Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Wewnątrzczaszkowa trasa infekcji podpajęczynówkowej w celu zbadania roli biofilmów Streptococcus suis w zapaleniu opon mózgowo-rdzeniowych w modelu infekcji myszy

6.6K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/57658

⸱

1 lipca 2018

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1College of Veterinary Medicine, Nanjing Agricultural University, 2Key Lab of Animal Bacteriology, Ministry of Agriculture, 3OIE Reference Lab for Swine Streptococcosis, 4School of Medicine, Tsinghua University, 5Jiangsu Co-innovation Center for Prevention and Control of Important Animal Infectious Diseases and Zoonoses

W tym artykule

Podsumowanie

Tutaj opisujemy wewnątrzczaszkową podpajęczynówkową drogę infekcji u myszy, aby zbadać rolę biofilmów w zapaleniu opon mózgowych Streptococcus suis. Ten model infekcji nadaje się również do badania patogenezy innych bakteryjnych zapaleń opon mózgowo-rdzeniowych oraz skuteczności nowych leków przeciwko bakteryjnemu zapaleniu opon mózgowo-rdzeniowych.

Streszczenie

Streptococcus suis jest nie tylko głównym patogenem bakteryjnym świń na całym świecie, ale także nowym czynnikiem odzwierzęcym. U ludzi i świń zapalenie opon mózgowych jest głównym objawem zakażeń S. suis. Odpowiedni model infekcji jest niezbędnym narzędziem do zrozumienia mechanizmów chorób wywoływanych przez patogeny. Opracowano kilka dróg zakażenia u myszy w celu zbadania patogenezy zakażenia S. suis. Jednak dootrzewnowe, donosowe i dożylne drogi infekcji nie są odpowiednie do badania roli składników powierzchniowych S. suis w zapaleniu opon mózgowo-rdzeniowych bezpośrednio w mózgu, takich jak macierz zewnątrzkomórkowa z biofilmów. Chociaż inokulacja domostkowa była stosowana w przypadku zakażenia S. suis, dokładne miejsce wstrzyknięcia nie zostało opisane. W tym przypadku opisano wewnątrzczaszkową podpajęczynówkową drogę infekcji w modelu mysim w celu zbadania roli biofilmów w zapaleniu opon mózgowo-rdzeniowych S. suis. Komórki planktonowe S. suis lub komórki stanu biofilmu zostały bezpośrednio wstrzyknięte do przestrzeni podpajęczynówkowej myszy przez miejsce wstrzyknięcia znajdujące się 3,5 mm rostral od bregmy. Analiza histopatologiczna i zwiększona ekspresja mRNA TLR2 i cytokin tkanki mózgowej u myszy, którym wstrzyknięto komórki stanu biofilmu, wyraźnie wskazały, że biofilm S. suis odgrywa decydującą rolę w zapaleniu opon mózgowo-rdzeniowych S. suis. Ta droga infekcji ma oczywiste zalety w porównaniu z innymi drogami infekcji, umożliwiając badanie interakcji gospodarz-bakteria. Ponadto pozwala na ocenę wpływu składników bakteryjnych na odpowiedź immunologiczną gospodarza bezpośrednio w mózgu i naśladuje wnikanie bakterii do ośrodkowego układu nerwowego. Ta droga infekcji może zostać rozszerzona w celu zbadania mechanizmów zapalenia opon mózgowo-rdzeniowych wywoływanego przez inne bakterie. Ponadto może być również stosowany do testowania skuteczności leków przeciwko bakteryjnemu zapaleniu opon mózgowo-rdzeniowych.

