Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

In vitro Przenikanie ferrytyn obciążonych FITC przez barierę krew-mózg szczura: model do badania dostarczania nanoformułowanych cząsteczek

7.5K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/54279

⸱

22 sierpnia 2016

 ,  ,  ,  ,  , 
1Dipartimento di Scienze Biomediche e Cliniche Luigi Sacco, Università di Milano, 2Dipartimento di Biotecnologie e Bioscienze, Università di Milano-Bicocca

W tym artykule

Podsumowanie

Opisano i zweryfikowano metodę tworzenia modelu in vitro bariery krew-mózg opartej na wspólnej hodowli komórek mikronaczyniowych śródbłonka i astrocytów mózgu szczura. System ten okazał się przydatnym narzędziem do badania wpływu nanoformulacji na przenikanie przez barierę cząsteczek fluorescencyjnych.

Streszczenie

Mikronaczyniowe komórki śródbłonka mózgu, wspierane przez perycyty i astrocyty, są odpowiedzialne za niską przenikalność dużych leków rozpuszczalnych w wodzie przez barierę krew-mózg (BBB), powodując trudności w skutecznych terapiach farmakologicznych. W ostatnich latach różne strategie promowania celowania w mózg miały na celu poprawę dostarczania i aktywności leków w tym miejscu, w tym innowacyjne nanosystemy do dostarczania leków przez barierę krew-mózg. W tym kontekście podejście in vitro oparte na uproszczonym modelu komórkowym bariery krew-mózg stanowi użyteczne narzędzie do badania wpływu nanopreparatów na przenikanie cząsteczek przez barierę krew-krwi. W badaniu tym opisano rozwój dwuwarstwowej bariery krew-mózg, składającej się ze współhodowanych, komercyjnie dostępnych pierwotnych komórek śródbłonka mikronaczyniowego mózgu szczura i astrocytów. Opisano również wieloparametryczne podejście do walidacji modelu, oparte na pomiarze przezśródbłonkowego oporu elektrycznego i pozornej przepuszczalności dekstranu o dużej masie cząsteczkowej. Jako dowód słuszności koncepcji zastosowania tego modelu BBB do badania wpływu różnych nanopreparatów na translokację cząsteczek fluorescencyjnych przez barierę, opisujemy zastosowanie izotiocyjanianu fluoresceiny (FITC), załadowanego do nanocząstek ferrytyny. Zdolność ferrytyn do poprawy przenikania trans-BBB przez FITC wykazano za pomocą pomiarów strumienia i analiz mikroskopii konfokalnej. Wyniki sugerują, że jest to użyteczny system do walidacji nanosystemów pod kątem dostarczania leków przez barierę krew-mózg.

Wprowadzenie

Odporność chorób ośrodkowego układu nerwowego (OUN) (np. raka, epilepsji, depresji, schizofrenii i zaburzeń neurologicznych związanych z HIV) na terapie farmakologiczne wynika z różnych mechanizmów, w tym z uciążliwego przenikania leków przez barierę krew-mózg (BBB). Bariera krew-mózg to granica, która izoluje tkanki mózgowe od substancji krążących we krwi. W obrębie tej bariery znajduje się warstwa komórek śródbłonka mikronaczyniowego mózgu (BMEC), wspierana przez perycyty i astrocyty na końcach, jest odpowiedzialna za wysoką selektywność bariery krew-mózg w stosunku do leków rozpuszczalnych w wodzie o masie cząsteczkowej większej niż 400 Da1. Inny mechanizm oporności związany z lekami jest związany z obecnością na BMEC transporterów wypływu leków (glikoproteiny P i białek oporności wielolekowej), które współpracują w celu zmniejszenia penetracji leku do OUN i ułatwienia jego wytłaczania z mózgu2.

