W niniejszym przedstawiamy model przeszczepu nerki u szczura do nieinwazyjnej oceny ostrego odrzucenia allograftu przy użyciu pozytonowej tomografii emisyjnej z zastosowaniem 18F-fluorodeoksyglukozy.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Nieinwazyjne obrazowanie ostrego odrzucenia allograftu po przeszczepieniu nerki u szczura z wykorzystaniem 18F-FDG PET
* These authors contributed equally
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Liczba pacjentów z schyłkową niewydolnością nerek oraz liczba biorców przeszczepionych nerek stale rośnie. Epizody ostrego odrzucania komórkowego allograftu (AR) stanowią negatywny czynnik prognostyczny dla długoterminowego przeżycia przeszczepu, a jego terminowa diagnostyka jest kluczowa dla funkcji allograftu 1. Obecnie AR można jednoznacznie zdiagnozować jedynie za pomocą biopsji gruboigłowej, która jako metoda inwazyjna niesie ze sobą znaczne ryzyko uszkodzenia lub nawet utraty przeszczepu. Co więcej, biopsje nie są możliwe do wykonania u pacjentów przyjmujących leki przeciwkrzepliwe, a ograniczony obszar pobierania próbek w tej technice może prowadzić do wyników fałszywie ujemnych, jeśli AR ma charakter ogniskowy lub plamisty. W konsekwencji doprowadziło to do ciągłych poszukiwań nowych metod wykrywania AR, które często muszą być przeprowadzane na zwierzętach, z wykorzystaniem różnych modeli transplantacji.
Od początku lat 60. transplantacja nerek szczura jest uznaną metodą eksperymentalną służącą do badania i analizy odrzucania przeszczepu (AR) 2. W niniejszej pracy przedstawiamy ponadto zastosowanie pozytonowej tomografii emisyjnej (PET) dla małych zwierząt z użyciem 18F-fluorodeoksyglukozy (FDG) w celu oceny AR w allogenicznym modelu transplantacji nerek u szczura po nefrektomii jednostronnej oraz proponujemy obrazowanie FDG-PET przeszczepu jako nową opcję nieinwazyjnej, specyficznej i wczesnej diagnostyki AR, również w przypadku ludzi 3. Co więcej, metoda ta może być stosowana w badaniach kontrolnych w celu usprawnienia monitorowania odrzucania przeszczepu 4.
Protokół
1. Pobieranie organów od dawcy
- Przygotować mikroskop stereotaktyczny, zważyć szczura w wieku 8-10 tygodni (masa ciała dawcy i biorcy powinna być zbliżona).
- Zanestezjować szczura dawcę (Lewis Brown Norway F1, LBN F1) poprzez inhalację tlenu/izofluranu (izofluran 4 %/2 L/min tlenu). Utrzymać znieczulenie, obniżając stężenie izofluranu do 2-2,5%.
- Umieścić znieczulonego szczura na podkładce chirurgicznej. Przymocować kończyny szczura do podkładki za pomocą taśmy klejącej i nałożyć maść oftalmiczną (Bepanthen, Bayer) do oczu zwierzęcia.
- Wygolić i zdezynfekować brzuch szczura, a następnie wykonać cięcie wzdłuż linii środkowej brzuch....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Histologia
Podczas AR leukocyty, t.j. głównie limfocyty T, są rekrutowane do przeszczepu, podczas gdy stopień nasilenia odrzucania odzwierciedla poziom stanu zapalnego. W barwieniu Periodic-Acid-Schiff (PAS) przedstawionym tutaj (Rysunek 1), allograft nerkowy wykazuje istotne histologiczne oznaki AR, mianowicie zapalenie kłębuszków, zapalenie kanalików, zapalenie śródbłonka oraz naciekanie przeszczepu (Rysunek 1, aTX POD4) (POD = doba pooperacyjna), podc.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Obrazowanie FDG-PET stanowi nową opcję diagnostyczną w przypadku ostrego odrzucenia przeszczepu. Dzięki swojej nieinwazyjności i specyfice, FDG-PET wykazuje przewagę w porównaniu z klasyczną diagnostyką opartą na biopsji gruboigłowej. W przeciwieństwie do biopsji, która ogranicza się do niewielkiej próbki tkanki, analiza FDG-PET obejmuje cały przeszczep. Ponadto metodę tę można zastosować u pacjentów przyjmujących leki przeciwkrzepliwe, a badania PET można powtarzać np. w celu monitorowania skuteczności leczenia.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Nie zgłoszono żadnych konfliktów interesów.
Podziękowania
Niniejsza praca została sfinansowana przez Deutsche Forschungsgemeinschaft (SFB 656, Münster, Niemcy, projekty C7 i C6) oraz IZKF Münster (jednostka centralna SmAP). Autorzy są wdzięczni Truc Van Le, Anne Kanzog, Ute Neugebauer, Wiebke Gottschlich i Romanowi Priebe za doskonałą pomoc techniczną, a Danielowi Burkertowi i Svenowi Fatum za przygotowanie radiotracerów.
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Sprzęt | |||
| Portaigła Mathieu – 14 cm | Fine Science Tools | 12010-14 | |
| Kleszczyki do mikronigieł Castroviejo - 9 cm | Fine Science Tools | 12061-01 | |
| Nożyczki chirurgiczne - ostre/tępe | Fine Science Tools | 14001-12 | |
| Nożyczki irydologiczne - ToughCut proste 11,5 cm | Fine Science Tools | 14058-11 | |
| Nożyczki sprężynowe do studentów Vannasa | Fine Science Tools | 91500-09 | |
| Nożyczki sprężynowe Vannasa – ostrza 3 mm | Fine Science Tools | 15000-00 | |
| Kleszczyki chirurgiczne do tkanek studenta - 1x2 ząbki, 12 cm | Fine Science Tools | 91121-12 | |
| Pinceta Dumont SS-45 - Inox Medical | Fine Science Tools | 11203-25 | |
| Aplikator do klipsów Micro-Serrefine z blokadą | Fine Science Tools | 18056-14 | |
| Micro-Serrefine 6 mm x 1 mm | Fine Science Tools | 18055-03 | |
| Micro-Serrefine 4 mm x 0,75 mm | Fine Science Tools | 18055-04 | |
| Odczynnik | |||
| izofluran (np. Forene (100% v/v) | Abbott | ||
| środek antyseptyczny do skórynp. Octeniderm) | Schülke | ||
| powidon jodu (np. Betaisodona) | Mundipharma | ||
| maść okulistyczna (np. Bepanthen) | Bayer | ||
| Buprenorfina (np. Temgesic) | RB Pharmaceuticals | ||
| roztwór perfuzyjny HTK (np. CUSTODIOL HTK) | dr Franz Köchemia | ||
| nić chirurgiczna Mersilene 0 | Ethicon | EH6665E | |
| nić chirurgiczna Mersilene 4-0 | Ethicon | EH6732H | |
| nić chirurgiczna Prolene 6-0 | Ethicon | 8697H | |
| nić chirurgiczna Ethilon 9-0 | Ethicon | 2809G | |
| jedwab chirurgiczny 5-0 | Vömel | 14739 | |
| Kaniula (np. Microlance 3, 27G ¾) | BD | 302200 |
Bibliografia
- Wu, O., Levy, A. R., Briggs, A., Lewis, G., Jardine, A. Acute rejection and chronic nephropathy: a systematic review of the literature. Transplantation. 87, 1330-1339 (2009).
- Miller, B. F., Gonzales, E., Wilchins, L. J., Nathan, P. Kidney transplantation in the rat. Nature. 194
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