Wprowadzenie

Streptococcus suis (S. suis) jest głównym patogenem bakteryjnym świń na całym świecie, powodującym poważne choroby, w tym zapalenie opon mózgowych, zapalenie płuc, posocznicę, zapalenie wsierdzia i artretyzm1. Jest to również pojawiający się czynnik odzwierzęcy. Do tej pory doniesiono, że dziewięć serotypów może powodować zakażenie u ludzi, w tym serotypy 2, 4, 5, 9, 14, 16, 21, 24 i 312,3,4. U ludzi i świń zapalenie opon mózgowo-rdzeniowych jest jednym z głównych objawów klinicznych zakażeń S. suis. W Wietnamie i Tajlandii S. suis jest główną przyczyną zapalenia opon mózgowych u dorosłych5. Biofilmy mikrobiologiczne to mikroorganizmy, które przylegają do siebie i są skoncentrowane na granicy faz; Są one niezbędne do zjadliwości bakterii, przetrwania w różnych środowiskach i odporności na antybiotyki5. Biofilmy są zazwyczaj otoczone macierzą zewnątrzkomórkową, która zazwyczaj zawiera polisacharydy, białka i DNA6. Ten ostatni jest w stanie wywołać reakcje zapalne gospodarza i produkcję cytokin7. W poprzednich badaniach donoszono, że tworzenie biofilmu jest zaangażowane w paciorkowcowe zapalenie opon mózgowo-rdzeniowych. Biofilmy przyczyniają się do zapalenia opon mózgowych Streptococcus agalactiae w modelu ryb tilapii, a tworzenie biofilmu zostało ujawnione w tkankach mózgowych i wokół powierzchni opon mózgowych in vivo poprzez inokulację dobrzuszną8. Podczas zapalenia opon mózgowo-rdzeniowych Streptococcus pneumoniae jest w stanie podobnym do biofilmu, a bakterie w takim stanie biofilmu były bardziej skuteczne w wywoływaniu zapalenia opon mózgowo-rdzeniowych w modelu infekcji myszy9. Ponadto, w naszym poprzednim badaniu, stan biofilmu związany z S. suis w mózgu myszy przyczynia się do zjadliwości bakterii poprzez analizę przeżycia10. Jednak bezpośrednie dowody na udział biofilmu w zapaleniu opon mózgowo-rdzeniowych S. suis wymagają dalszych badań.

Zwierzęce modele zakażenia S. suis zostały opracowane u myszy przy użyciu dootrzewnowej (i.p.)11, donosowej (i.n.)12, dożylnej (i.v.)13, oraz wewnątrzmostkowej (i.c.) drogi zakażenia14,15,16. Jednak drogi zakażenia i.p., i.n. i i.v. nie są odpowiednie do badania roli składników powierzchniowych S. suis w zapaleniu opon mózgowych bezpośrednio w mózgu. Należą do nich macierz zewnątrzkomórkowa z biofilmów. Chociaż inokulacja IC była stosowana w przypadku zakażenia S. suis, dokładne miejsce wstrzyknięcia nie zostało opisane w tych pracach. W przeciwieństwie do tego, stereotaktyczne współrzędne miejsca wstrzyknięcia dla wewnątrzczaszkowej inokulacji podpajęczynówkowej zostały wyraźnie opisane w poprzednim badaniu17. Pozwoliło to na łatwe rozpoznanie punktu inokulacji i uproszczenie protokołu eksperymentalnego. Ponadto wewnątrzczaszkowa podpajęczynówkowa droga infekcji naśladuje wnikanie bakterii do ośrodkowego układu nerwowego z zatok lub ucha środkowego17, a związek między uchem środkowym a zapaleniem opon mózgowo-rdzeniowych wywołanym przez S. suis został wykazany przez Madsen et al18. Ponadto, stosując wewnątrzczaszkową podpajęczynówkową drogę infekcji u myszy, wykazaliśmy, że S. suis małe RNA rss04 przyczynia się do zapalenia opon mózgowych w naszym poprzednim badaniu10.

W obecnym badaniu, wewnątrzczaszkowa podpajęczynówkowa droga infekcji została wykorzystana u myszy do zbadania roli biofilmów w zapaleniu opon mózgowych S. suis. Myszy zostały zakażone komórkami planktonicznymi lub komórkami stanu biofilmu S. suis tą drogą infekcji. Analiza histopatologiczna i zwiększona ekspresja mRNA TLR2 i cytokin z tkanki mózgowej myszy, którym wstrzyknięto komórki stanu biofilmu, jednoznacznie wskazały, że biofilm S. suis przyczynia się do zapalenia opon mózgowych.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Eksperymenty z infekcją myszy zostały zatwierdzone przez Komitet Monitorowania Zwierząt Laboratoryjnych prowincji Jiangsu w Chinach i przeprowadzone w Centrum Zwierząt Laboratoryjnych Uniwersytetu Rolniczego w Nankinie (numer zezwolenia: SYXK (Su) 2017-0007).

