Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Neurony węchowe uzyskane przez biopsję nosa w połączeniu z mikrodysekcją laserową: potencjalne podejście do badania odpowiedzi na leczenie w zaburzeniach psychicznych

9.2K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/51853

⸱

4 grudnia 2014

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Psychiatry, Johns Hopkins University, 2Department of Psychiatry and Behavioral Sciences, Howard University, 3Department of Otolaryngology-Head and Neck Surgery, Johns Hopkins University, 4Department of Psychiatry, Sheppard Pratt Hospital, 5Department of Psychiatry, Indiana University

W tym artykule

Podsumowanie

W tym badaniu opracowano i zweryfikowano nową platformę do badania wewnątrzneuronalnych sygnatur molekularnych odpowiedzi na leczenie w chorobie afektywnej dwubiegunowej (ChAD). Nabłonek węchowy od pacjentów z ChAD uzyskano za pomocą biopsji nosa. Następnie mikrodysekcję laserową połączono z Real Time RT PCR w celu zbadania sygnatury molekularnej odpowiedzi litu w ChAD.

Streszczenie

Choroba afektywna dwubiegunowa (BD) to ciężkie zaburzenie neuropsychiatryczne o słabo poznanej patofizjologii i zazwyczaj leczone stabilizatorem nastroju, węglanem litu. Badania na zwierzętach, a także badania genetyczne na ludziach wskazują, że lit wpływa na cele molekularne, które są zaangażowane we wzrost, przeżycie i dojrzewanie neuronów, a zwłaszcza na cząsteczki zaangażowane w sygnalizację Wnt. Biorąc pod uwagę wyzwanie etyczne związane z uzyskaniem biopsji mózgu w celu zbadania dynamicznych zmian molekularnych związanych z odpowiedzią litu w ośrodkowym układzie nerwowym (OUN), można rozważyć wykorzystanie neuronów uzyskanych z tkanek węchowych do osiągnięcia tego celu. Nabłonek węchowy zawiera neurony receptorów węchowych na różnych etapach rozwoju i komórki podporowe podobne do gleju. Daje to niepowtarzalną okazję do badania dynamicznych zmian w OUN u pacjentów z chorobami neuropsychiatrycznymi, z wykorzystaniem tkanki węchowej bezpiecznie uzyskanej z biopsji nosa. Aby przezwyciężyć wadę wynikającą ze znacznego zanieczyszczenia tkanki węchowej pobranej z biopsji komórkami nieneuronalnymi, opracowano nowatorskie podejście do uzyskiwania wzbogaconych populacji komórek neuronalnych poprzez połączenie biopsji nosa z mikrodysekcją laserową. W tym badaniu opracowano i zwalidowano system do badania dynamicznych zmian molekularnych w tkance neuronalnej związanych z leczeniem, wykorzystując małą próbkę pilotażową pacjentów z ChAD zrekrutowanych do badania molekularnych mechanizmów odpowiedzi na leczenie litem.

Wprowadzenie

Choroba afektywna dwubiegunowa (BD) jest ciężkim zaburzeniem neuropsychiatrycznym, charakteryzującym się patologicznymi zmianami nastroju, popędu i funkcji poznawczych1. W badaniach na zwierzętach wykazano, że lit stosowany w leczeniu ChAD zmienia poziomy mRNA dużej liczby genów w stanie stacjonarnym2, ale nie wiadomo, czy którakolwiek z tych cząsteczek jest związana z odpowiedzią kliniczną u ludzi2. Zrozumienie mechanizmu odpowiedzi litu wymagałoby zbadania zmian molekularnych wywołanych litem w tkankach neuronalnych. Niestety, nie jest praktyczne uzyskanie biopsji mózgu pacjentów z ChAD przed i po terapii litem w celu zidentyfikowania molekularnych sygnatur odpowiedzi litu. Pośmiertne tkanki mózgowe zostały wykorzystane do badania biomarkerów w ChAD, jednak nie można ich wykorzystać do oceny markerów molekularnych związanych z dynamicznymi zmianami w emocjach, poznaniu i popędzie; a trafność retrospektywnie stwierdzonej odpowiedzi na leczenie litem może być problematyczna4. Limfocyty i inne komórki krwi mogą być przydatne, ale zmiany molekularne w komórkach krwi mogą nie odzwierciedlać zmian neuronalnych3-5. Płyn mózgowo-rdzeniowy może być niewystarczający do uzyskania informacji na temat cząsteczek wewnątrzkomórkowych, które mogą odzwierciedlać zmiany wewnętrzne związane z chorobą i odwracalne przez leki.