W ciągu ostatniej dekady opracowano wiele podejść nanotechnologicznych, aby sprostać klinicznemu i biologicznemu wyzwaniu dostarczania leków przez BBB3-6. W tym kontekście nanosfery ferrytynowe (FnN) stanowią całkowicie innowacyjne i obiecujące rozwiązanie. FnN to kule o długości 12 nm zawierające 24 samoorganizujące się monomery ferrytyny (Fn), które są ułożone w pustą sferyczną strukturę o średnicy wewnętrznej 8 nm. Podjednostki ferrytyny można rozmontować przy kwaśnym pH i ponownie złożyć w sposób z pamięcią kształtu, doprowadzając pH do neutralności, co pozwala na zamknięcie różnych cząsteczek organicznych. W związku z tym FnN stanowi interesujący model dla rozwoju wielofunkcyjnych systemów dostarczania leków7,8. Co więcej, FnN może wchodzić w interakcje z BMEC dzięki specyficznemu rozpoznawaniu receptora transferyny (TfR) 1, który ulega ekspresji na błonie świetlnej tych komórek9.

Do tej pory opracowano różne modele BBB in vitro w celu wyjaśnienia przepuszczalności trans-BBB dla różnych leków, toksyczności w stosunku do BBB, czy interakcji cząsteczek z transporterami wypływu. Rzeczywiście, modele te są uważane za ważne podejścia in vitro do szybkiego badania przesiewowego aktywnych cząsteczek przed przystąpieniem do badań in vivo. Modele te składają się z pojedynczej warstwy śródbłonka BMEC lub współhodowanych BMEC i astrocytów (rzadziej perycytów), uzyskanych z linii komórkowych zwierzęcych (szczurów, myszy, świń i bydła) lub ludzkich10,11,12. Rezystancja elektryczna transśródbłonka (TEER) i pozorna przepuszczalność (Papp) znaczników o określonej masie cząsteczkowej stanowią dwa krytyczne parametry, które są wykorzystywane do określenia jakości modelu in vitro. W tym miejscu opisujemy zastosowanie modelu BBB in vitro, opartego na wspólnej hodowli szczurzych BMEC (RBMEC) i szczurzych astrocytów korowych (RCA) w celu zbadania przenikania trans-BBB do nanokage ferrytyny kapsułkujących izotiocyjanian fluoresceiny (FITC).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

1. Ustanawianie modelu BBB

Uwaga: W celu ustalenia modelu BBB sugerujemy użycie dostępnych na rynku pierwotnych RBMEC i RCA. Wszystkie czynności muszą być wykonywane przy użyciu sterylnych odczynników i materiałów jednorazowego użytku, obsługiwanych w okapie z przepływem laminarnym.

