W tym badaniu modyfikujemy mikroelektrody z włókna węglowego za pomocą nanocząsteczek złota, aby zwiększyć czułość wykrywania neuroprzekaźników.
Artykuł metodologiczny
W tym badaniu modyfikujemy mikroelektrody z włókna węglowego za pomocą nanocząsteczek złota, aby zwiększyć czułość wykrywania neuroprzekaźników.
Przez ponad 30 lat, mikroelektrody z włókna węglowego (CFME) były standardem wykrywania neuroprzekaźników. Ogólnie rzecz biorąc, włókna węglowe są zasysane do szklanych kapilarn, ciągnięte do drobnego stożka, a następnie uszczelniane za pomocą żywicy epoksydowej w celu wytworzenia materiałów elektrodowych, które są używane do szybkich testów cyklicznej woltamperometrii skanowania. Stosowanie gołych CFME ma jednak kilka ograniczeń. Przede wszystkim włókno węglowe zawiera głównie węgiel płaski, który ma stosunkowo niską powierzchnię i daje niższą czułość niż inne nanomateriały. Ponadto węgiel grafitowy jest ograniczony przez swoją rozdzielczość czasową i stosunkowo niską przewodność. Wreszcie, wiadomo, że neurochemikalia i makrocząsteczki zanieczyszczają powierzchnię elektrod węglowych, gdzie tworzą nieprzewodzące polimery, które blokują dalszą adsorpcję neuroprzekaźników. W tym badaniu modyfikujemy CFME za pomocą nanocząstek złota, aby usprawnić testy neurochemiczne za pomocą szybkiej woltamperometrii cyklicznej. Au3+ został zdeponowany elektrolitycznie lub pokryty zanurzeniem z roztworu koloidalnego na powierzchni CFME. Ponieważ złoto jest stabilnym i stosunkowo obojętnym metalem, jest idealnym materiałem elektrodowym do pomiarów analitycznych neurochemikaliów. Modyfikowane nanocząstkami złota (AuNP-CFMEs) charakteryzowały się stabilnością odpowiedzi na dopaminę przez ponad 4 godziny. Ponadto AuNP-CFME wykazują zwiększoną czułość (wyższy szczytowy prąd utleniania cyklicznych woltammogramów) i szybszą kinetykę transferu elektronów (niższy ΔEP lub separacja pików) niż gołe niezmodyfikowane CFME. Opracowanie AuNP-CFME pozwoli na stworzenie nowatorskich czujników elektrochemicznych do wykrywania szybkich zmian stężenia dopaminy i innych substancji neurochemicznych przy niższych granicach wykrywalności. Praca ta ma szerokie zastosowanie w ulepszaniu pomiarów neurochemicznych. Wytwarzanie CFME modyfikowanych nanocząstkami złota będzie miało kluczowe znaczenie dla rozwoju nowych czujników elektrodowych do wykrywania neuroprzekaźników in vivo u gryzoni i innych modeli do badania neurochemicznych skutków nadużywania narkotyków, depresji, udaru, niedokrwienia i innych stanów behawioralnych i chorobowych.
Mikroelektrody z włókna węglowego (CFMEs)1 najlepiej sprawdzają się jako biosensory do wykrywania utleniania kilku kluczowych neuroprzekaźników2, w tym dopaminy3, noradrenalina4, serotonina5, adenozyna6, histamina7, i inne8. Biokompatybilność i rozmiar włókien węglowych sprawiają, że są one optymalne do implantacji, ponieważ w porównaniu z większymi standardowymi elektrodami dochodzi do złagodzenia uszkodzeń tkanek. 9 CFME są znane z użytecznych właściwości elektrochemicznych i są zdolne do wykonywania szybkich pomiarów, gdy są używane z szybkimi technikami elektrochemicznymi, najczęściej fast-scan cyclic voltampermeter (FSCV)10,11. FSCV to technika, która szybko skanuje zastosowany potencjał i zapewnia specyficzny cykliczny woltammogram dla określonych analitów12,13. Duży prąd ładowania wytwarzany przez szybkie skanowanie jest stabilny na włóknach węglowych i może być odejmowany w tle w celu uzyskania określonych cyklicznych woltammogramów.
