$$\rightleftharpoonup{xx}$$
$$\longleftharp{xx}$$,
$$\longrightharp{xx}$$,
Wszystkie procedury z udziałem modeli zwierzęcych zostały zweryfikowane przez lokalną instytucjonalną komisję ds. opieki nad zwierzętami oraz weterynaryjną komisję rewizyjną JoVE.
1. Przygotowanie zwierząt
Uwaga: Zwierzęta, które mają ulec lekkiemu urazowi, wymagają adaptacji do ciemności w noc poprzedzającą odległe niedokrwienie. Zwierzęta poddawane lekkim uszkodzeniom wymagają ciemnego chowu (12 godzin światła: cykl ciemny, 5 luksów)
- Wykonaj zdalne niedokrwienie u gryzoni obudzonych lub znieczulonych. Upewnij się, że zwierzęta mają zdrowe napięcie mięśniowe. Upewnij się tego, ściskając górną tylną kończynę, aby upewnić się, że obecne są odpowiednie mięśnie. Ochrona przed lekkimi urazami wywołana przez RIP została przetestowana na szczurach prowadzących siedzący tryb życia do 6 miesiąca życia.
- Znieczulony preparat do zdalnego kondycjonowania niedokrwiennego (RIP)
- Szczurom należy wstrzyknąć dootrzewnowo 60 mg/kg ketaminy i 5 mg/kg ksylazyny. Sprawdź głębokość znieczulenia, prostując nogę i szczypiąc skórę na spodniej stronie stopy. Zwierzę nie ma odruchu, jeśli jest głęboko znieczulone. Stosuj sztuczne łzy, aby uniknąć suchości rogówki podczas znieczulenia.
- Umieść szczury na poduszce grzewczej lub wężyku podgrzewacza wody obiegowej, aby utrzymać stałą temperaturę ciała 37.5 °C. Ustaw szczura w pozycji leżącej z poduszkami stóp kończyn dolnych skierowanymi do góry. Zarówno prawa, jak i lewa kończyna może ulec odległemu niedokrwieniu.
2. Zastosowanie sondy temperatury skóry:
- Wysuń nogę szczura, który ma ulec niedokrwieniu i umieść sondę skórną na opuszku stopy. Ustaw sondę skóry tak, aby zmaksymalizować kontakt między sondą temperatury a skórą. Mocno wepchnij sondę w podnóżek i przymocuj sondę taśmą papierową.
- Sprawdź położenie sondy skórnej, śledząc temperaturę w oprogramowaniu do rejestrowania temperatury. Upewnij się, że temperatura skóry wynosi od 30 do 34 °C i pozostaje stabilna. Śledź temperaturę skóry przez 1-2 minuty. Wyreguluj sondę skóry, jeśli temperatura jest niestabilna lub niższa niż 30 °C.
3. Zdalne niedokrwienie
- Opróżnij mankiet i upewnij się, że zawór ciśnienia powietrza jest zamknięty. Wyprostuj nogę i luźno owiń mankiet na górnej kończynie tylnej. Użyj palca wskazującego i kciuka, aby wyprostować nogę i dolne palce, aby utrzymać poluzowany mankiet na miejscu.
- Podnieś ciśnienie w mankiecie znieczulonego zwierzęcia do 160 mmHg, a u zwierząt obudzonych zwiększ ciśnienie w mankiecie do 180 mmHg.
Uwaga: Znieczulone ciśnienie krwi szczurów waha się od 120-140 mmHg i wzrasta do 160 mmHg, gdy jest przytomne. Rozpocznij rejestrację temperatury timera i stopy po osiągnięciu prawidłowego ciśnienia.
Uwaga: Temperatura stopy powinna spaść o 2 °C po 5 minutach stałego ciśnienia. - Utrzymuj pozycję mankietu nad "kolanem" zwierzęcia przez cały czas niedokrwienia. Ciśnienie w mankietu zacznie spadać po kilku minutach lub jeśli kończyna szczura się porusza.
- Wielokrotnie pompuj bańkę w krótkich seriach, aby utrzymać pożądane ciśnienie w mankiecie Powtarzalne krótkie serie pompowania
- Zdalne niedokrwienie może być dostarczane w sposób ciągły przez od 5 do 15 minut. Protokół reperfuzji niedokrwiennej obejmuje 2 okresy 5-minutowego niedokrwienia z 5-minutową reperfuzją.
- Zmniejsz ciśnienie w mankiecie, poluzowując zawór ciśnienia powietrza. Sprawdź zmianę temperatury w trakcie protokołu niedokrwienia. Zwolnij mankiet.
- Kontynuuj eksperymentowanie z kontuzjami. Zwierzęta pod wpływem znieczulenia będą musiały zostać umieszczone na poduszce grzewczej. Kontynuuj monitorowanie zwierząt do czasu rozpoczęcia chodzenia. Zwierzęta nie mogą być zwrócone do pomieszczeń przed chodzeniem.