Nabłonek węchowy (OE) jest unikalną częścią ośrodkowego układu nerwowego (OUN), embriologicznie związaną ze strukturami limbicznymi6; i jest łatwo dostępny dzięki biopsjom nosa. Składa się z komórek podporowych podobnych do gleju (tj. Sustentaccular), podstawowych komórek proliferacyjnych i neuronów receptorów węchowych na różnych etapach rozwoju7-9. W związku z tym OE daje unikalną możliwość przystępnego badania dynamicznych zmian w OUN u pacjentów z chorobami neuropsychiatrycznymi7. Badania wykazują przydatność OE jako tkanki zastępczej do badania zdarzeń związanych z chorobą, które odzwierciedlają te zachodzące w neuronach mózgowych8,9. Na przykład w badaniach wykorzystano OE do zbadania profili molekularnych związanych z chorobami psychicznymi10-14. Układ węchowy służy również do identyfikacji klinicznych endofenoytpe, takich jak deficyty węchu, które są związane z negatywnymi objawami schizofrenii15. Ponadto procesy neurorozwojowe zachodzą w OE przez całe życie, co stanowi użyteczną drogę do modelowania patofizjologii leżącej u podstaw stanów psychicznych8,9.

Jednakże, wadą korzystania z tej tkanki jest znaczne zanieczyszczenie biopsji węchowych komórkami nieneuronalnymi16. Na przykład całkowite RNA użyte do badań ekspresji genów w poprzednich badaniach OE zawierało RNA wyekstrahowane z całej tkanki poddanej biopsji nosa, w tym RNA z komórek nieneuronalnych17. W związku z tym dotychczasowe podejścia były ograniczone jakością komórek. Aby przezwyciężyć ten problem, opracowano nowatorskie podejście do uzyskiwania wzbogaconych populacji komórek nerwowych poprzez połączenie biopsji nosa z mikrodysekcją laserową (LCM)18.

LCM to technika, która pozwala na selektywną izolację komórek za pomocą cięcia laserem UV w połączeniu z laserem podczerwonym19-21. Połączenie LCM z podejściem OE minimalizuje znaczne zanieczyszczenie OE przez komórki nieneuronalne, zwiększając w ten sposób wzbogacenie komórek neuronalnych18. Co więcej, warstwę neuronalną można odróżnić od warstwy podśluzówkowej pod mikroskopem, eliminując w ten sposób potrzebę barwienia. Typy komórek neuronalnych można dodatkowo odróżnić od innych populacji komórek za pomocą przeciwciał pierwotnych, które są wyrażane przez typ komórki będący przedmiotem zainteresowania7. W związku z tym procedura ta ustanawia łatwiejszą metodę wzbogacania prawie czysto neuronalnej populacji komórek, która może być wykorzystana do badań ekspresji genów, immunohistochemii i innych badań morfologicznych.

To badanie ma na celu stworzenie eksperymentalnej platformy do badania zmian molekularnych w neuronach węchowych związanych ze stanami chorobowymi i odpowiedzią na leczenie. Aby rozwiązać ten problem, niewielka grupa pacjentów niepalących, którzy spełniali kryteria diagnostyczne DSM-IV dla ChAD na podstawie Wywiadu Diagnostycznego do Badań Genetycznych (DIG)22, została zrekrutowana do poddania się dwóm biopsjom nosa: jednej biopsji przed leczeniem litem i drugiej biopsji, po 6 tygodniach codziennej doustnej terapii litem. Ponadto kwalifikujący się pacjenci z ChAD muszą: mieć objawy depresji, na podstawie punktacji ≥10 na 60 w skali oceny Montgomery'ego-Asberga (MADRS) podawanej przez klinicystę23; objawowe dla hipomanii lub manii, na podstawie wyniku ≥10 z 56 w skali oceny Young-Mania (YMRS) podawanej przez klinicystę24; lub ≥10 zarówno w przypadku MADRS, jak i YMRS. Współczynnik zgodności Rater-Inter-Rater między klinicystami dla obu skal wynosi >0,96. Po biopsjach neurony zostały wzbogacone z OE przez LCM. Po zastosowaniu dodatkowych środków kontroli jakości, w celu zapewnienia ekstrakcji wysokiej jakości RNA z tkanki i wzbogacenia neuronów, przeprowadzono Real Time RT PCR w celu zbadania poziomów ekspresji genów będących przedmiotem zainteresowania przed i po leczeniu. Kolejne sekcje zawierają opis walidacji tego podejścia, podkreślając optymalizację protokołu i strategie, które zostały zastosowane do rozwiązywania problemów z protokołem.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

