Formułowanie systemu nośników egzosomów naładowanego dopaminą

Streszczenie

Źródło: Yavuz, B., et al. Formułowanie i charakteryzowanie systemu nośników dopaminy opartego na egzosomach. J. Vis. Exp. (2022)

Ten film demonstruje formułę egzosomów obciążonych dopaminą, koncentrując się na przenikaniu błony indukowanej saponiną w celu zwiększenia enkapsulacji dopaminy w egzosomach.

Protokół

1. Ładowanie dopaminy do egzosomów

UWAGA: Po zakończeniu charakterystyki egzosomów mezenchymalnych komórek macierzystych Whartona Jelly (WJ-MSC), otrzymano egzosomy naładowane dopaminą jako system dostarczania leków. Ładowanie leku do egzosomów odbywa się metodą inkubacji.

1. Dodać 3 ml soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS) do zawiesiny egzosomu. Wysterylizuj rozcieńczoną zawiesinę przez filtrację za pomocą filtrów 0,22 μm. Przenieś 500 μl wysterylizowanej zawiesiny egzosomu do innej probówki.
2. Przygotować roztwór dopaminy (0,5 mg/ml) z wodą destylowaną. Dodaj 500 μl roztworu dopaminy do probówek zawierających egzosomy.
3. Dodaj saponinę do zawiesiny w kroku 1.2. Przygotować zawiesinę egzosomu i dopaminy inkubować przez 24 godziny w temperaturze 37 °C. UWAGA: Stężenie saponiny nie powinno przekraczać 0,002% całkowitego roztworu.
4. Ultraodwirować zawiesinę o masie 90 000 × g przez 70 minut, aby usunąć z pożywki wolną dopaminę i saponinę. Wyizolowane egzosomy należy przechowywać w temperaturze -20 °C do czasu użycia do dalszej analizy. nuta: Dodaj 0,02% kwasu askorbinowego, aby zapewnić stabilność przygotowanego roztworu dopaminy.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
0,22 μm filtr membranowy	Aisimo		Używany do procesu sterylizacji
15 mL probówka Falcon	Nest Używany		w etapie hodowli komórkowej
50 ml Probówka Falcon	Gniazdo Używany		w komórce etap hodowli
Odśrodkowy	Hitachi	CF16RN	Stosowany w etapie izolacji egzosomów
Chlorowodorek dopaminy H8502-10G	Sigma	H8502-10G	Stosowany w ładowaniu egzosomów dopaminy
Optima XPN-100 Ultrawirówka	Beckman Coulter		Stosowany w etapie izolacji egzosomów
Tabletka PBS	Biomatik	43602	W przygotowaniu roztworu PBS
Saponina	Sigma	47036-50G-F	Zastosowano go poprzez dodanie go do całkowitego roztworu w procesie ładowania egzosomem dopaminą.
Galaretka Whartona mezenchymalne komórki macierzyste	ATCC