Ze względu na swoją optymalną elektrochemię i znaczenie neurobiologiczne, dopamina była szeroko badana. Dopamina katecholamina jest niezbędnym przekaźnikiem chemicznym, który odgrywa kluczową rolę w kontroli ruchu, pamięci, funkcji poznawczych i emocji w układzie nerwowym. Nadmiar lub niedobór dopaminy może powodować liczne zakłócenia neurologiczne i psychologiczne; wśród nich są choroba Parkinsona, schizofrenia i zachowania uzależniające. Obecnie choroba Parkinsona jest nadal powszechnym zaburzeniem spowodowanym zwyrodnieniem neuronów śródmózgowia zaangażowanych w syntezę dopaminy14. Objawy choroby Parkinsona obejmują drżenie, spowolnienie ruchów, sztywność i problemy z utrzymaniem równowagi. Z drugiej strony, stymulanty takie jak kokaina15 i amfetamina16,17 sprzyjają nadmiarowi dopaminy. Nadużywanie narkotyków ostatecznie zastępuje regularny przepływ dopaminy i sprawia, że mózg potrzebuje nadwyżki dopaminy, co ostatecznie prowadzi do zachowań uzależniających.
W ostatnich latach położono nacisk na poprawę funkcjonalności elektrod w wykrywaniu neuroprzekaźników18. Najbardziej rozpowszechnioną metodą zwiększania czułości elektrody jest powlekanie powierzchni włókna. Co zaskakujące, przeprowadzono ograniczone badania nad elektroosadzaniem nanocząstek metali na włóknach węglowych19. Nanocząstki metali szlachetnych, takie jak złoto, mogą być osadzane elektrolitycznie na powierzchni włókna wraz z innymi materiałami funkcjonalnymi20. Na przykład zwiększenie powierzchni elektroaktywnej, aby zaszła adsorpcja neuroprzekaźników. Nanocząstki metalu osadzane elektrolitycznie tworzą się szybko, mogą być oczyszczane i przylegają do włókna węglowego. Elektrochemia nadal ma znaczenie zarówno dla osadzania nanocząstek metali szlachetnych, jak i wzmacniania powierzchni włókien węglowych, ponieważ pozwala na kontrolę zarodkowania i wzrostu tych nanocząstek. Wreszcie, zwiększona charakterystyka katalityczna i przewodząca oraz ulepszony transport masy to między innymi zalety wykorzystania nanocząstek metali do elektroanalizy.
Zaawansowany kurs sekwencyjny laboratoryjny Uniwersytetu Amerykańskiego (Eksperymentalna Chemia Biologiczna I i II CHEM 471/671-472/672) jest połączeniem laboratoriów analitycznych, fizycznych i biochemicznych. Pierwszy semestr to przegląd technik laboratoryjnych. Drugi semestr to projekt badawczy prowadzony przez studentów21. W ramach tych projektów studenci wcześniej badali mechanizm syntezy nanocząsteczek złota za pomocą biomolekuł, białek, peptydów i aminokwasów22,23. Nowsze prace koncentrowały się na tworzeniu produkcji nanocząstek złota (AuNP) na powierzchniach elektrod oraz na ocenie wpływu AuNPs na zdolność CFME do wykrywania neuroprzekaźników. W niniejszej pracy laboratorium zastosowało tę technikę, aby wykazać, że czułość CFME w wykrywaniu utleniania dopaminy jest zwiększona poprzez elektroosadzanie AuNP na powierzchni włókna. Każdy bare-CFME charakteryzuje się różną szybkością skanowania, stabilnością i stężeniem dopaminy podczas wykrywania prądów oksydacyjnych dopaminy w celu pomiaru utleniania dopaminy na powierzchni CFME. Au3+ został następnie zredukowany elektrolitycznie do Au0 i jednocześnie zdeponowany elektrolitycznie na powierzchni włókna w postaci nanocząstek, po czym przeprowadzono serię eksperymentów charakteryzujących. Po bezpośrednim porównaniu stwierdzono, że AuNP-CFME mają wyższą czułość wykrywania dopaminy. Równomierne pokrycie AuNP na powierzchni włókna za pomocą elektroosadzania zapewnia większą powierzchnię elektroaktywną; zwiększając w ten sposób adsorpcję dopaminy na zmodyfikowanej powierzchni elektrody. Prowadziło to do wyższych prądów oksydacyjnych dopaminy. Potencjalna separacja pików utleniania i redukcji dopaminy (∆Ep) AuNP-CFME była również mniejsza, co sugeruje szybszą kinetykę transferu elektronów. Przyszłe prace w ramach tego badania obejmują testowanie in vivo zarówno gołych, jak i AuNP-CFME w celu wykrycia dopaminy.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
1. Budowa mikroelektrod z włókna węglowego
2. Przygotowanie mikroelektrod z włókna węglowego
3. Elektrodepozycja
4. Skaningowa mikroskopia elektronowa
UWAGA: Obraz gołych i modyfikowanych nanocząstkami złota mikroelektrod z włókna węglowego za pomocą instrumentu skaningowej mikroskopii elektronowej (SEM). Załaduj próbkę na czarną taśmę przewodzącą i postępuj zgodnie z instrukcjami opisanymi przez producenta.