UWAGA: Wszyscy ochotnicy biorący udział w tym badaniu otrzymali dokumenty świadomej zgody zatwierdzone przez Institutional Review Board Uniwersytetu Howarda i Uniwersytetu Johnsa Hopkinsa. Do badania zostali włączeni tylko uczestnicy, którzy wyrazili zgodę, podpisując dokumenty świadomej zgody. Baza badawcza do tej analizy składała się z: 20 osób (12 BD i 10 kontrolnych; 30% mężczyzn) i średni wiek (s.d.) 38,2 (14,1) lat.
UWAGA: Spryskaj wszystkie powierzchnie RNase Zap, aby usunąć zanieczyszczenia RNazą z powierzchni szklanych i plastikowych.

1. Procedura biopsji

  1. Rozpyl miejscowo płyn lidokainy (ksylokainy) 4% i oksymetazolinę HCl 0,05% w jamie nosowej uczestnika badania i pozostaw na 15 minut odrętwienia.
  2. Namocz bawełniane folie chirurgiczne o wymiarach 1/2 x 3 cale w mieszaninie lidokainy i oksymetazoliny, a następnie włóż do jamy nosowej wzdłuż górnej części przegrody nosowej i pozostaw na 15 minut.
  3. Używając sztywnego endoskopu nosowego pod kątem 30°, aby zlokalizować górną część jamy nosowej, usuń błonę śluzową nosa za pomocą szczypiec do nosa z górnej części przegrody nosowej, pobierając kilka małych próbek.

2. Przygotowanie bloków tkanek

  1. Bezpośrednio przed biopsją należy napełnić krioformy o standardowych rozmiarach pożywką do zamrażania tkanek.
  2. Za pomocą autoklawowanej pęsety umieść świeżą tkankę w zamrażarce i zamroź na suchym lodzie. Napełnij pozostałą część kriobloku medium zamrażającym, zamroź krioblok na suchym lodzie i przechowuj bloki w temperaturze -80ºC.

3. Kriosekcja

  1. Przygotować szkiełka szklane z naftalanu etylenu (PEN) bezpośrednio przed kriosekcją. Spryskaj szkiełka roztworem RNase Zap przez 5 min. Następnie opłucz szkiełka w wodzie z węglanu dietylu (DEPC) i pozostaw do wyschnięcia na powietrzu przez 30 minut. Aktywuj wysuszone szkiełka w świetle UV na 30 minut.
  2. Kriosekcja każdego bloku w całości przy 30 μm. Utrzymuj szkiełka na suchym lodzie, a sekcje zamrożone tak bardzo, jak to możliwe. Po zakończeniu przechowywać szkiełka w temperaturze -80 ºC.

4. Mikrodysekcja laserowa

  1. Zacznij od odwodnienia szkiełek bezpośrednio przed mikrodypreparacją. Pozostaw zamrożone szkiełka do rozmrożenia przez 10 sekund, a następnie nałóż następujące serie etanolu na każde szkiełko: 60% (2 ml, 15 sekund), 80% (2 ml, 15 sekund), 95% (3 ml, 25 sekund), 100% (7 ml, 60 sekund).
  2. Włącz mikroskop fotoaktywowanej mikroskopii lokalizacyjnej (PALM) i ustaw go w następujących warunkach: Dla 10-krotnego powiększenia ustaw energię na 82, ostrość na 74, a prędkość na 25 - 30. Aby uzyskać 20-krotne powiększenie, ustaw energię na 63, ostrość na 67, a prędkość na 5-6. Dostosuj w razie potrzeby, aby uzyskać optymalne wyniki cięcia.
  3. Wizualnie identyfikuj neurony za pomocą 20- lub 10-krotnego powiększenia. Odróżnienie cienkiej powierzchni warstwy neuronu węchowego od leżącej pod nią błony podśluzowej pod mikroskopem bez użycia procedury barwienia. Obserwuj neurony jako gęsty wygląd kolumnowy18.
  4. Korzystając z funkcji ołówka w wyżej wymienionym mikroskopie w kroku 4.2, obrysuj warstwę neuronalną. Śledź nieco z dala od neuronów, aby zapobiec spaleniu neuronów przez laser. Jest to niezbędne do uzyskania wysokiej jakości RNA. Następnie rozpocznij cięcie sterowane laserowo.
  5. Podnieś wypreparowane skrawki za pomocą kleszczy do mikrodyfuzji z cienką końcówką i umieść tkankę w mikroprobówce zawierającej 100 μl buforu do lizy na lodzie. Powtórz tę czynność dla wszystkich odcinków neuronów uzyskanych z jednej próbki. Całkowity czas preparacji próbki nie powinien przekraczać 50 minut.
  6. Po zakończeniu sekcji natychmiast odwirować lizaty próbki i przechowywać na suchym lodzie. Przechowuj próbki w temperaturze -80ºC w celu całkowitej izolacji RNA.

