Przedstawiamy protokół wykorzystania karalucha syczącego z Madagaskaru jako alternatywnego modelu zwierzęcego niebędącego ssakiem do prowadzenia badań nad zjadliwością bakteryjną, patogenezą, toksycznością leków, skutecznością leków i wrodzoną odpowiedzią immunologiczną.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Syczący karaluch z Madagaskaru jako alternatywny model zwierzęcy nienależący do ssaków do badania zjadliwości, patogenezy i skuteczności leków
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Wiele aspektów odporności wrodzonej jest zachowanych między ssakami a owadami. Owad, syczący karaluch madagaskarski z rodzaju Gromphadorhina, może być wykorzystany jako alternatywny model zwierzęcy do badania zjadliwości, interakcji gospodarz-patogen, wrodzonej odpowiedzi immunologicznej i skuteczności leków. Podano szczegółowe informacje na temat hodowli, pielęgnacji i hodowli syczącego karalucha. Pokazujemy również, w jaki sposób może zostać zainfekowany bakteriami, takimi jak wewnątrzkomórkowe patogeny Burkholderia mallei, B. pseudomallei i B. thailandensis. Wykorzystanie syczącego karalucha jest niedrogie i pozwala przezwyciężyć problemy regulacyjne związane z wykorzystaniem ssaków w badaniach. Ponadto wyniki uzyskane przy użyciu modelu syczącego karalucha są powtarzalne i podobne do tych uzyskanych przy użyciu modeli ssaków. Tak więc syczący karaluch z Madagaskaru stanowi atrakcyjnego zastępczego gospodarza, którego należy zbadać podczas prowadzenia badań na zwierzętach.
Wprowadzenie
Wykorzystanie owadów jako alternatywnych modeli zwierzęcych niebędących ssakami do badania patogenezy bakteryjnej i wrodzonej obrony gospodarza nabiera rozpędu w ostatnich latach. Logistycznie wynika to z ich stosunkowo niedrogiego kosztu oraz łatwości pozyskiwania, obsługi i opieki nad owadami w porównaniu ze ssakami. Nie istnieje również polityka regulacyjna regulująca wykorzystanie owadów w badaniach; Nie podlega zakresom ani ograniczeniom określonym przez jakikolwiek komitet ds. użytkowania zwierząt lub agencję rządową. Owady jako zastępcze modele zwierzęce są szczególnie podatne na kompleksowe badania przesiewowe pod kątem czynników wirulencji, interakcji gospoda....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
1. Przygotowania do utrzymania kolonii syczących karaluchów
- Przygotuj klatki, w których będą mogły żyć syczące karaluchy. Nałóż cienką warstwę wazeliny o szerokości około 20 do 30 mm na obwód wewnętrznych ścianek w pobliżu górnej części klatki, aby zapobiec wydostaniu się syczących karaluchów z klatki i ucieczce.
UWAGA: Syczące karaluchy mogą być trzymane w różnych pojemnikach, które mają dużą powierzchnię podłogi, mają wystarczającą wysokość i mają pokrywki. Użyj klatek na myszy (~43 cm x 23 cm x 20 cm). W przypadku koszyków przeznaczonych do pracy w temperaturze 37 °C nie należy stosować wazeliny. - Dołącz kartonowy karton na jajka umieszc....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
W tej sekcji przedstawiono wyniki uzyskane po zainfekowaniu karaczanów madagaskarskich (karaczanów syczących) za pomocą B. mallei, B. pseudomallei, lub B. thailandensis; wyniki pokazują, że owad ten jest podatnym modelem zwierzęcym dla różnych gatunków Burkholderia w badaniach nad wirulencją, toksycznością leków oraz skutecznością leków przeciwko zakażeniom bakteryjnym. Więcej karaczanów syczących przeżyło w grupach zakażonych mutantami atenuowanymi (Δhcp1
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Optymalne warunki eksperymentalne zaczynają się od zdrowej syczącej kolonii karaluchów, która wymaga minimalnego, ale konsekwentnego zaangażowania czasowego. Chociaż syczące karaluchy mogą wytrzymać stosunkowo długi okres czasu (~tygodnie) bez jedzenia i wody, należy zapewnić cotygodniową lub dwutygodniową konserwację klatki. Obejmuje to sprawdzenie dopływu pokarmu i wody oraz upewnienie się, że klatka jest sucha. Utrzymanie suchych warunków życia jest szczególnie ważne podczas aklimatyzacji i inkubacji w wyższych temper.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
J. Chua, N.A. Fisher, D. DeShazer i A.M. Friedlander zaprojektowali procedury opisane w manuskrypcie. J. Chua, N.A. Fisher, S.D. Falcinelli i D. DeShazer przeprowadzili eksperymenty. J. Chua napisał rękopis.
Autorzy dziękują Joshua J. W. Roan, Nora D. Doyle, Nicholas R. Carter i Steven A. Tobery za doskonałą pomoc techniczną oraz Davidowi P. Fettererowi i Stevenowi J. Kernowi za analizę statystyczną.
Praca została wsparta przez Defense Threat Reduction Agency Proposal #CBCALL12-THRB1-1-0270 do A.M.F i #CBS. MEDBIO.02.10.RD.034 do D.D.
Opinie, interpretacje, wnioski i rekomendacje należ....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Madagaskar syczący karaluch | Carolina Biological Supply Co, Burlington, Karolina Północna | ||
| Krokiety i bity, dowolny smak | Big Heart Pet Brands, San Francisco, CA | UPC #079100519378 | |
| Zatrzask na jednorazowych plastikowych pojemnikach lub odpowiednikach | Rubbermaid, Huntersville, NC | UPC #FG7F71RETCHIL | |
| Przykręć jednorazowe plastikowe pojemniki lub ich odpowiedniki | Rubbermaid, Huntersville, NC | UPC #FG7J0000TCHIL | |
| Tridak STEPPER series powtarzalne pipeta | Dymax Corporation www.dymax.com | T15469 | |
| Strzykawka (1 ml) | Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ | 309659 | |
| Needle (26 lub 27G x 1/2) | Becton Dickinson, Franklin Lakes, NJ | 305109, 305111 | |
| Difosforan chlorochiny | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO | C6628 | |
| Sól fizjologiczna buforowana fosforanem | Gibco/ Thermo Fisher Scientific, Gaithersburg, MD | 10010023 | |
| Difco Luria- Bertani (Lennox) | Becton Dickinson, Iskry, MD | 240230 | |
| Agar | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO | A1296 | |
| Glicerol | Sigma-Aldrich, St. Louis, MO | G6279 |
Bibliografia
- Sifri, C. D., Ausubel, F. M. Cellular Microbiology. Boquet, P., Cossart, P., Normark, S., Rappuoli, R. , ASM Press. 543-563 (2004).
- Silcock, S. Is your experiment really necessary? New Sci. 134 (1817), 32-34 (1992).
- Muller, U., Vogel, P., Alber, G., Schaub, G. A.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