5. Szybkie skanowanie cyklicznego testowania woltamperometrii
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dla Rysunek 1, pokazujemy schemat, na którym testy FSCV są wykorzystywane do pomiaru stężenia neuroprzekaźników in vitro. Rysunek 1 przedstawia zastosowany przebieg dopaminy. Przebieg trójkątny skanuje od -0,4 V do 1,3 V przy 400 V/s. W drugiej części rysunku po lewej stronie pokazano utlenianie dopaminy do dopamino-ortochinonu (DOQ), proces przenoszenia dwóch elektronów zachodzi z powierzchni analitu na powierzchnię elektrody. N...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
W tym badaniu demonstrujemy nowatorską metodę konstruowania mikroelektrod z włókna węglowego modyfikowanych nanocząstkami złota do wykrywania neuroprzekaźników, takich jak dopamina, przy użyciu szybkiej woltamperometrii cyklicznej. Metoda ta jest skutecznym, ekologicznym i stosunkowo niedrogim podejściem do zwiększania czułości wykrywania biomolekuł. Grubość złota osadzonego na powierzchni włókna węglowego może być kontrolowana przez czas elektroosadzania i stężenie złota obecnego w roztworze do elektroosadzania. Wykazan...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Chcielibyśmy podziękować Amerykańskiemu Uniwersytetowi, Grantowi Wsparcia Badań Wydziału, Grantowi Kosmicznemu DC NASA oraz NSF-MRI#1625977.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Chlorowodorek dopaminy | Sigma Aldrich | H8502-5G | |
| Sól fizjologiczna buforowana fosforanem | Sigma Aldrich | P5493-1L | |
| Pine WaveNeuro Potencjostat | Instrumenty sosnowe | NEC-WN-BASIC | To zamówienie jest dostarczane hurtowo ze wszystkimi innymi akcesoriami, takimi jak headstage, adaptery, przewody i inna elektronika |
| Sosnowa komórka przepływowa i mikromanipulator | Instrumenty sosnowe | NEC-FLOW-1 | Jest to również kolejne zamówienie masowe obejmujące mikromanipulator, komorę przepływową, pokrętła, rurki, złącza itp. |
| Systemy szklano-kapilarne | AM | 602500 | |
| T-650 Włókno węglowe | Goodfellow | C 005711 | |
| Epon 828 Żywica epoksydowa | Miller-Stephenson | EPON 828 TDS | |
| Dietelinotriamina | Sigma Aldrich | D93856-5ML | |
| Chlorek złota (III) | Sigma Aldrich | 254169 | HAuCl4 lub AuCl3 |
| Fisher | S90528 | ||
| Koszyk Farradaya | AMETEK TMC | 81-334-03 | |
| Pompa strzykawkowa | NEW ERA PUMP | NE-1000 | |
| Pipety i końcówki | Eppendorf 2231000222 Eppendorf | Jest to również zamówienie zbiorcze zawierające wiele pipet i końcówek | |
| Zlewki 10 -1,000 ml | VWR | 10536-390 | |
| Włókno węglowe | Goodfellow | C 005711 | |
| SEM | JEOL | JSM-IT100 |
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE
Poproś o pozwolenie