5. Izolacja całkowitego RNA i analiza kontroli jakości

  1. Rozmrozić próbkę lizatów na lodzie. Przeprowadź całkowitą izolację RNA za pomocą RNAqueous Micro Kit z inaktywacją DNazy-I, postępując zgodnie z protokołem producenta bez modyfikacji (patrz rysunek 1). Całkowita objętość elucji wynosi około 20 μl.
  2. Zmierz stężenie RNA i oceń jakość RNA za pomocą numeru integralności RNA (RIN) za pomocą Bioanalyzera. Próbki, które spełniają kryteria kontroli jakości przedstawione na rysunku 2, mogą być wykorzystane do syntezy cDNA.

6. Synteza cDNA

  1. Zsyntetyzuj cDNA przy użyciu zwalidowanego zestawu komercyjnego (patrz Tabela odczynników). Etap wyżarzania należy wykonać, łącząc 0,1 - 1,0 ng RNA (w zależności od dostępności) i wody wolnej od RNaz do całkowitej objętości 8 μl na probówkę. Następnie dodać 1 μl startera oligo d(T)20 i 1 μl mieszanki 10 mM dNTP na probówkę, uzyskując całkowitą objętość 10 μl.
  2. Delikatnie wirować i odwirować próbki i próbki wyżarzane w temperaturze 65 °C przez 5 minut. Po zakończeniu reakcji należy natychmiast schłodzić próbki na lodzie.
  3. Przygotować roztwór mieszanki wzorcowej zgodnie ze specyfikacjami w tabeli 1. Następnie do każdej probówki dodać 9,5 μl mieszanki wzorcowej i 0,5 μl komercyjnie przygotowanej odwrotnej transkryptazy (RT). Dodaj 0,5 μl wody wolnej od RNaz do probówki kontrolnej zamiast RT.
  4. Przeprowadzić reakcję RT z pierwszą inkubacją w temperaturze 50 °C przez 50 minut, następnie 85 °C przez 5 minut i końcowym utrzymaniem w temperaturze 4 °C, bez cykli.
  5. Rozcieńczyć wszystkie próbki 5-krotnie wodą i podwielokrotnością. Próbki należy przechowywać w temperaturze -80 °C.

7. Real Time PCR – Potwierdź wzbogacenie neuronów

  1. Przygotować roztwór mieszanki wzorcowej zgodnie ze specyfikacjami w tabeli 2. Stosuj kontrolę wewnętrzną, taką jak GAPDH. Porównaj ekspresję białka markera węchowego (OMP) w mikrowypreparowanej tkance z ekspresją OMP w tkance niewypreparowanej, aby określić wzbogacenie neuronów.
    UWAGA: OMP jest markerem neuronów węchowych.
    Sekwencja OMP: do przodu, 5'-CTGTCGGACCTGGCCAAG-3'
    rewers, 5'-CACCCTCGCCAAAGGTGA-3'
    Sekwencja GAPDH: do przodu, 5'-CATGAGAAGTATGACAACAGCCT-3'
    rewers, 5'-AGTCCTTCCACGATACCAAAGT-3'.
  2. Ustawić płytkę PCR, dodając 7 μl mieszanki głównej do każdej studzienki i 3 μl cDNA.
  3. Płytka wirowa przez 5 minut przy 300 x g (1 300 obr./min). Uruchom reakcję Real Time-PCR przy użyciu domyślnych warunków cyklu termicznego określonych dla komercyjnych supermiksów, takich jak SYBR GreenER qPCR.
  4. Przeanalizuj dane (patrz rysunek 2, aby zapoznać się ze specyfikacjami).

