Obrazowanie tkanek biologicznych metodą spektrometrii mas z desorpcją i jonizacją metodą elektrorozpylania

Podsumowanie

Spektrometria mas z jonizacją metodą desorpcji (DESI-MS) to metoda otoczenia, za pomocą której próbki, w tym tkanki biologiczne, mogą być obrazowane przy minimalnym przygotowaniu próbki. Poprzez rasterowanie próbki poniżej sondy jonizacyjnej, ta technika oparta na rozpylaniu zapewnia wystarczającą rozdzielczość przestrzenną, aby dostrzec interesujące cechy molekularne w obrębie skrawków tkanki.

Streszczenie

Obrazowanie spektrometrią mas (MSI) dostarcza nieukierunkowanych informacji molekularnych o najwyższej specyficzności i rozdzielczości przestrzennej do badania tkanek biologicznych w skali od setek do dziesiątek mikronów. W przypadku wykonywania w warunkach otoczenia wstępna obróbka próbki staje się zbędna, co upraszcza protokół przy jednoczesnym zachowaniu wysokiej jakości uzyskanych informacji. Desorpcyjna jonizacja elektronatryskowa (DESI) to technika MSI oparta na rozpylaniu w otoczeniu, która umożliwia bezpośrednie pobieranie próbek powierzchni na wolnym powietrzu, nawet in vivo. W przypadku użycia ze stolikiem na próbkę sterowaną programowo, próbka jest rastrowana pod sondą jonizacyjną DESI, a poprzez dziedzinę czasu informacje m/z są skorelowane z rozkładem przestrzennym związków chemicznych. Dokładność sygnału wyjściowego DESI-MSI zależy od orientacji i położenia źródła w stosunku do powierzchni próbki i wlotu spektrometru masowego. W niniejszym artykule omówiono sposób przygotowania skrawków tkanek do obrazowania DESI oraz dodatkowe warunki eksperymentalne, które bezpośrednio wpływają na jakość obrazu. W szczególności opisujemy protokół obrazowania skrawków tkanki mózgowej szczura za pomocą DESI-MSI.

Wprowadzenie

Nieukierunkowane obrazowanie za pomocą spektrometrii mas ułatwia pozyskiwanie informacji chemicznych do zastosowań odkrywczych i generujących hipotezy. Z drugiej strony, celowane obrazowanie znanej substancji chemicznej będącej przedmiotem zainteresowania może ułatwić zwiększenie czułości i selektywności poprzez opracowanie specjalnej metody. Obrazowanie metodą spektrometrii mas (MSI) jest najczęściej wykonywane na tkankach przy użyciu ^MALDI,1 spektrometrii mas jonów wtórnych (SIMS)^,2 i technik jonizacji otoczenia, w tym jonizacji elektronatryskowej desorpcji (DESI)^,3 laserowej ablacji i jonizacji elektrorozpylania (LAESI),^4,5 i sondy do pobierania próbek powierzchni cieczy mikrozłącza (LMJ-SSP). ⁶ W MALDI i SIMS próbki muszą być fizycznie usunięte z próbki i muszą być płaskie i cienkie, ponieważ są analizowane w wysokiej próżni. MALDI wymaga pokrycia próbki matrycą pochłaniającą promieniowanie, co stanowi dodatkowy i kłopotliwy etap przygotowania próbki. SIMS ma najwyższą rozdzielczość poprzeczną, ale bombardowanie wysokoenergetycznymi cząstkami powoduje rozległą fragmentację molekularną. W związku z tym MSI za pomocą metod otoczenia wypełnia niszę, w której pożądana jest miękka analiza przy minimalnym przygotowaniu próbki. Jednak do tej pory wszystkie metody są nadal ograniczone wymogiem płaskich powierzchni próbek.

DESI używa pneumatycznie wspomaganego naładowanego rozpuszczalnika w sprayu skierowanym na powierzchnię próbki do desorpcji i jonizacji analitów. ⁷ Działający model desorpcji i późniejszej jonizacji przez DESI jest znany jako "model zbierania kropel". ^8-10 Naładowane kropelki pierwotne wytwarzane przez sondę DESI zderzają się z powierzchnią, zwilżając ją i tworząc cienką warstwę, w której analit jest rozpuszczany przez mechanizm mikroekstrakcji ciało stałe-ciecz⁸ Kolejne zderzenia kropel powodują przeniesienie pędu i oderwanie kropel wtórnych zawierających materiał wyekstrahowany z powierzchni. ^9,10 Ostatecznie uważa się, że jony w fazie gazowej są wytwarzane w procesach podobnych do ESI następujących po odparowaniu jonów, modelach reszt ładunkowych lub innych ^modelach,11 jednak dokładny proces tworzenia jonów w DESI nie został jeszcze udowodniony eksperymentalnie. ¹² Czułość DESI jest silnie zależna od rozpuszczalności analitu w rozpuszczalniku do rozpylania, ponieważ desorpcja opiera się na miejscowej mikroekstrakcji. ¹³

