Opisujemy mysi model udaru wywołanego przez zamknięcie środkowej tętnicy mózgowej za pomocą szwu pokrytego silikonem. Protokół może być stosowany w celu wywołania trwałej okluzji lub tymczasowego niedokrwienia, a następnie reperfuzji.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Indukcja udaru niedokrwiennego i reperfuzji niedokrwiennej u myszy przy użyciu techniki niedrożności tętnicy środkowej i wizualizacji obszaru zawału
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Choroba naczyniowo-mózgowa jest bardzo rozpowszechniona w populacji globalnej i obejmuje kilka rodzajów schorzeń, w tym udar mózgu. Aby zbadać wpływ udaru mózgu na uszkodzenia tkanek i ocenić skuteczność interwencji terapeutycznych, opracowano kilka modeli eksperymentalnych u różnych gatunków. Należą do nich całkowite globalne niedokrwienie mózgu, niepełne globalne niedokrwienie, ogniskowe niedokrwienie mózgu i wieloogniskowe niedokrwienie mózgu. Model opisany w tym protokole opiera się na niedrożności tętnicy środkowej mózgu (MCAO) i jest związany z kategorią ogniskowego niedokrwienia. Technika ta powoduje stałe ogniskowe niedokrwienie w ściśle określonym obszarze półkuli i jest mniej inwazyjna niż inne metody. Opisana procedura jest wykonywana na myszach, biorąc pod uwagę dostępność kilku wariantów genetycznych i dużą liczbę testów standaryzowanych dla myszy, aby pomóc w ocenie behawioralnej i neurodeficytów.
Wprowadzenie
Badanie chorób sercowo-naczyniowych, takich jak udar mózgu, opiera się na wykorzystaniu modeli in vivo. Aby zrozumieć możliwe implikacje niedokrwienia, toksyczności leków i/lub leczenia, istnieje potrzeba użycia odpowiedniego, ustandaryzowanego, wiarygodnego i powtarzalnego modelu choroby, który umożliwia badania porównawcze między grupami leczenia. W tym manuskrypcie używamy myszy, biorąc pod uwagę dostępność dużej liczby myszy transgenicznych i standaryzowane modele oceny. Opracowano wyniki grabieży do oceny deficytów motorycznych i behawioralnych po eksperymentalnym udarze niedokrwiennym mózgu i następującej po nim rekonwalescencji1....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Wszystkie procedury zostały zatwierdzone przez University of Miami Institutional Animal Care and Use Committee (IACUC) zgodnie z wytycznymi National Institutes of Health (NIH). Wymagane jest stosowanie sterylnego sprzętu i technik aseptycznych.
1. Przygotowanie szwu okluzyjnego
- Użyj szwu o średnicy 0,21 mm dla myszy o masie ciała od 20 do 25 g i 0,23 mm dla myszy o masie ciała 25 - 35 g. Wybór rodzaju szwów do zabiegu MCAO zależy od masy ciała zwierzęcia.
- Za pomocą srebrnego pisaka zaznacz szew na 9 mm, zaczynając od końcówki pokrytej silikonem. Będzie to służyć jako wskazówka dotycząca długości wsunięcia.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Droga wprowadzenia szwu do okluzji została przedstawiona na Rysunku 1. Szew MCAO powinien zostać poprowadzony do obszaru okluzji, rozwidlając się w ICA. Pomyślna okluzja MCA doprowadzi do uszkodzenia tkanek, widocznego w barwieniu TTC. Rysunek 2 przedstawia obrazy barwienia zwierzęcia z grupy sham (Rysunek 2A) oraz zwierzęcia po 60-minutowej ischemii i reperfuzji MCAO (barwienie w 90. minucie lub 24 h po okluzji, Rysunek 2B
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Pomyślne zastosowanie opisanej metody MCAO jest w dużym stopniu zależne od zrozumienia anatomii przepływu krwi w mózgu. Ponieważ prawidłowe umieszczenie szwu jest trudne do zauważenia ze względu na brak bezpośrednich wskazówek wizualnych, ważne jest, aby opanować procedurę przed użyciem jej do badań śledczych. Objętość wyrzutowa powinna być analizowana, aby zapewnić spójne wyniki. Dodanie laserowego systemu Dopplera może pomóc w określeniu pomyślnej okluzji przepływu krwi i powinno być stosowane okresowo, aby upewnić się.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają konkurencji ani konfliktu interesów.
Podziękowania
Chcielibyśmy podziękować dr Lei Chen (Icahn School of Medicine at Mount Sinai, NY), który jako pierwszy stworzył ten model w naszym laboratorium. Wspierane częściowo przez HL126559, DA039576, MH098891, MH63022, MH072567, DA027569 i NSC 2015/17/B/NZ7/02985. Dr Luc Bertrand jest częściowo wspierany przez stypendium podoktorskie American Heart Association (16POST31170002).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Szew MCAO 0,23 mm | Doccol | 702345PK5Re | |
| Szew MCAO 0,21 mm | Doccol | 702145PK5Re | |
| Srebrne | zszywki do długopisów | 503205 | |
| Maszyna anestezjologiczna | Vetequip | 901806 | |
| Nożyczki chirurgiczne | Narzędzie do nauki o tematyce precyzyjnej | 14558-09 | |
| Kleszcze chirurgiczne z prostą końcówką | Fine narzędzie naukowe | 00108-11 | |
| Kleszcze chirurgiczne z końcówką kątową | Narzędzie do nauki | precyzyjnej 00109-11 | |
| Nożyczki sprężynowe | Narzędzie do nauki precyzyjnej | 15000-08 | |
| Szew nylonowy | Braintree scintific | SUT-S 104 | |
| Szew zamykający | VWR | 95057-036 | |
| Izofluran | Piramal | ||
| 2,3,5- Chlorek trifenylotetrazolu | FisherSci | 50-121-8005 | |
| Blok mózgowy | Braintree scintific | BS-A 5000C | |
| Ostrze kriostatu | VWR | 89202-606 | |
| Opcjonalnie: | |||
| Periflux Laserowy system dopplerowski | Perimed Periflux | 5000 | |
| Jednostka monitorująca | Perimed | PF 5010 - LDPM |
Bibliografia
- Cuomo, O., et al. Antithrombin reduces ischemic volume, ameliorates neurologic deficits, and prolongs animal survival in both transient and permanent focal ischemia. Stroke. 38 (12), 3272-3279 (2007).
- Wauquier, A., Melis, W., Janssen, P. A.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