1. Przygotowanie bakterii

Uwaga: S. suis serotyp 2 zjadliwy szczep P1/7 został wyizolowany od chorej świni z zapaleniem opon mózgowych19. Szczep P1/7 był uprawiany w bulionie Todda-Hewitta (THB, formuła na litr THB: napar z serca, 3,1 g; neopepton, 20,0 g; dekstroza, 2,0 g; chlorek sodu, 2,0 g; fosforan disodowy, 0,4 g; węglan sodu, 2,5 g) i posiany na agarze Todda-Hewitta (THA, formuła na litr THA: Napar z serca, 3,1 g; neopepton, 20,0 g; dekstroza, 2,0 g; chlorek sodu, 2,0 g; fosforan disodowy, 0,4 g; węglan sodu, 2,5 g; agar, 15,0 g) w temperaturze 37 °C i 5% CO2 .

  1. Pobieranie komórek planktonowych szczepu P1/7
    1. Zebrać 5 ml komórek planktonowych z hodowli w połowie fazy logarytmicznej (OD600 = 0,6), wirować przez 3 minuty przy 8000 × g, a następnie przemyć 3 razy PBS.
    2. Ponownie zawiesić komórki w 5 ml 25% glicerolu w THB, podzielić na 5 probówek, a następnie przechowywać w temperaturze -80 °C.
  2. Pobieranie komórek stanu biofilmu szczepu P1/7
    1. Pobrać 20 ml kultury przez noc i dodać do 180 ml świeżej substancji od handlu ludźmi; podzielić rozcieńczoną kulturę na 10 równych okrągłych płytek hodowlanych, a następnie umieścić płytki w inkubatorze w temperaturze 37 °C w 5% CO2 przez 24 godziny.
    2. Po inkubacji delikatnie wstrząsnąć płytką w celu ponownego zawieszenia bakterii, które nie przylgnęły do płytki, a następnie wyrzucić supernatant przez aspirację.
      UWAGA: Delikatnie potrząśnij płytką i unikaj ponownego zawieszania osadu.
    3. Dodaj 5 ml PBS, aby zebrać komórki w stanie biofilmu, całkowicie zawieś osad, a następnie przenieś próbkę do nowej probówki.
    4. Sonikować komórki w stanie biofilmu z ostatniego etapu o następujących parametrach: 60 W, 4 cykle, 5 s włączone i 10 s wyłączone.
    5. Wirować przez 3 minuty w temperaturze 8000 × g i przechowywać supernatant w temperaturze -80 °C.
      UWAGA: Supernatant może zawierać składniki biofilmu i może być stosowany do ponownego zawieszenia bakterii biofilmu przed zakażeniem, jak opisano w doświadczeniach na zwierzętach (Krok 3).
    6. Ponownie zawiesić osad z 10 ml 25% glicerolu w THB, a następnie przechowywać komórki w stanie biofilmu w temperaturze -80 °C.

2. Analiza skaningowej mikroskopii elektronowej (SEM)

  1. Zebrane komórki stanu biofilmu i komórki planktonu utrwalić za pomocą 4% paraformaldehydu przez 12 - 24 godziny w temperaturze 4 °C.
  2. Próbki należy szybko przepłukać wodą destylowaną i kolejno odwadniać je zwiększającym stężeniem etanolu (25%, 50%, 70%, 90% i 100%) przez 30 minut w każdym roztworze.
  3. Wysuszone próbki przyklej do metalowych uchwytów taśmą dwustronną, a na koniec pokryj je w parowniku złotem i palladem.
  4. Obserwować próbki za pomocą skaningowego mikroskopu elektronowego, stosując następujące parametry: EHT (Extra High Tension) = 10 kV; WD (odległość robocza) = 7,0 lub 8,0 mm; Powiększenie = 5000 ×; Sygnał A= SE1.