  1. Hodowla komórkowa
    1. Kolby do hodowli komórkowych pokryć poli-L-lizyną 100 μg/ml (1 godz. w temperaturze pokojowej) lub fibronektyną 50 μg/ml (1 godz. w temperaturze 37 °C) w celu ułatwienia przyłączenia odpowiednio RCA lub RBMEC. Następnie rozmrozić 1 x 106 RCA i 5 x 105 RBMEC w podłożu komórek śródbłonka, uzupełnionych 5% płodową surowicą bydlęcą, 1% suplementem wzrostu komórek śródbłonka i 1% penicyliną/streptomycyną (sECM). Wysiewanie RCA w kolbie T175 w 20 ml sECM i RBMEC w kolbie T75 w 10 ml sECM.
      Uwaga: Pasaże rozmrażania i wysiewu RCA i RBMEC muszą być dostosowane pod względem gęstości komórek i czasu w hodowli, zgodnie z liczbą warunków doświadczalnych, które mają być badane za pomocą modelu BBB. Zaczynając od 1 fiolki po 1 x 106 RCA i 1 fiolki po 5 x 105 RBMEC, możliwe jest uzyskanie do 20 wkładek łożyskowych BBB.
    2. Utrzymuj komórki w temperaturze 37 °C i 5% CO2 w wilgotnej atmosferze przez około 6 dni, aż do około 80% konfluencji dla RCA i ponad 90% konfluencji dla RBMEC. Odłącz komórki za pomocą roztworu trypsyna-EDTA (trypsyna 1:250) na 5 minut (1 ml trypsyny dla kolb T75 i 2 ml dla kolb T175). Zatrzymać aktywność trypsyny za pomocą sECM (2:1), odwirować zawiesiny komórek w stężeniu 750 × g przez 5 minut i ponownie zawiesić granulki w 60 ml sECM.
    3. Podzielić RBMEC na 3 kolby T175 i hodować w sECM przez kolejne 3 dni przed wysiewem na płytki. Policz całkowitą liczbę żywych RCA, obserwując zawiesinę komórek rozcieńczoną w stosunku 1:1 błękitem trypanowym pod mikroskopem optycznym w komorze Burkera.
  2. Wysiew komórek na wkładki
    1. Potraktuj jedną stronę membrany politereftalanu etylenu (PET) 6 przezroczystych wkładek wielodołkowych poli-L-lizyną 100 μg/ml, a drugą stronę fibronektyną 50 μg/ml, aby umożliwić przyłączenie RCA i BMEC. Z wkładkami należy obchodzić się pęsetą, aby uniknąć kontaktu z membraną PET.
      1. Umieścić wkładki w płytce 6-dołkowej i dodać roztwór fibronektyny (minimum 500 μl) do górnej komory. Po 1 godzinie inkubacji w temperaturze 37 °C należy usunąć roztwór fibronektyny, zdjąć płytki wielodołkowe i położyć je do góry nogami na dnie płytki Petriegoo długości 150 cm 2, która jest tutaj używana jako sterylne podłoże dla już pokrytych wkładek.
      2. Delikatnie dodaj 800 μl poli-L-lizyny na spodzie wkładki (jak pokazano na rysunku 1A; określane jako wysiewanie RCA) i trzymaj roztwór na wkładkach przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej.
      3. Odessać roztwór i pozostawić wkładki do wyschnięcia w temperaturze pokojowej przez 15-30 minut. Wkładki są teraz gotowe do wysiewu komórek, ale mogą być również przechowywane w płytce wielodołkowej przez kilka dni w temperaturze 4 °C, przed przystąpieniem do budowy BBB.
        Uwaga: Pamiętaj, aby co najmniej 3 powlekane wkładki były wolne od komórek, które mogą być używane jako kontrole w celu walidacji ustalenia BBB na podstawie pomiarów strumienia FD40.
    2. Wysiewaj RCA (35 000/cm2) na spodniej stronie wkładek pokrytych poli-L-lizyną, upuszczając 800 μl zawiesiny komórek na odwróconą wkładkę (rysunek 1A). Pozostaw zawiesinę RCA na wkładkach na 4 godziny w temperaturze pokojowej, aby umożliwić sprawne przymocowanie komórek do membrany.
    3. Odessać pozostały roztwór, umieścić wkładki w studzienkach zawierających 2 ml sECM i utrzymywać płytkę wielodołkową w temperaturze 37 °C i 5% CO2 w wilgotnej atmosferze, zmieniając sECM co 2 dni.
    4. Po 3 dniach, gdy RCA pokryją dolną powierzchnię wkładki, wysiewaj RBMEC na górną stronę wkładki, wykonując następujące czynności:
      1. Odłączyć RBMEC od kolb T175 i policzyć całkowitą liczbę żywych komórek, jak podano w krokach 1.1.2 i 1.1.3.
      2. Wysiewaj RBMEC (60 000 / cm2) na górnej powierzchni wkładki w sECM (1 000 μl) (Rysunek 1B), pozostawiając 3 inserty tylko z astrocytami, które mają być użyte jako tło TEER. Umieścić płytkę wielodołkową w standardowych warunkach hodowli. Utrzymuj system do hodowli przez co najmniej 3 dni, zmieniając sECM w komorze wewnętrznej i dolnej co 2 dni.