Gdy jest używany z kontrolowanym programowo stolikiem na próbkę, próbka jest skanowana jednokierunkowo z przechodzeniem pod sondę jonizacyjną DESI, a poprzez dziedzinę czasu, informacje m/z są skorelowane z przestrzennym rozkładem substancji chemicznej (Rysunek 1). Od czasu pierwszego eksperymentu DESI-MSI, w którym Van Berkel i Kertesz doprowadzili do słuszności zasady w 2006 r.^,14 technika ta znacznie się rozwinęła,15 z zgłoszonymi zastosowaniami w analizie lipidów,3,16 metabolitów ^leków,17,18 biomarkerów ^choroby,19 tkanki ^{mózgowej,3,18,20} tkanki ^płucnej,18 tkanki nerkowej,18 tkanki jąder,18 nadnerczy,17 płytek chromatografii cienkowarstwowej, ²¹ i powierzchnie glonów. ^{22 Rozdział 22} Rutynowa rozdzielczość obrazów uzyskanych przez DESI-MSI wynosi 100-200 μm, co ostatecznie zależy od efektywnej powierzchni wyodrębnionej przez spray, ale odnotowano rozdzielczości tak niskie, jak 40 μm. ^23-25 Taka rozdzielczość i łatwość analizy sprawia, że DESI-MSI nadaje się do szybkiej i prostej analizy próbek tkanek biologicznych o powierzchniach w zakresie 0,5-5^cm2, umożliwiając pozyskanie cennych informacji przestrzennych w celu lepszego zrozumienia procesów biologicznych²⁶. Tutaj, jako przykład typowego zastosowania DESI-MSI, dokonujemy przeglądu szczegółów proceduralnych przeprowadzenia udanego eksperymentu obejmującego obrazowanie lipidów w tkankach mózgowych szczura. Dwa najbardziej krytyczne kroki w protokole to przygotowanie tkanek²⁷ i optymalizacja źródła jonów DESI, jak opisano poniżej.

Protokół

1. Sekcja tkanek

1. Przechowywać zamrożoną całą tkankę w zamrażarce w temperaturze -80 °C, aż będzie gotowa do pokrojenia.
2. Pozwól, aby próbka tkanki osiągnęła temperaturę w kriomikrotomie przed sekcją (30 min). Ustaw temperaturę ostrza i próbki na -30 °C.
3. Gdy tkanka osiągnie temperaturę, dotykając próbki pęsetą, przeciąć przód lub tył mózgu, w zależności od tego, która część mózgu jest przedmiotem zainteresowania, aby uzyskać wystarczającą powierzchnię montażową (tj. jeśli przód mózgu ma podstawowe znaczenie, zamontuj tylną część mózgu na uchwycie).
   1. Nałóż ~0,5 ml Optimum Temperature Compound (OCT, Tissue-Tek, Sakura) na uchwyt w środku i za pomocą pęsety przytrzymaj próbkę w miejscu w OCT, aż zastygnie. Po całkowitym zamrożeniu OCT zamontuj uchwyt w uchwycie na próbkę.
   2. Preferowana jest minimalna ilość OCT używana do mocowania próbki (w przeciwieństwie do mocowania próbki w bloku OCT, jak to jest powszechnie robione w innych procedurach histologicznych) w celu zminimalizowania zanieczyszczenia próbki. Zanieczyszczenie próbki przez OCT jest szkodliwe dla DESI i procesu obrazowania ze względu na tłumienie jonów.
4. Typowe skrawki tkanek niezbędne do obrazowania stwardnienia rozsianego mają grubość od 12 do 18 μm. Przekrojć tkanki o żądanej grubości w zalecanym zakresie. Rozmrozić każdą pociętą tkankę, lekko dotykając szkiełka mikroskopu o temperaturze pokojowej nad przekrojem. Po zamontowaniu próbki należy zachować ostrożność, aby nie dotykać części tkanki, ponieważ zmieni to rozkład chemiczny i skład.

