia pierwszego zęba trzonowego
5. Przetnij IAN skalpelem, aby usunąć segment 10 mm.
6. Włóż bliższe i dystalne kikuty odciętego nerwu do rurki nerwowej na głębokość 2 mm.
7. Użyj 8-0 nylonowe szwy i mikroskop chirurgiczny w powiększeniu 8x w celu zszycia rurki do bliższych i dalszych zakończeń nerwu (ryc. 1B).
8. Przywróć płytkę kostną na jej pierwotne miejsce w żuchwie.
9. Zamknij ranę nylonowymi szwami 4-0.
10. Dzień po zabiegu należy upewnić się, że płytka kostna żuchwy znajduje się we właściwej pozycji.
    1. 4.10.1 Wykonaj obrazowanie tomografii komputerowej (CT) kości twarzy w znieczuleniu. Ustaw parametry CT w następujący sposób: 120 kVp, 200 mAs, 0,5 mm/s, grubość warstwy 0,5 mm.
       1. Podać znieczulenie za pomocą mieszaniny 5 mg/kg chlorowodorku ketaminy i 1 mg/kg ksylazyny (Rysunek 2).
11. Podawać ampicylinę (100 mg / dobę) jako antybiotyk i paracetamol (100 mg / dobę) jako środek przeciwbólowy przez tydzień po zabiegu.

3. Blok zwoju współczulnego szyjki macicy indukowany etanolem (CSGB): Opracowanie modelu Rekonstrukcja + CSGB

1. Wykonaj rekonstrukcję IAN zgodnie z opisem w sekcji 2 i odczekaj tydzień na powrót do zdrowia.
2. Znieczulić zwierzę 1,5% sewofluranem w tlenie (4 l/min) i powietrzu (6 l/min). Ogolić i oczyścić zamierzone pole operacyjne, jak opisano w punkcie 3.
3. Zaznacz linię nacięcia chirurgicznym markerem skóry, rysując linię po lewej stronie klatki piersiowej (ryc. 3, linia nacięcia ma 20 cm długości).
4. Wstrzyknąć 5 ml 1% lidokainy za pomocą igły 21 G w lewą stronę klatki piersiowej jako środek miejscowo znieczulający i przeciwbólowy.
5. Naciąć skórę klatki piersiowej po lewej stronie ostrzem skalpela numer 10.
6. Naciąć warstwę tłuszczu skalpelem elektrycznym, aby odsłonić powięź mięśniową.
7. Odsłoń mięsień zębaty brzuszny i mięsień scalenusowy.
8. Podnieś mięsień zębaty brzuszny i mięsień połuskowaty od brzusznego do grzbietowego, aby odsłonić drugie i trzecie żebro (ryc. 4).
9. Wykonaj torakotomię boczną lewej w drugiej i trzeciej przestrzeni międzyżebrowej, aby odsłonić lewy zwój współczulny szyjki macicy (ryc. 5).
10. Wstrzyknąć 0,2 ml 99,5% etanolu do zwoju współczulnego szyjki macicy za pomocą igły 30 G pod bezpośrednią wizualizacją (ryc. 6).
11. Zamknij przestrzeń międzyżebrową przerwanymi szwami wchłanialnymi 1-0.
12. Zamknij skórę przerwanymi szwami nylonowymi 3-0.
13. Podawać ampicylinę (100 mg / dobę) jako antybiotyk i paracetamol (100 mg / dobę) jako środek przeciwbólowy przez tydzień po zabiegu.
14. Po 1 tygodniu od CSGB zmierz temperaturę skóry twarzy za pomocą termografii w podczerwieni, aby potwierdzić CSGB.

Wyniki

Rysunek 1: Lewy dolny nerw zębodołowy (IAN) przed i po rekonstrukcji. A) Obraz przed rekonstrukcją lewego IAN po naświetleniu przez usunięcie kości. B) Obraz po rekonstrukcji lewego IAN zrekonstruowany za pomoc...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Maszynki do strzyżenia chirurgicznego	Roboz Surgical Instrument Company	RC-5903
Jednorazowy skalpel (nr 15)	Kai medical	219ABBZX00073000
VarioSurg3	Nakanishi	VS3-LED-HPSC, E1133	Chirurgia piezoelektryczna do obróbki kości
4-0 nici nylonowe	Ethicon	8881H
8-0 nici nylonowe	Ethicon	2775G
Siarczan isepamycyny	Nichi-Iko	620005641
Skalpel jednorazowy (nr 10)	Kai medical	219ABBZX00073000
Igła 30 Nipro		1134
1-0 ściegi wchłanialne	Ethicon	J347H
3-0 Ściegi nylonowe	Ethicon	8872H
Neo Thermo	NEC Avio	TVS-700	Termografia w podczerwieni