2. Walidacja BBB

  1. Pomiar TEER
    1. W 3 dniu kohodowli należy sprawdzić TEER, wkładając wkładki z łożyskiem BBB do odpowiedniej komory (która ma nasadkę i gdzie zarówno komora, jak i nasadka zawierają parę elektrod wykrywających napięcie i prąd), wypełnionej 4 ml sECM. Podłączyć do woltomierza / omomierza tkanki nabłonkowej.
    2. Wraz z pomiarami TEER systemów BBB ogniw, zapisz wartości TEER 3 wkładek zawierających RCA, które zostaną odjęte od wartości uzyskanych za pomocą BBB. Pomnóż otrzymane wartości TEER przez powierzchnię wkładki (4,2 cm2), aby wyrazić wyniki jako Ω x cm2.
    3. Od 3 dnia kohodowli należy codziennie mierzyć wskaźnik TEER. Uwaga: Po początkowym okresie, w którym TEER wzrasta, zarejestrowane wartości powinny pozostać stabilne przez co najmniej dwa kolejne dni (zwykle między 5. a 7. dniem kohodowli). W tym momencie BBB jest gotowy do drugiego etapu walidacji (sekcja 2.2) i/lub do eksperymentów trans-BBB.
      Uwaga: Procedura opisana w ppkt 2.1 może być przeprowadzona na tych samych systemach BBB, które są przeznaczone do następujących doświadczeń przepuszczalności (sekcja 3). Pracuj w sterylnych warunkach.
  2. Strumień trans-BBB FITC-dekstranu 40 (FD40)
    1. Zmierzyć strumień FD40 od górnej do dolnej komory modeli BBB w porównaniu z przepływem przez 3 puste wkładki (patrz uwaga do sekcji 1.2.1) zgodnie z następującymi krokami:
      1. Dodać 1 mg/ml FD40 (rozcieńczonego w sECM) do górnej komory BBB, a po 1, 2 i 3 godzinach pobrać 200 μl sECM z dolnej komory i zmierzyć intensywność fluorescencji za pomocą spektrofluorymetru (λex 488 nm, λem 515 nm, szczelina 5).
      2. Wartości fluorescencji tła sECM należy uzyskać, mierząc 500 μl podłoża pierwotnego przy użyciu tych samych parametrów analitycznych. Odejmij fluorescencję tła sECM od wszystkich wartości fluorescencji FD40.
      3. Oznaczyć ilość przesiąkniętego FD40 przez porównanie obserwowanych wartości fluorescencji z krzywą kalibracyjną wytworzoną przy znanych stężeniach (tj. 0,312, 0,625, 1,25, 2,5 μg/ml) znacznika fluorescencyjnego rozpuszczonego w 500 μl sECM.
      4. Obliczyć współczynnik przepuszczalności pozornej (Papp) na podstawie średnich wartości strumienia zgodnie z:
        Papp = J/AC
        gdzie J jest strumieniem cząsteczki (mol/s), A jest obszarem przenikania (cm2), a C jest stężeniem cząsteczki w górnym przedziale (mole/cm3).
        Uwaga: Trzy lub więcej systemów BBB, które osiągnęły odpowiednie wartości TEER, muszą być poświęcone wyłącznie tej procedurze walidacji i nie powinny być stosowane do następujących eksperymentów przepuszczalności (sekcja 3). Sterylność nie jest obowiązkowa.

3. Trans-BBB przenikania ferrytyn obciążonych FITC (FnN)

Uwaga: Rekombinowany wariant ludzkiej ferrytyny (Fn), wytwarzany przez Escherichia coli i łączony w nanoklacze (FnN) w celu enkapsulacji różnych cząsteczek fluorescencyjnych, jest dostępny w NanoBioLab prof. Prosperiego (Uniwersytet Milan-Bicocca, Włochy). FnN są ładowane FITC, zgodnie z wcześniej opisanym protokołem13, a stężenia zarówno Fn, jak i załadowanych cząsteczek są dokładnie określane.