Uwaga: Zalecamy zamontowanie dwóch sekcji na slajd, używając jednej sekcji do optymalizacji, a drugiej do obrazowania. Jeśli skrawki nie są przeznaczone do natychmiastowego obrazowania, przechowuj szkiełka w zamrażarce w temperaturze -80 °C w pudełku na szkiełka, aż będą gotowe do analizy.

5. W przypadku analizy przechowywanych skrawków wyjmij szkiełko z zamrażarki, natychmiast przenieś do eksykatora próżniowego i pozostaw ~15-20 minut do rozmrożenia. Pozostawienie próbki w eksykatorze przez dłuższy czas spowoduje wysuszenie próbki i zmniejszenie wydajności DESI. Optymalizacja źródła jonów DESI zostanie przeprowadzona z próbką tkanki po jej rozmrożeniu, jednak ze względu na czas, okres, w którym próbka jest rozmrażana, służy jako idealny czas na inicjalizację sprzętu.
   1. Używając acetonitrylu z 1% kwasem octowym jako rozpuszczalnikiem DESI, włączyć pompę strzykawkową o natężeniu przepływu 5 μl/min. Niższe natężenie przepływu zmniejszy stronę uderzenia sprayu DESI i efektywny rozmiar piksela, ale wyższe natężenie przepływu może być konieczne dla uzyskania wystarczającej czułości. Dlatego natężenie przepływu (zwykle 1-5 μl/min) powinno być zoptymalizowane dla każdego zastosowania oraz pożądanej czułości i rozdzielczości. Upewnij się, że strzykawka zawiera wystarczającą ilość rozpuszczalnika do pełnej optymalizacji i obrazowania przy danej szybkości przepływu.
   2. Gdy rozpuszczalnik zacznie kapać z końcówki źródła, włącz gaz do nebulizacji azotu pod ciśnieniem 160 psi.
   3. Włączyć zasilanie wysokonapięciowe podłączone do źródła jonów o napięciu 3 600 V.
6. Zamontuj suwak na stoliku ruchu i rozpocznij optymalizację źródła jonów i MS