3. Eksperymenty na zwierzętach

  1. W tym badaniu użyj 6-tygodniowych samic myszy BALB/c z filtrem SPF. Zakażenie wszystkich myszy przez wewnątrzczaszkową podpajęczynówkową drogę infekcji, której miejsce wstrzyknięcia znajduje się 3,5 mm rostral od bregmy. Stereotaktyczne współrzędne miejsca wstrzyknięcia zostały jasno opisane przez Chiavolini et al17.
    1. Do analizy histopatologicznej należy zainfekować dwie grupy myszy (5 myszy na grupę) za pomocą komórek planktonowych lub komórek stanu biofilmu w dawce 3 × 107 jednostek tworzących kolonie (CFU), a kolejnym 5 myszom wstrzyknięto PBS jako kontrolę.
    2. W celu wykrycia ekspresji mRNA TLR2 i cytokin w mózgu, należy zainfekować dwie dodatkowe grupy myszy (6 myszy na grupę) za pomocą komórek planktonowych lub komórek stanu biofilmu w dawce 3 ×10 7 CFU.
    3. Określ liczbę żywotnych bakterii, posiewając seryjne rozcieńczenia na THA.
    4. Poddaj eutanazji wszystkie myszy po 12 godzinach od zakażenia w celu dalszych badań.
      UWAGA: Glicerol z podłoża podstawowego musi zostać usunięty przed zakażeniem. Zarówno komórki planktonowe, jak i komórki w stanie biofilmu odzyskane z temperatury -80 °C są przemywane 3 razy PBS. Następnie komórki planktonowe są ponownie zawieszane za pomocą PBS i rozcieńczane do dawki odpowiedniej do infekcji; Komórki w stanie biofilmu są ponownie zawieszane w przechowywanym supernatantze (z kroku 1.2.5) i rozcieńczane do dawki odpowiedniej do zakażenia. Objętość infekcji nie powinna przekraczać 50 μl.
  2. Wykrywanie ekspresji mRNA TLR2 i cytokin w tkance mózgowej
    1. Wyodrębnij całkowite RNA z tkanki mózgowej za pomocą zestawu do ekstrakcji RNA.
      1. Dla każdej myszy użyj całej tkanki mózgowej do ekstrakcji RNA. Podziel całą tkankę mózgową na 5 probówek. Weź do 100 mg tkanki mózgowej i dodaj 1 ml roztworu do lizy do każdej probówki zawierającej matrycę lizującą dostarczoną przez zestaw.
      2. Przetwarzać probówkę w homogenizatorze przez 40 s przy ustawieniu 6,0, a następnie odwirować probówkę w temperaturze 12000 × g i 4 °C przez 5 minut.
      3. Po odwirowaniu przenieś górną fazę do nowej probówki do mikrowirówki.
      4. Inkubować przeniesioną próbkę przez 5 minut w temperaturze pokojowej, dodać 300 μl chloroformu, wirować przez 10 s, a następnie inkubować przez 5 minut w temperaturze pokojowej.
      5. Odwirować probówkę o sile 12000 × g i temperaturze 4 °C przez 5 minut. Przenieść górną fazę do nowej probówki.
      6. Dodać 500 μl zimnego absolutnego etanolu do probówki, przed odwróceniem jej 5 razy, a następnie przechowywać próbkę w temperaturze -20 °C przez co najmniej 1 godzinę.
      7. Odwirować probówkę o stężeniu 12000 × g i temperaturze 4 °C przez 15 minut i usunąć supernatant. Umyć granulat 500 μl zimnego 75% etanolu w H2O bez RNaz.
      8. Usunąć etanol, wysuszyć granulki na powietrzu przez 5 minut w temperaturze pokojowej i ponownie zawiesić RNA w 100 μl H2Owolnego od RNaz.
      9. Inkubować RNA przez 5 minut w temperaturze pokojowej i oznaczyć stężenie RNA za pomocą bioanalizatora RNA.
    2. Przeprowadź syntezę cDNA, w tym eliminację genomowego DNA (gDNA), za pomocą termocyklera z zestawem odczynników do odwrotnej transkrypcji (RT).
      1. Dodać 1 μg RNA do probówki zawierającej 2 μl buforu do eliminacji 5x gDNA, 1 μl enzymu eliminującego gDNA i H2O wolnego od RNaz, aż objętość osiągnie 10 μL. Inkubować przez 2 minuty w temperaturze 42 °C.
      2. Dodać 10 μl mieszanki wzorcowej (1 μl enzymu RT Mix I, 1 μl RT Primer Mix, 4 μl 5x Buffer 2 i 4 μL H2O bez RNaz) do roztworu reakcyjnego z ostatniego etapu, a następnie delikatnie wymieszać. Natychmiast należy przeprowadzić reakcję RT: 37 °C przez 15 min, a następnie 85 °C przez 5 s.