  1. Strumień Trans-BBB FITC i FITC-FnN
    1. Zmierzyć strumień FITC-FnN od górnej do dolnej komory zwalidowanych modeli BBB (zwykle w 5-7 dniu kohodowli), w porównaniu z strumieniem wolnego barwnika po 7 i 24 godzinach inkubacji, zgodnie z następującymi krokami:
      1. Dodać FITC-FnN (50 μg/ml FnN, 1,1 μM FITC) lub taką samą ilość wolnego FITC do górnej komory co najmniej 6 systemów BBB dla każdej postaci użytkowej, w celu pobrania 2 ml roztworu sECM z dolnej komory co najmniej 3 wkładek po 7 godzinach, a z dolnej komory pozostałych 3 wkładek po 24 godzinach.
      2. Zmierzyć intensywność fluorescencji 500 μl pobranych próbek za pomocą spektrofluorymetru (λex 488 nm, λem 515 nm, szczelina 5).
      3. Uzyskać fluorescencję tła sECM, mierząc 500 μl pożywki przy użyciu tych samych parametrów analitycznych. Odejmij fluorescencję tła sECM od wszystkich wartości fluorescencji FITC lub FITC-FnN.
      4. Oznaczyć stężenie przesiąkniętego FITC lub FITC-FnN, porównując uzyskane wartości fluorescencji z dwiema różnymi krzywymi kalibracyjnymi otrzymanymi przy znanych stężeniach (tj. 6,87, 13,75, 27,5, 55 nM) wolnego lub nanoformulacji barwnika rozpuszczonego w 500 μl sECM.
  2. Lokalizacja FITC-FnN w RBMEC
    1. Usunąć sECM z górnej komory systemów BBB, przemyć wkładki PBS i zamocować RBMEC na co najmniej dwóch wkładkach dla każdej grupy doświadczalnej, dodając 500 μl paraformaldehydu (4% w buforze fosforanowym soli fizjologicznej-PBS) do górnej komory przez 10 minut w temperaturze pokojowej.
    2. Umyj wkładki trzykrotnie PBS, aby usunąć pozostałości paraformaldehydu.
      Uwaga: Od tego momentu bezpłodność nie jest konieczna.
    3. Wytnij odpowiednie kawałki membrany PET i przystąp do immunodekoracji komórek zgodnie z następującymi krokami:
      1. Przepuszczalność RBMEC za pomocą 0,1% Triton X-100 w PBS przez 10 minut. Wykonać etap blokujący przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej z roztworem zawierającym 2% albuminy surowicy bydlęcej (BSA), 2% surowicy koziej w PBS. Próbki inkubować z czynnikiem anty-Von Willebranda (VWF) w rozcieńczeniu 1:20 przez 2 godziny w temperaturze pokojowej.
      2. Po trzykrotnym przemyciu PBS należy wystawić komórki na działanie 2% BSA, 2% roztworu surowicy koziej zawierającego odpowiednie przeciwciało drugorzędowe w rozcieńczeniu 1:300 w celu ujawnienia anty-VWR i DAPI w rozcieńczeniu 1:1,500 w celu wykrycia jąder.
    4. Zamontuj wkładki na szkiełkach mikroskopowych za pomocą roztworu do mocowania zapobiegającego blaknięciu (jedna kropla na fragment wkładki), a następnie zamknij próbkę szkiełkiem nakrywkowym. Analizuj za pomocą mikroskopii konfokalnej przy użyciu olejowej soczewki immersyjnej przy 40-krotnym powiększeniu, powiększeniu 1,5 i rozdzielczości 1,024 x 1,024 pikseli.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Podczas tworzenia modelu BME można monitorować przyleganie i wzrost komórek na wkładkach za pomocą mikroskopu świetlnego, dzięki przezroczystości membran PET. Komórki RCA, wysiane z gęstością 35 000 komórek/cm2, efektywnie przylegają do dolnej strony wkładki po 4 h inkubacji w temperaturze pokojowej (Rycina 2A) i w ciągu 3 dni narastają, pokrywając powierzchnię membrany i przyjmując morfologię wrzecionowatą (Rycina 2B). Komórki RBMEC, wysiane z...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Opisana tutaj metoda in vitro stanowi użyteczne, zwalidowane podejście do badania dostarczania cząsteczek fluorescencyjnych trans-BBB po nanopreparatyce z nanocząstkami. Tutaj używamy FnN, który jest dobrym kandydatem do badania translokacji cząsteczek ładunku przez barierę krew-mózg. FnN jest uważany za złoty nanowektor do dostarczania leków / środków trans-BBB, ponieważ jest specyficznie rozpoznawany przez receptor TfR1, który ulega ekspresji na błonie świetlnej BMEC i pośredniczy w wychwytywaniu nanocząstek z...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy oświadczają, że nie mają konkurencyjnych interesów finansowych.