8. Real Time PCR – Ekspresja genów będących przedmiotem zainteresowania

  1. Wykonuj na próbkach, które wykazują wzbogacenie neuronów 2-krotnie lub więcej.
  2. Przygotować mieszankę wzorcową na lodzie dla każdej sondy (sondy z oznaczeniem FAM i GAPDH z oznaczeniem VIC) w oddzielnych probówkach zgodnie ze specyfikacjami w Tabeli 3.
  3. Ustaw płytkę PCR z 8 μl mieszanki głównej w każdym dołku i 2 μl cDNA.
  4. Odwirować płytkę przez 5 minut przy 300 x g (1 300 obr./min). Przeprowadź reakcję Real Time-PCR przy użyciu domyślnych warunków cykli termicznych, zgodnie z protokołem głównej mieszanki ekspresji genów dostarczonym przez producenta. Analizuj wyniki wyrażeń (patrz rysunek 2, aby zapoznać się ze specyfikacjami).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Protokół oraz strategia rozwiązywania problemów w badaniu sygnatur molekularnych zostały pomyślnie zoptymalizowane. Zestandaryzowano kryteria jakości RNA oraz wzbogacenia neuronalnego dla próbek, które mają zostać wykorzystane w dalszych analizach Real Time-PCR. RIN oraz stężenie RNA zbadano jako czynniki zakłócające wykryte poziomy ekspresji. Na podstawie analizy kilku próbek o wartościach RIN w zakresie od 1 do 10 ustalono, że minimalna wartość RIN na poziomie ~3,0 i powyżej jest wystarczająca do dalszych analiz w nini...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Zaprezentowano nową platformę do uzyskiwania wzbogaconych węchowych warstw neuronalnych poprzez połączenie biopsji nosa i LCM, która została zwalidowana w tym badaniu. Technika ta może mieć daleko idące konsekwencje. Może być stosowany w badaniach nad biomarkerami, w tym nad odpowiedzią na leczenie, oraz w pracach nad odkrywaniem leków na inne schorzenia neuropsychiatryczne, wywierając szerszy wpływ w tej dziedzinie.

Aby uzyskać wysokiej jakości neurony nadające się do dalszych zastosowań, nal...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie informują o żadnych powiązaniach finansowych z interesami komercyjnymi.

Podziękowania

Ta praca była wspierana przez granty USPHS MH-091460 (E.N.), MH-084018 (A.S.), MH-094268 Silvo O. Conte center (A.S.), MH-069853 (A.S.), MH-085226 (A.S.), MH-088753 (A.S.), MH-092443 (A.S.) i MH-096208 (K.I.), granty od DANA (E.N.), Stanley (A.S.), RUSK (A.S.), S-R foundations (A.S.), NARSAD (A.S. i K.I.), oraz Fundusz Badań nad Komórkami Macierzystymi w Maryland (A.S. i K.I.).

Szczerze doceniamy wysiłki i wkład Pearl Kim, Marii Papapavlou, Nao Gamo, Youjin Chung, Yukiko Lemy i Marka Christie w koordynację procesu biopsji.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Przygotowanie tkanek
Tissue-Tek Formy CryomoldSakura Finetek4557
Tissue-Tek O.C.T. CompoundSakura Finetek4583
Kriosekcja
Membrane Slide 1.0 PEN (D)Carl Zeiss Mikroskopia415190-9041-000
Rnaza ZapAmbionAM9780
DEPC Jakość wody uzdatnionejBiologiczna351-068-131
Mikrodysekcja
Mikroskop: System mikrolaserowy serii PALMCarl Zeiss Model mikroskopowy: Axiovert 200M
Oprogramowanie: Robo v3.2
No. 5 Dumont Microdissction KleszczykiRobozRS-49085
RNA Ekstrakcja
RNAwodny zestawKit AmbionAM1931
cDNA Synthesis Set
SuperScript III Zestaw do syntezy pierwszej niciInvitrogen18080-051
OMP qPCR
SYBR GreenER qPCR SuperMixInvitrogen11760-500
Taqman qPCR
TaqMan Sondy do oznaczania ekspresjiApplied BiosystemsRóżne
TaqMan Gene Expression Master MixApplied Biosystems4369016
Micro