      3. Wykonaj ilościową analizę PCR w czasie rzeczywistym (RT-qPCR) przy użyciu maszyny do PCR w czasie rzeczywistym z zestawem SYBR RT-qPCR. Dodaj 10 μl 2x enzymu, 0,8 μl startera do przodu, 0,8 μl startera odwrotnego, 0,4 μl 50x barwnika referencyjnego ROX II, 2 μl matrycy cDNA i H2Owolnego od RNaz, aż do całkowitej objętości 20 μL.
      4. Każdą próbkę należy rozprowadzić trzykrotnie, stosując następujące parametry termiczne: 30 s w temperaturze 94 °C, następnie 40 cykli po 5 s w temperaturze 95 °C i 34 s w temperaturze 60 °C, z końcowym etapem trwającym 15 s w temperaturze 95 °C, 1 minutą w temperaturze 60 °C i 15 s w temperaturze 95 °C. Startery do RT-qPCR są wymienione w tabeli 1. Jako kontrolę wewnętrzną wykorzystano geny porządkoweB2m i 18s rRNA.
    3. Obliczyć względną zmianę krotności w oparciu o metodę 2-ΔΔCt.
  3. Obserwacja skrawków histologicznych
    1. Po 24 godzinnym utrwaleniu 10% formaliną, należy zrekonstruować utrwaloną tkankę mózgową na odpowiednie rozmiary kawałków tkanki na 2 - 3 mm.
    2. Umieść kawałki tkanek w kasecie do zatapiania i zanurz w nowym roztworze utrwalającym do odwodnienia za pomocą automatycznego odwadniacza próżniowego.
    3. Wyjąć utrwaloną tkankę i odwadniać ją sekwencyjnie w rosnących stężeniach etanolu (70%, 80%, 95%, 95% i 100%) przez 30 minut w każdym roztworze.
    4. Próbkę przeźroczyścić ksylenem na 15 minut, zanurzyć w ciekłej parafinie w temperaturze 60 °C na 90 minut, a następnie zatopić za pomocą maszyny do zatapiania.
    5. Pokrój zatopioną tkankę parafinową na plastry o grubości 3 μm, ułóż plasterek na wodzie o temperaturze 45 °C, a następnie wysusz na powietrzu.
    6. Inkubować skrawek przez 3 godziny w temperaturze 60 °C, wybarwić go metodą hematoksyliny i eozyny (HE) i uszczelnić gumą obojętną.
    7. Obserwuj zmiany histopatologiczne mózgu za pomocą mikroskopu optycznego. Do oceny zmian histologicznych zastosowano czteropunktowy system ocen. Użyj niesparowanego testu t do analizy statystycznej.
      Przekrwienie/krwotok: brak, wynik 0; mały obszar ogniskowego przekrwienia/krwotoku, punktacja 1; duży obszar ogniskowego przekrwienia/krwotoku lub wiele miejsc małego obszaru ogniskowego przekrwienia/krwotoku, wynik 2; do trzech dużych ogniskowych miejsc zatoru/krwotoku, wynik 3; rozlane przekrwienie/krwotok, wynik 4,
      Martwica: nieobecna, wynik 0; martwica ogniskowa, wynik 1; rozproszone występowanie 1 - 10 komórek martwiczych, wynik 2; ogniska zlewającej się martwicy, wynik 3; rozległa martwica zlewająca się, wynik 4,
      Naciek komórek zapalnych: nieobecny, wynik 0; nieliczne i ogniskowe nacieki, wynik 1; infiltracja wieloogniskowa lub nacieki z tworzeniem agregatów, punktacja 2; do trzech agregatów, wynik 3; i więcej niż cztery agregaty, wynik 4.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Przeprowadzono analizę SEM w celu zbadania tworzenia się biofilmu w warunkach eksperymentalnych. Jak pokazano na Rysunku 1, istnieje istotna różnica w tworzeniu biofilmu pomiędzy komórkami planktonicznymi (Rysunek 1A) a komórkami w stanie biofilmu (Rysunek 1B). Analiza SEM wykazała, że bakterie biofilmu tworzyły skupiska i wiele warstw, będąc zamkniętymi w macierzy z...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Opisana tutaj wewnątrzczaszkowa podpajęczynówkowa droga zakażenia ma oczywistą przewagę nad innymi drogami zakażenia. Pozwala badaczom badać interakcję gospodarz-bakteria i wpływ składników bakteryjnych na odpowiedzi immunologiczne gospodarza bezpośrednio w mózgu, które naśladują wnikanie bakterii do ośrodkowego układu nerwowego. W ten sposób ta droga infekcji może zostać wydłużona w celu zbadania mechanizmów zapalenia opon mózgowo-rdzeniowych wywoływanego przez inne bakterie. Ponadto może być również stosowany do testow...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