Podziękowania

Autorzy dziękują Assessorato alla Sanità, Regione Lombardia i Sacco Hospital (NanoMeDia Project) za finansowanie badań.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Komórki śródbłonka mikronaczyniowego mózgu szczura InnoprotP10308wyizolowany z tkanki mózgowej szczura Sprague Dawley, kriokonserwowany przy pierwszym pasażu i dostarczony zamrożone
astrocyty korowe InnoprotP10202wyizolowany z 2-dniowej tkanki mózgowej szczura, kriokonserwowany podczas pierwszego pasażu i dostarczony w stanie zamrożonym.
Zestaw Endothelial Cell MediumInnoprotP60104ECM (500 ml) i płodowa surowica bovin (25 ml), suplement na wzrost komórek śródbłonka (5 ml) i penicylina/streptomycyna (5 ml). Ciepło w 37 stopniach; C kąpiel wodna przed użyciem i chronić przed światłem
Trypsyna-EDTA bez Phenol RedEuroCloneECM0920DWarm w 37 stopniach; C kąpiel wodna przed użyciem
Izotiocyjanian fluoresceiny-dekstran 40 000SigmaFD40Schronić przed światłem
paraformaldehydu Sigma158127rozcieńczenia w kapturze chemicznym
Bufor fosforanowy Dulbecco sól fizjologiczna bez Ca i MgEuroCloneECB4004L
Triton  X-100SigmaT8787
albumina surowicy bydlęcej SigmaA7906
kozie surowica EuroCloneECS0200D
mysie monoklonalne przeciwciało anty-Von Willebranda DakoM0616
AlexaFluor 546-sprzężone przeciwko mysim IgGThermoFischer ScientificA-11003chroni przed światłem
DAPI (4',6-diamidyn-2-fenyloindol) ThermoFischer ScientificD1306chroni przed światłem
ProLong Gold Antifade MountantThermoFischer ScientificP36934
Bromowodorek poli-L-lizynySigmaP1274ten sam roztwór można stosować kilkakrotnie
fibronektyna z osocza bydlęcego SigmaF1141to samo rozwiązanie może być używane kilkakrotnie
Wkłady z politereftalanu etylenu (PET)FalconF3090Przezroczyste membrany z politereftalanu etylenu (PET); powierzchnia: 4,2 cm2; wielkość porów 0,4 i mikro; m/powierzchnia
Kolba T75 Primo TCEuroCloneET7076
T175 Kolba Primo TCEuroCloneET7181
EVOM2 Napięcie tkanki nabłonkowej/omomierz     World Precision Instruments NiemcyEVOM2
Endohm-24SNAPWorld Precision Instruments NiemcyENDOHM-24SNAP
Mikroskop świetlny/fluorescencyjny z kamerąModuł kamery Leica MicrosystemsDM IL LED FLUO/ ICC50 W  Mikroskop odwrócony do żywych komórek z kamerą 
Mikroskop konfokalnyLeica MicrosystemsTCS SPE
SpektrofluorymetrJascoFP-8000
Puchar