Bibliografia

  1. Goodwin, F. K., Jamison, K. R. Manic-depressive illness. , Oxford University Press. (1990).
  2. Einat, H., Manji, H. K. Cellular plasticity cascades: genes-to-behavior pathways in animal models of bipolar disorder. Biol Psychiatry. 59 (12), 1160-1171 (2006).
  3. Severino, G., et al. Pharmacogenomics of bipolar disorder. Pharmacogenomics. 14 (6), 655-674 (2013).
  4. Beech, R. D., et al. Gene-expression differences in peripheral blood between lithium responders and non-responders in the Lithium Treatment-Moderate dose Use Study (LiTMUS). Pharmacogenomics J. 14 (2), 182-191 (2013).
  5. Horiuchi, Y., et al. Olfactory cells via nasal biopsy reflect the developing brain in gene expression profiles: utility and limitation of the surrogate tissues in research for brain disorders. Neurosci Res. 77 (4), 247-250 (2013).
  6. Dryer, L., Graziadei, P. P. Projections of the olfactory bulb in an elasmobranch fish, Sphyrna tiburo: segregation of inputs in the telencephalon. Anat Embryol (Berl. 190 (6), 563-572 (1994).
  7. Hahn, C. G., et al. In vivo and in vitro neurogenesis in human olfactory epithelium. J Comp Neurol. 483 (2), 154-163 (2005).
  8. Cascella, N. G., Takaki, M., Lin, S., Sawa, A. Neurodevelopmental involvement in schizophrenia: the olfactory epithelium as an alternative model for research. J Neurochem. 102 (3), 587-594 (2007).
  9. Sawa, A., Cascella, N. G. Peripheral olfactory system for clinical and basic psychiatry: a promising entry point to the mystery of brain mechanism and biomarker identification in schizophrenia. Am J Psychiatry. 166 (2), 137-139 (2009).
  10. Mor, E., et al. MicroRNA-382 expression is elevated in the olfactory neuroepithelium of schizophrenia patients. Neurobiol Dis. 55, 1-10 (2013).
  11. Kano, S., et al. Genome-wide profiling of multiple histone methylations in olfactory cells: further implications for cellular susceptibility to oxidative stress in schizophrenia. Mol Psychiatry. 18 (7), 740-742 (2013).
  12. Toritsuka, M., et al. Deficits in microRNA-mediated Cxcr4/Cxcl12 signaling in neurodevelopmental deficits in a 22q11 deletion syndrome mouse model. Proc Natl Acad Sci U S A. 110 (43), 17552-17557 (2013).
  13. Evgrafov, O. V., et al. Olfactory neuroepithelium-derived neural progenitor cells as a model system for investigating the molecular mechanisms of neuropsychiatric disorders. Psychiatr Genet. 21 (5), 217-228 (2011).
  14. Fan, Y., et al. Focal adhesion dynamics are altered in schizophrenia. Biol Psychiatry. 74 (6), 418-426 (2013).
  15. Ishizuka, K., et al. Negative symptoms of schizophrenia correlate with impairment on the University of Pennsylvania smell identification test. Neurosci Res. 66, 106-110 (2010).
  16. Sattler, R., et al. Human nasal olfactory epithelium as a dynamic marker for CNS therapy development. Exp Neurol. 232 (2), 203-211 (2011).
  17. Rimbault, M., Robin, S., Vaysse, A., Galibert, F. RNA profiles of rat olfactory epithelia: individual and age related variations. BMC Genomics. 10, 572(2009).
  18. Tajinda, K., et al. Neuronal biomarkers from patients with mental illnesses: a novel method through nasal biopsy combined with laser-captured microdissection. Mol Psychiatry. 15 (3), 231-232 (2010).
  19. Bonner, R. F., et al. Laser capture microdissection: molecular analysis of tissue. Science. 278 (5342), 1481-1483 (1997).
  20. Fink, L., et al. Real-time quantitative RT-PCR after laser-assisted cell picking. Nat Med. 4 (11), 1329-1333 (1998).
  21. Emmert-Buck, M. R., et al. Laser capture microdissection. Science. 274 (5289), 998-1001 (1996).
  22. Nurnberger, J. I. Jr, et al. Diagnostic interview for genetic studies. Rationale, unique features, and training. NIMH Genetics Initiative. Arch Gen Psychiatry. 51 (11), 849-859 (1994).
  23. Montgomery, S. A., Asberg, M. A new depression scale designed to be sensitive to change. Br J Psychiatry. 134, 382-389 (1979).
  24. Young, R. C., Biggs, J. T., Ziegler, V. E., Meyer, D. A. A rating scale for mania: reliability, validity and sensitivity. Br J Psychiatry. 133, 429-435 (1978).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Analiza ekspresji genówizolacja RNAanaliza qPCRzaburzenia afektywne dwubiegunoweleczenie litemekspresja GSK3 betawzbogacenie neuronalne
Neurony węchowe uzyskane przez biopsję nosa w połączeniu z mikrodysekcją laserową: potencjalne podejście do badania odpowiedzi na leczenie w zaburzeniach psychicznych
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.