Ta praca była wspierana przez granty z Narodowego Programu Badań i Rozwoju Chin [2017YFD0500102]; Narodowej Fundacji Nauk Przyrodniczych Chin [31572544]; Państwowego Kluczowego Laboratorium Biologii Etiologicznej Weterynaryjnej [SKLVEB2016KFKT005]; Programu Rozwoju Technologii Stosowanych Rolnictwa w Szanghaju, Chiny [G2016060201].

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Todd Hewitt Broth(THB)Becton, Dickinson and CompanyDF0492078Rozpuść 30 g proszku w 1 l oczyszczonej wody. Autoklaw pod kątem 121° przez 15 min.
AgarDSBIO16C0050Rozpuścić 15 g proszku w 1 l THB. Autoklaw pod kątem 121° przez 15 min.
Referencyjny system oczyszczania wody Milli-QMerck KGaAZ00QSVCUSBez Dnazy / Rnazy
NaClTianjin Kemiou Chemical Reagent Co., Ltd10019318Rozpuść 8 g NaCl, 0,2 g KCl, 1,42 g Na2HPO3, 0,27 g KH2PO4 w 1 l oczyszczonej wody. Autoklaw pod kątem 121° przez 15 min. Użyj KOH, aby dostosować pH do 7,4.
Na2HPO3Xilong Scientific Co., Ltd9009012-01-09Rozpuścić 8 g NaCl, 0,2 g KCl, 1,42 g Na2HPO3, 0,27 g KH2PO4 w 1 l oczyszczonej wody. Autoklaw pod kątem 121° przez 15 min. Użyj KOH, aby dostosować pH do 7,4.
KClXilong Scientific Co., Ltd9009017-01-09Rozpuścić 8 g NaCl, 0,2 g KCl, 1,42 g Na2HPO3, 0,27 g KH2PO4 w 1 l oczyszczonej wody. Autoklaw pod kątem 121° przez 15 min. Użyj KOH, aby dostosować pH do 7,4.
KH2PO4Xilong Scientific Co., Ltd9009019-01-09Rozpuścić 8 g NaCl, 0,2 g KCl, 1,42 g Na2HPO3, 0,27 g KH2PO4 w 1 l oczyszczonej wody. Autoklaw pod kątem 121° przez 15 min. Użyj KOH, aby dostosować pH do 7,4.
KOHXilong Scientific Co., Ltd9009014-01-09Rozpuścić 8 g NaCl, 0,2 g KCl, 1,42 g Na2HPO3, 0,27 g KH2PO4 w 1 l oczyszczonej wody. Autoklaw pod kątem 121° przez 15 min. Użyj KOH, aby dostosować pH do 7,4.
GlycerolSionpharm Chemical Reagent Co., Ltd10010618Rozcieńczony równą objętością oczyszczonej wody, autoklaw w temperaturze 121& stopni przez 15 min
4% paraformaldehyduSionpharm Chemical Reagent Co., Ltd80096675
25% aldehydu glutarowegoSionpharm Chemical Reagent Co., Ltd3009243610-krotnie rozcieńczony oczyszczoną wodą w celu utrwalenia.
EtanolSionpharm Chemical Reagent Co., Ltd10009218
ChloroformSionpharm Chemical Reagent Co., Ltd10006818
SpctrophotometreDeNovix Inc.DS-11 +
Ultradźwiękowa kruszarka komórkowaNingBo Scientz Biotechnology Co., LtdWirówka JY96-IIN
Hitachi Koki Co., LtdCT15RE
LodówkaAucma Co., LtdDW-86L500
Skaningowy mikroskop elektronowyZeissEVO-LS10
FastRNA Pro Green KitMP Biomedicals#6045-050
FastPrep-24 InstrumentMP Biomedicals116005500
Instrument do PCRSensoQuest GmbH1124310110
QuantStudio 6 FlexThermo Fisher Scientific4485689
SYBR Premix Ex Taq IITakara Biomedical Technology (Beijing) Co., LtdRR820A
PrimeScript RT z gumkągDNATakara Biomedical Technology (Beijing) Co., LtdRR047A
W pełni zamknięty procesor tkanekLeica Biosystems Nussloch GmbHASP200S
Podgrzewany moduł do zatapiania parafinyLeica Biosystems Nussloch GmbHEG1150H
Półautomatyczny mikrotom obrotowyLeica Biosystems Nussloch GmbHRM2245
Łaźnia wodna do sekcji parafinowychLeica Biosystems Nussloch GmbHHI1210
Autostainer XLLeica Biosystems Nussloch GmbHST5010
Agilent 2100Agilent TechnologiesG2939A
Mikroskop optycznyOlympusBX51
Zestaw odczynników