2. Optymalizacja DESI

1. System DESI składa się z sondy źródłowej (patrz rysunek 2), strzykawki i pompy lub alternatywnego systemu dostarczania rozpuszczalnika, sprężonego azotu, stolika na próbkę translacyjną i mocowania. Kontynuuj optymalizację źródła DESI po dostrojeniu spektrometru mas do odpowiedniego zakresu mas i analitów, które Cię interesują.
   1. Jeśli komponenty źródłowe nie zostały jeszcze włączone, zapoznaj się ze wskazówkami w sekcjach 1.5.1-3.
   2. Zmienne omówione w tych rozdziałach są zalecane do obrazowania tkanek biologicznych. Jednak zmienne te powinny być zoptymalizowane dla różnych typów tkanek lub próbek. Alternatywne rozpuszczalniki, natężenia przepływu, ciśnienia i napięcia gazu nebulizującego zostały zgłoszone do obrazowania tkanek biologicznych. ^16-18
2. Upewnij się, że początkowo źródło DESI nie dotyka szkiełka podstawowego i nie jest skierowane na żadną część przekroju tkanki. Zapewni to, że sonda nie zostanie uszkodzona w początkowym procesie optymalizacji i nie zanieczyści żadnej części zestawu poprzez kontakt z próbką tkanki.
   1. Dobrą pozycją wyjściową jest końcówka znajdująca się 3 mm od powierzchni próbki i 5 mm od wlotu kapilarnego MS, z sondą pod kątem 55° w stosunku do powierzchni próbki. Wewnętrzna kapilara sondy DESI powinna wystawać ~1 mm poza kapilarnę zewnętrzną. Wszystkie te parametry zostaną zoptymalizowane.
3. Kapilara interfejsu MS powinna mieć kąt zbierania ~15° w stosunku do powierzchni próbki, aby zapewnić optymalny transfer jonów. Dostosuj wysokość stolika tak, aby kapilara MS unosiła się nad powierzchnią próbki; Kapilara powinna znajdować się <1 mm od powierzchni, jak najbliżej bez dotykania.
4. Ustaw sondę DESI w wymiarze x w stosunku do wlotu kapilary MS tak, aby znajdowały się bezpośrednio w linii.
5. Dostosuj pozycje y i z źródła DESI, aby uzyskać optymalną czułość, korzystając z dodatkowej sekcji tkankowej. Należy pamiętać, że ponieważ sonda DESI jest skierowana na jeden obszar próbki, w końcu zdesorbuje i zjonizuje wszystkie anality w tym obszarze, a sygnał będzie stopniowo zmniejszał się w miarę tego zdarzenia. Ważne jest, aby wykonać ten krok tak szybko, jak to możliwe.
   1. Dlatego w całym procesie optymalizacji próbka musi zostać przeniesiona pod głowicę natryskową, aby upewnić się, że świeża próbka jest analizowana i że wszelkie zmiany sygnału są spowodowane optymalizacją źródła, a nie zubożeniem próbki. Biorąc jednak pod uwagę zróżnicowany skład chemiczny różnych regionów tkanki, bezpośrednie porównanie intensywności jonów w całym przekroju tkanki nie jest w pełni dokładne. Wzgórze mózgu zapewnia dość duży obszar o bardziej spójnym składzie chemicznym, ale nadal nie jest idealnie jednolity. Alternatywnie, oznaczenie czerwonym Sharpie, który zawiera barwnik rodaminę 6G ([M]⁺, m/z 443), na szkiełku podstawowym z dala od próbki zapewnia silną odpowiedź MS przez DESI i może być również wykorzystane do optymalizacji, ale biorąc pod uwagę inną formę próbki i analit, warunki te mogą nadal nie korelować z idealną konfiguracją dla tkanek biologicznych.
   2. Zalecana separacja y między końcówką źródła a wlotem kapilary: ~4 mm, zalecana separacja z między końcówką a powierzchnią próbki: ~1,5 mm. Chociaż parametry te będą nieco inne dla każdej konfiguracji eksperymentalnej.
   3. Biorąc pod uwagę geometrię i kąt sondy, należy wziąć pod uwagę, że pozycje wymiarów y i z są ze sobą powiązane w odniesieniu do efektywnej transmisji kropelek zawierających rozpuszczalnik i analit. Zmiana jednej zmiennej będzie wymagała późniejszej modyfikacji drugiej, aby utrzymać tę samą pozycję uderzenia natrysku i jego kąty przenoszenia.
6. Dostosuj odległość, na jaką wewnętrzna kapilara wytłacza się z zewnętrznej kapilary źródła, aby uzyskać maksymalną czułość i minimalny rozmiar plamki uderzenia. Ostrzeżenie: Upewnij się, że wysokie napięcie jest WYŁĄCZONE podczas dokonywania tej regulacji.
7. Geometria źródła zostanie uznana za optymalną, gdy zaobserwowany zostanie maksymalny sygnał.
   1. Zmienne zoptymalizowane w sekcjach 2.5-2.6 są ze sobą powiązane, dlatego dostosowanie jednej z nich będzie z natury wymagało ponownego dostosowania drugiej w celu utrzymania niezbędnej geometrii źródło-próbka-wlot lub dostosowania warunków omówionych w sekcji 1.5.1-3.
8. Dodatkowo element grzejny otaczający kapilarnę transferową do spektrometru mas może poprawić czułość, ułatwiając desolwencję naładowanych kropelek analitu powstających podczas procesu jonizacji. W tym przypadku używamy grzałki linowej zwijanej wokół kapilary transferowej ustawionej na 100 °C.

