Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Produkcja syntetycznego jedwabiu pajęczego w skali laboratoryjnej

27.7K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/4191

⸱

18 lipca 2012

W tym artykule

Podsumowanie

Pomimo wyjątkowych właściwości mechanicznych i biochemicznych jedwabiu pająków, materiał ten nie może być pozyskiwany w dużych ilościach metodami konwencjonalnymi. W niniejszej pracy opisujemy efektywną strategię przędzenia sztucznych włókien jedwabiu pająka, co stanowi istotny proces dla badaczy analizujących produkcję jedwabiu pająków oraz jego zastosowanie jako biomateriałów nowej generacji.

Streszczenie

Wraz z postępem społecznym i kurczeniem się zasobów, coraz ważniejsze staje się rozwijanie nowych technologii pozwalających na projektowanie biomateriałów nowej generacji o wysokich parametrach użytkowych. Opracowywanie tych nowych materiałów konstrukcyjnych musi być szybkie, kosztowo efektywne i opierać się na metodologiach przetwórstwa oraz produktach przyjaznych dla środowiska i zrównoważonych. Pająki przędą wiele różnych rodzajów nici o zróżnicowanych właściwościach mechanicznych, co stanowi bogate źródło materiałów inżynieryjnych nowej generacji dla biomimetyki, które mogą konkurować z najlepszymi materiałami syntetycznymi i naturalnymi. Ponieważ gromadzenie dużych ilości naturalnego jedwabiu pajęczego jest niepraktyczne, produkcja jedwabiu syntetycznego umożliwia naukowcom dostęp do nieograniczonych zasobów nici. W związku z tym, jeśli proces przędzenia zostanie usprawniony i dopracowany, sztuczne włókna pajęcze mogą znaleźć szerokie zastosowanie, od pancerzy ochronnych, szwów chirurgicznych, lin i kabli, przez opony i struny instrumentów muzycznych, aż po kompozyty dla lotnictwa i technologii kosmicznych. Aby udoskonalić proces produkcji syntetycznego jedwabiu i uzyskać włókna o niskiej zmienności właściwości materiałowych między poszczególnymi cyklami przędzenia, opracowaliśmy protokół przędzenia na mokro, który integruje ekspresję rekombinowanych białek jedwabiu pajęczego w bakteriach, oczyszczanie i zagęszczanie białek, a następnie ekstruzję włókien oraz mechaniczną obróbkę po przędzeniu. Jest to pierwsza prezentacja wizualna ukazująca krok po kroku proces przędzenia i analizy sztucznych włókien jedwabnych w skali laboratoryjnej. Przedstawia ona również szczegółowe zasady minimalizowania zmienności między włóknami przędzionymi z tej samej masy przędzalniczej. Wspólnie metody te przyspieszą proces produkcji sztucznego jedwabiu, prowadząc do uzyskania włókien o wyższej jakości, które przewyższą naturalny jedwab pajęczy.

Wprowadzenie

Pajęcza sieć posiada nadzwyczajne właściwości mechaniczne, które przewyższają wiele materiałów wytworzonych przez człowieka, w tym stal wysokowytrzymałą, Kevlar i Nylon.1 Pająki przędą co najmniej 6-7 różnych typów włókien o zróżnicowanych właściwościach mechanicznych, z których każde charakteryzuje się różnym stopniem wytrzymałości na rozciąganie i rozciągliwością, aby pełnić określone funkcje biologiczne.2 Naukowcy intensywnie dążą do wykorzystania pajęczej sieci jako biomateriałów nowej generacji ze względu na ich wybitne właściwości mechaniczne, biokompatybilność oraz nietoksyczny i ekologiczny charakter.3,4 Ze względu na kanibalis....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Schemat syntezy i oczyszczania białka; indukcja E. coli, chromatografia, liofilizacja, przędzenie włókien.
Przegląd graficzny: Biomimetyka procesu przędzenia

Biomimetyka naturalnej ścieżki produkcji pajęczego jedwabiu: droga do wytwarzania jedwabiu syntetycznego. Na tym obrazie przedstawiono główną gruczoł ampullate pająka tkacz złotawy, Nephila clavipes, oraz komponenty wykorzystywane do naturalnej produkcji jedwabiu (biały tekst). Region ogona syntetyzuje duże....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Włókna syntetyczne przędzone zgodnie z tą metodologią wykazują właściwości mechaniczne z tego samego rzędu wielkości co włókna naturalne. Dzięki zmechanizowaniu procesów nawijania i wyciągania po przędzeniu, co ogranicza wpływ błędu ludzkiego, zmienność eksperymentalna między próbkami jest lepiej kontrolowana i znacznie zredukowana.

Nasza metodologia stwarza możliwość zbadania właściwości mechanicznych innych włókien przędzionych z białek rekombinowanych, kodowanych przez cDNA innych członków .......

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Nie zadeklarowano konfliktów interesów.

Podziękowania

Niniejsza praca była wspierana przez granty NSF RUI MCB-0950372 oraz DMR-1105310 zatytułowane odpowiednio „Molecular Characterization of Black Widow Spider Silks” oraz „Mechanical Behavior of Spider Glue Silks”.

....

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Zestaw do ekspresji pBAD/TOPO ThioFusion Expression KitInvitrogenK370-01
Odczynnik do lizy komórek FastBreak Cell Lysis Reagent, 10xPromegaV857C
Agaroza Ni-NTAQiagen30210Zawiera instrukcje dotyczące buforów
Zestaw do barwienia srebrem ProteoSilver Silver Stain Kit Sigma-AldrichPROTSIL1-1KT
Liofilizator FreeZoneLabconco7960041FreeZone 12Plus
Heksafluoroisopropanol (HFIP)Sigma-Aldrich52512
StrzykawkaHamilton7657-01250 μL
IgłaHamilton7780-01Rozmiar 26s Gauge, igła z tępym końcem, zdejmowalna
Pompa strzykawkowaHarvard Apparatus70220811Plus
Suwmiarka cyfrowaCarreraCP5906Zakres 0-150 mm
Pinceta ze stali nierdzewnejWorld Precision Instruments501764Mini Dumont #M5S
SilnikNature Mill709052912VDC, prędkość 2 rpm
Siłownik liniowyWarner Electric01-D024-0050-A06-LP-IP6524VDC, zakres 6 cali
Mikroskop sekcyjnyLeica MicrosystemsLeica MZ16
Cyfrowa kamera do mikroskopuLeica MicrosystemsDFC320Oprogramowanie: Leica Application Suite v2.8.1
Nożyczki VannasaWorld Precision Instruments500260
MikrotensometrAurora Scientific310CSystem dwutrybowy 5N

Bibliografia

  1. Gosline, J. M., Guerette, P. A., Ortlepp, C. S., Savage, K. N. The mechanical design of spider silks: from fibroin sequence to mechanical function. J. Exp. Biol. 202, 3295-3303 (1999).
  2. Foelix, R. Biology of spiders. , Oxford University Press. New York. (1996).
  3. Vollrath, F., Knight, D. P.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Ekspresja białek rekombinowanychoczyszczanie białekprotokół przędzenia na mokroekstruzja włókienwyciąganie po przędzeniutesty mechaniczneanaliza SDS-PAGEanaliza Western blotskaningowa mikroskopia elektronowa