Bibliografia

  1. Gottschalk, M., Xu, J., Calzas, C., Segura, M. Streptococcus suis: a new emerging or an old neglected zoonotic pathogen? Future Microbiology. 5, 371-391 (2010).
  2. Goyette-Desjardins, G., Auger, J. P., Xu, J., Segura, M., Gottschalk, M. Streptococcus suis, an important pig pathogen and emerging zoonotic agent-an update on the worldwide distribution based on serotyping and sequence typing. Emerging Microbes & Infections. 3 (6), e45(2014).
  3. Kerdsin, A., et al. Emergence of Streptococcus suis serotype 9 infection in humans. Journal of Microbiology, Immunology and Infection. 50 (4), 545-546 (2017).
  4. Hatrongjit, R., et al. First human case report of sepsis due to infection with Streptococcus suis serotype 31 in Thailand. BMC Infect Diseases. 15, 392(2015).
  5. Fittipaldi, N., Segura, M., Grenier, D., Gottschalk, M. Virulence factors involved in the pathogenesis of the infection caused by the swine pathogen and zoonotic agent Streptococcus suis. Future Microbiology. 7 (2), 259-279 (2012).
  6. Hall-Stoodley, L., Costerton, J. W., Stoodley, P. Bacterial biofilms: from the natural environment to infectious diseases. Nature Reviews Microbiology. 2 (2), 95-108 (2004).
  7. Fuxman Bass, J. I., et al. Extracellular DNA: a major proinflammatory component of Pseudomonas aeruginosa biofilms. Journal of Immunology. 184 (11), 6386-6395 (2010).
  8. Isiaku, A. I., et al. Biofilm is associated with chronic streptococcal meningoencephalitis in fish. Microbial Pathogenesis. 102, 59-68 (2017).
  9. Oggioni, M. R., et al. Switch from planktonic to sessile life: a major event in pneumococcal pathogenesis. Molecular Microbiology. 61 (5), 1196-1210 (2006).
  10. Xiao, G., et al. Streptococcus suis small RNA rss04 contributes to the induction of meningitis by regulating capsule synthesis and by inducing biofilm formation in a mouse infection model. Veterinary Microbiology. 199, 111-119 (2017).
  11. Dominguez-Punaro, M. C., et al. Streptococcus suis serotype 2, an important swine and human pathogen, induces strong systemic and cerebral inflammatory responses in a mouse model of infection. Journal of Immunology. 179 (3), 1842-1854 (2007).
  12. Seitz, M., et al. A novel intranasal mouse model for mucosal colonization by Streptococcus suis serotype 2. Journal of Medical Microbiology. 61 (Pt 9), 1311-1318 (2012).
  13. Busque, P., Higgins, R., Caya, F., Quessy, S. Immunization of pigs against Streptococcus suis serotype 2 infection using a live avirulent strain. Canadian Journal of Veterinary Research. 61 (4), 275-279 (1997).