3. Obrazowanie tkanek

1. Podczas procesu obrazowania stolik próbki przesuwa próbkę pod sondę DESI i kapilarnę wlotową MS, a wszystkie inne elementy pozostają nieruchome. Parametry ruchu stolika powinny być dobrane w oparciu o rozmiar pióropusza uderzeniowego DESI i optymalną czułość.
   1. Większy pióropusz uderzeniowy spowoduje wyższą intensywność jonów, biorąc pod uwagę, że więcej próbki jest desorbowane, jednak w przypadku obrazowania spowoduje to również większy rozmiar piksela, a tym samym gorszą rozdzielczość obrazu.
2. Etap translacji użyty w tym eksperymencie jest zbudowany samodzielnie i kontrolowany przez program LabView, który pozwala na kontrolę prędkości rastrowania i odstępów między liniami dla obrazu o zadanych wymiarach. Stage motion control VI użyty w tym eksperymencie jest dostępny pod adresem omnispect.bme.gatech.edu. Alternatywnie można zastosować dostępne na rynku źródło i stolik DESI, takie jak zautomatyzowane źródło 2D Omni Spray firmy Prosolia Inc. (Indianapolis, IN, USA).
   1. W przypadku tkanek mózgowych typowy rozmiar obrazu wynosi 10 x 15 mm, a biorąc pod uwagę użyte parametry ruchu sceny, obraz zajmie około 3 godzin.
      1. Zaprogramuj oprogramowanie sterujące LabView VI lub jego odpowiednik do żądanych warunków obrazowania, używając prędkości skanowania stolika 80 μm/s i odstępów między wierszami 200 μm. W przypadku korzystania ze źródła Omni Spray parametry ruchu powinny być ustawione na prędkość skanowania 100-200 μm/s i odstęp między liniami 200 μm. Należy pamiętać, że te parametry ruchu można zmieniać w zależności od liczby żądanych pikseli w każdym wymiarze i wymaganej czułości.
         1. Wykazano, że mniejsze odstępy między wierszami poprawiają jakość obrazu, a szybkość skanowania ma mniejszy wpływ. ²⁵ Należy jednak zauważyć, że niekoniecznie oznacza to poprawę rozdzielczości obrazu, ponieważ jest ona silnie uzależniona od wielkości plamki uderzeniowej. Mniejsza prędkość skanowania i mniejsze odstępy między liniami znacznie wydłużą czas analizy i dlatego muszą być zoptymalizowane dla każdego rodzaju tkanki lub próbki.
      2. Przy akwizycji spektralnej MS ustawionej na 1 skanowanie/s i utworzeniu obrazu jako 1 piksel/skan, szybkość stołu montażowego określa rozmiar piksela w wymiarze x, podczas gdy odstępy między liniami określają rozmiar piksela w wymiarze y. Chociaż rzeczywisty rozmiar piksela obrazu jest większy ze względu na rozpylanie aerozolu, wolniejszy ruch daje więcej czasu na desorpcję i wykrycie analitów.
   2. Podaj ścieżkę katalogu i nazwę pliku dla plików pozycji i czasu, które mają być rejestrowane podczas obrazów w LabView VI.
3. Przygotowując się do akwizycji danych widma masowego, należy obliczyć całkowity czas potrzebny na obrazowanie. Program Labview używany przez naszą grupę automatycznie podaje tę wartość, ale jeśli używana jest alternatywna kontrola etapu, to obliczenie to jest konieczne dla ustawień akwizycji danych MS.
   1. W przypadku korzystania z automatycznego źródła i stolika Omni Spray każda linia obrazu jest rejestrowana jako indywidualne przebiegi. Czas na linię i liczba linii niezbędnych do uzyskania danych wymiarów obrazowania są obliczane za pomocą oprogramowania sterującego Omni Spray, które są wprowadzane do oprogramowania spektrometru masowego.
4. Upewnij się, że prędkość skanowania spektrometru mas wynosi 1 spektrum/s i ustaw czas akwizycji instrumentu tak, aby odpowiadał całkowitemu obliczonemu czasowi.
   1. Ustaw prędkość skanowania spektralnego na 1 spektrum/sek.
   2. Pozyskaj dane w trybie PROFILE i upewnij się, że zakres m/z jest odpowiedni dla interesujących nas gatunków. Pamiętaj, że DESI produkuje również wielokrotnie naładowane anality, tak jak w ESI.
   3. Ustaw czas akwizycji tak, aby odpowiadał całkowitemu czasowi obrazu podanemu przez LabView.
5. Umieść miejsce uderzenia sprayu w lewym górnym rogu obszaru, który ma być obrazowany.
6. Rozpocznij jednoczesną akwizycję danych MS i ruch sceniczny.
7. Po zakończeniu zbierania danych przywróć spektrometr masowy do trybu STANDBY.
8. Wyłącz wysokie napięcie źródła DESI.
9. Wyłącz gazowy azot.
10. Wyłączyć pompę strzykawkową.