Bibliografia

  1. Banks, W. A. Characteristics of compounds that cross the blood-brain barrier. BMC Neurol. 9 (1), 3(2009).
  2. Löscher, W., Potschka, H. Drug resistance in brain disease and the role of efflux transporters. Nat Rev Neurosci. 6, 591-602 (2005).
  3. Xu, G., Mahajan, S., Roy, I., Yong, K. -T. Theranostic quantum dots for crossing blood-brain barrier in vitro and providing therapy of HIV-associated encephalopathy. Front Pharmacol. 15 (4), 140(2013).
  4. Masserini, M. Nanoparticles for Brain Drug Delivery. ISRN Biochem. , (2013).
  5. Sagar, V., Pilakka-Kanthikeel, S., Pottathil, R., Saxena, S. K., Nair, M. Towards nanomedicines for neuroAIDS. Rev. Med. Virol. 24 (2), 103-124 (2014).
  6. Kreuter, J. Drug delivery to the central nervous system by polymeric nanoparticles: What do we know. Adv. Drug Deliver. Rev. 71, 2-14 (2014).
  7. Arosio, P., Ingrassia, R., Cavadini, P. Ferritins: a family of molecules for iron storage, antioxidation and more. Biochim. Biophys. Acta. 1790 (7), 589-599 (2009).
  8. Jääskeläinen, A., Soukka, T., Lamminmäki, U., Korpimäki, T., Virta, M. Development of a denaturation/renaturation-based production process for ferritin nanoparticles. Biotechnol. Bioeng. 102 (4), 1012-1024 (2009).
  9. Jefferies, W. A., Brandon, M. R., Hunt, S. V., Williams, A. F., Gatter, K. C., Mason, D. Y. Transferrin receptor on endothelium of brain capillaries. Nature. 312, 162-163 (1984).
  10. Deli, M. A., Abraham, C. S., Kataoka, Y., Niwa, M. Permeability studies on in vitro blood-brain barrier models: physiology, pathology, and pharmacology. Cell. Mol. Neurobiol. 25 (1), 59-127 (2005).
  11. Wilhelm, I., Fazakas, C., Krizbai, I. A. In vitro models of the blood-brain barrier. Acta Neurobiol. Exp. (Wars). 71, 113-128 (2011).
  12. Wilhelm, I., Krizbai, I. A. In vitro models of the blood-brain barrier for the study of drug delivery to the brain. Mol Pharm. 11 (7), 1949-1963 (2014).
  13. Bellini, M., et al. Protein nanocages for self-triggered nuclear delivery of DNA-targeted chemotherapeutics in Cancer Cells. J. Control. Release. 196, 184-196 (2014).
  14. Fiandra, L., et al. Nanoformulation of antiretroviral drugs enhances their penetration across the blood brain barrier in mice. Nanomedicine. 11 (6), 1387-1397 (2015).
  15. Molino, Y., Jabès, F., Lacassagne, E., Gaudin, N., Khrestchatisky, M. Setting-up an in vitro model of rat blood-brain barrier (BBB): a focus on BBB impermeability and receptor-mediated transport. J. Vis. Exp. , e51278(2014).
  16. Perrière, N., et al. A functional in vitro model of rat blood-brain barrier for molecular analysis of efflux transporters. Brain Res. 1150, 1-13 (2007).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Przeglądaj więcej artykułów

Nanocząstki ferrytynoweprzenikanie FITCtransendotelialna oporność elektrycznamikroskopia konfokalnakokultura komórekdostarczanie nanoformulacjikokultura astrocytów i komórek śródbłonkaanaliza spektrofluorometrycznapowlekanie poli-L-lizyną
In vitro Przenikanie ferrytyn obciążonych FITC przez barierę krew-mózg szczura: model do badania dostarczania nanoformułowanych cząsteczek
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.