  14. Williams, A. E., Blakemore, W. F. Pathology of Streptococcal meningitis following intravenous intracisternal and natural routes of infection. Neuropathology and Applied Neurobiology. 4 (4), 345-356 (1990).
  15. Dominguez-Punaro, M. C., et al. Severe cochlear inflammation and vestibular syndrome in an experimental model of Streptococcus suis infection in mice. European Journal of Clinical Microbiology & Infectious Diseases. 31 (9), 2391-2400 (2012).
  16. Auger, J. P., Fittipaldi, N., Benoit-Biancamano, M. O., Segura, M., Gottschalk, M. Virulence Studies of Different Sequence Types and Geographical Origins of Streptococcus suis Serotype 2 in a Mouse Model of Infection. Pathogens. 5 (3), (2016).
  17. Chiavolini, D., et al. Method for inducing experimental pneumococcal meningitis in outbred mice. BMC Microbiology. 4, 36(2004).
  18. Madsen, L. W., Svensmark, B., Elvestad, K., Jensen, H. E. Otitis interna is a frequent sequela to Streptococcus suis meningitis in pigs. Veterinary Pathology. 38 (2), 190-195 (2001).
  19. Holden, M. T., et al. Rapid evolution of virulence and drug resistance in the emerging zoonotic pathogen Streptococcus suis. PLoS One. 4 (7), e6072(2009).
  20. Dominguez-Punaro Mde, L., et al. In vitro characterization of the microglial inflammatory response to Streptococcus suis, an important emerging zoonotic agent of meningitis. Infection and Immunity. 78 (12), 5074-5085 (2010).
  21. Hassan, A., et al. Evaluation of different detection methods of biofilm formation in the clinical isolates. Brazilian Journal of Infectious Diseases. 15 (4), 305-311 (2011).
  22. Vanier, G., et al. New putative virulence factors of Streptococcus suis involved in invasion of porcine brain microvascular endothelial cells. Microbial Pathogenesis. 46 (1), 13-20 (2009).
  23. Takeuchi, D., et al. The contribution of suilysin to the pathogenesis of Streptococcus suis meningitis. Journal of Infectious Diseases. 209 (10), 1509-1519 (2014).
  24. Tenenbaum, T., et al. Polar bacterial invasion and translocation of Streptococcus suis across the blood-cerebrospinal fluid barrier in vitro. Cellular Microbiology. 11 (2), 323-336 (2009).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Przeglądaj więcej artykułów

Zapalenie opon mózgowo-rdzeniowych z biofilmemkomórki planktonicznekomórki w stanie biofilmuanaliza histopatologicznaekspresja TLR2analiza cytokinekstrakcja RNA
Wewnątrzczaszkowa trasa infekcji podpajęczynówkowej w celu zbadania roli biofilmów Streptococcus suis w zapaleniu opon mózgowo-rdzeniowych w modelu infekcji myszy
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.