4. Przetwarzanie obrazu

1. Dane widma masowego, w połączeniu z danymi o czasie i położeniu etapu, zapisanymi jako pliki tekstowe za pośrednictwem LabView, muszą zostać "złożone" w obraz 2D korelujący współrzędne pikseli z odpowiednimi widmami. Prezentowane tutaj obrazy zostały przetworzone za pomocą oprogramowania opartego na Matlab, które jest dostępne bezpłatnie pod adresem: omnispect.bme.gatech.edu. Jeśli dane są pozyskiwane za pomocą źródła Omni Spray, oprogramowanie do konwersji danych Firefly jest używane do tworzenia kostki danych do wizualizacji obrazu w BioMAP (www.maldi-msi.org).
2. W przypadku danych uzyskanych za pomocą spektrometru mas Jeol AccuTOF, zarejestrowany chromatogram musi zostać wyeksportowany w formacie .cdf w celu dalszej analizy.
   1. Korzystając z DataManager w MassCenter, najpierw przekonwertuj uzyskane dane na dane z centroidami (Tools → Convert Acquistion Data to Centroid). Następnie wyeksportuj dane w formacie .cdf za pomocą kombinacji Ctrl + Shift + E, a następnie Narzędzia → Eksportuj.
3. Prześlij surowe dane spektralne mas .cdf oraz dwa pliki tekstowe, pozycję i czas, na stronę internetową OmniSpect. Dane obrazowe przetworzone przez Firefly można wizualizować w BioMAP.
   1. Dalsze przetwarzanie danych, w tym analiza statystyczna za pomocą nieujemnej faktoryzacji macierzy lub wykreślanie pojedynczego interesującego nas jonu, można przeprowadzić bezpośrednio na stronie internetowej.
   2. Alternatywnie kostkę danych surowych można wyeksportować do analizy w Matlabie.

Wyniki

Rysunek 3 pokazuje reprezentatywne spektrum uzyskane z nieleczonego wycinka mózgu szczura. W trybie dodatnim widmo masowe jest zdominowane przez fosfatydylocholiny ze względu na ich wysoką skuteczność jonizacji (przypisywaną dodatnio naładowanej czwartorzędowej grupie amonowej). Całkowity obraz jonowy przekroju tkanki jest również pokazany na rycinie 3, pokazując obfity sygnał w całej sekcji mózgu. Kluczowe wykryte lipidy przedstawiono w Tabeli 1 poprzez porównania w lit...

Dyskusja

Optymalizacja geometrii źródła DESI ma kluczowe znaczenie dla udanych eksperymentów MSI. Wiele zmiennych przyczyniających się do wyrównania systemu ma bezpośredni wpływ na czułość i rozdzielczość obrazu. Jeśli podczas optymalizacji eksperymentator ma trudności z uzyskaniem sygnału, zalecamy użycie czerwonej plamki Sharpie narysowanej na szkiełku jako punktu odniesienia; barwnik rodamina 6G, m/z 443 wytwarza silny sygnał w trybie jonów dodatnich i może być stosowany do wstępnej optymalizacji. Ponadto wybór rozpuszczalnika...

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule

Nazwa	Firma	Numer katalogowy	Komentarze
Reodczynniki
Tissue-Tek O.C.T. Compound	Sakura-Finetek	4583	http://www.sakuraeu.com/products/showitem.asp?cat=11& subcat=48
Acetonitryl	EMD	AX0156-6	OmniSolv, LC-MS Grade
Kwas octowy	Sigma Aldrich	695092-500 ml
SprzętMikrotom kriostatu
	Thermo Scientific	CryoStar* NX70	Do cięcia tkanek można użyć dowolnego dostępnego mikrotomu http://www.thermoscientific.com/ecomm/servlet/productsdetail?productId=13958375&groupType=PRODUCT&searchType=0&storeId=11152&from=search&ca=cryostar
Spray Omni® Głowica natryskowa DESI	Prosolia Inc.		Można również użyć 2-D Omni Spray® Zestaw źródłowy zamiast składania komponentów eksperymentu obrazowania http://www.prosolia.com/sources.php
Zasilacz wysokiego napięcia Stanford	Research Systems, Inc.	PS350/5000V-25W	http://www.thinksrs.com/products/PS300.htm
Grzejnik linowy, RTD, sterownik	Omega		http://www.omega.com/toc_asp/subsectionSC.asp?subsection=M02& book=Grzałki
Labview	National Instruments	Wersja 7.1
Etap translacyjny	Prior Scientific	Optiscan II	a href="http://www.prior.com/productinfo_auto_motorized_optiscan.html" target="_blank">http://www.prior.com/productinfo_auto_motorized_optiscan.html
Spektrometr masowy AccuTOF	JEOL	JMS-T100LC	Może używać dowolnego spektrometru masowego wyposażonego w rozszerzony interfejs kapilarnego ciśnienia atmosferycznego