Mapowanie uszkodzeń i objawów (LSM), zwane również mapowaniem uszkodzeń i zachowań, jest ważnym narzędziem badania architektury funkcjonalnej ludzkiego mózgu1. W badaniach nad uszkodzeniami funkcje mózgu są wnioskowane i lokalizowane poprzez badanie pacjentów z nabytymi uszkodzeniami mózgu. Pierwsze studia przypadków łączące objawy neurologiczne z konkretnymi lokalizacjami w mózgu, przeprowadzone w XIX wieku , dostarczyły już fundamentalnych informacji na temat anatomicznych korelatów języka i kilku innych procesów poznawczych2. Niemniej jednak korelaty neuroanatomiczne wielu aspektów poznania oraz innych funkcji mózgu pozostawały nieuchwytne. W ostatnich dekadach ulepszone metody obrazowania strukturalnego mózgu i postępy techniczne umożliwiły prowadzenie wielkoskalowych badań LSM in vivo z wysoką rozdzielczością przestrzenną (tj. na poziomie poszczególnych wokseli lub konkretnych korowych/podkorowych obszarów zainteresowania)1,2. Dzięki tym postępom metodologicznym LSM stało się coraz popularniejszą metodą w neuronauce poznawczej i nadal dostarcza nowych informacji na temat neuroanatomii poznania i objawów neurologicznych3. Kluczowym krokiem w każdym badaniu LSM jest dokładna segmentacja uszkodzeń i rejestracja do szablonu mózgu. Brakuje jednak kompleksowego samouczka dotyczącego wstępnego przetwarzania danych obrazowania mózgu na potrzeby LSM.
W niniejszym materiale przedstawiono kompletny samouczek dotyczący zstandaryzowanej metody segmentacji i rejestracji zmian chorobowych. Metoda ta dostarcza badaczom schematu postępowania w zakresie zstandaryzowanego przetwarzania obrazów mózgu oraz przeglądu potencjalnych błędów, których należy unikać. Przedstawiony schemat przetwarzania obrazów został opracowany w ramach międzynarodowej współpracy4 i jest częścią ram niedawno założonego konsorcjum Meta VCI map, którego celem jest przeprowadzanie wieloośrodkowych badań mapowania zależności między zmianami a objawami w zaburzeniach poznawczych pochodzenia naczyniowego <www.metavcimap.org>5. Metoda ta została zaprojektowana tak, aby przetwarzać skany CT i MRI pochodzące od wielu producentów i z heterogenicznych protokołów skanowania, co umożliwia łączone przetwarzanie zbiorów danych obrazowych z różnych źródeł. Wymagane oprogramowanie RegLSM oraz wszystkie inne programy niezbędne do realizacji tego protokołu są dostępne bezpłatnie z wyjątkiem programu MATLAB, który wymaga licencji. Niniejszy samouczek koncentruje się na segmentacji i rejestracji zawałów mózgu, jednak przedstawiony schemat przetwarzania obrazów może być stosowany również w przypadku innych zmian, takich jak hiperintensywności istoty białej6.
Przed rozpoczęciem badania LSM wymagane jest podstawowe zrozumienie ogólnych koncepcji oraz potencjalnych trudności. Dostępnych jest kilka szczegółowych wytycznych oraz praktyczny przewodnik1,3,6. Jednakże przeglądy te nie zawierają szczegółowego samouczka praktycznego dotyczącego etapów gromadzenia i konwertowania skanów mózgu do odpowiedniego formatu, segmentacji obszaru zawału mózgu oraz rejestracji skanów do szablonu mózgu. Niniejsza praca stanowi taki samouczek. Ogólne koncepcje LSM zostały przedstawione we wstępie wraz z odsyłaczami do dalszej literatury w tym temacie.
Ogólny cel badań nad mapowaniem zależności między uszkodzeniem a objawami
Z perspektywy neuropsychologii poznawczej urazy mózgu mogą służyć jako model stanu pozwalający lepiej zrozumieć neuronalne podstawy określonych procesów poznawczych oraz uzyskać pełniejszy obraz architektury poznawczej mózgu1. Jest to klasyczne podejście w neuropsychologii, które po raz pierwszy zostało zastosowane w badaniach pośmiertnych w XIX wieku przez pionierów takich jak Broca i Wernicke2. W erze funkcjonalnego obrazowania mózgu podejście oparte na analizie zmian ogniskowych pozostało kluczowym narzędziem w neuronauce, ponieważ dostarcza dowodów na to, że uszkodzenia w konkretnym obszarze mózgu zaburzają wykonywanie zadania, podczas gdy badania obrazowania funkcjonalnego wykazują obszary mózgu aktywowane podczas realizacji tego zadania. W związku z tym podejścia te dostarczają komplementarnych informacji1.
Z perspektywy neurologii klinicznej badania LSM mogą wyjaśnić związek między lokalizacją zmiany a funkcjonowaniem poznawczym u pacjentów z ostrymi zawałami objawowymi, hiperintensywnościami istoty białej, ubytkami lakunarnymi lub innymi typami zmian (np. guzami). Niedawne badania wykazały, że obecność takich zmian w strategicznych obszarach mózgu ma większe znaczenie w wyjaśnianiu sprawności poznawczej niż całkowite obciążenie zmianami 2,5,7,8. Podejście to ma potencjał do poprawy zrozumienia patofizjologii złożonych zaburzeń (w tym przykładzie naczyniowych zaburzeń poznawczych) i może stwarzać możliwości opracowania nowych narzędzi diagnostycznych i prognostycznych lub wspierania strategii leczenia2.
LSM znajduje zastosowanie również poza obszarem poznawczym. W rzeczywistości każdą zmienną można powiązać z lokalizacją uszkodzenia, w tym objawy kliniczne, biomarkery oraz wyniki funkcjonalne. Na przykład w niedawnym badaniu określono lokalizacje zawałów, które były predyktorami wyników funkcjonalnych po udarze niedokrwiennym10.
Mapowanie objawowe zmian oparte na wokselach w porównaniu do mapowania opartego na obszarach zainteresowania
Aby przeprowadzić mapowanie zależności między zmianami chorobowymi a objawami, zmiany muszą zostać wysegmentowane i zarejestrowane względem szablonu mózgu. Podczas procedury rejestracji mózg każdego pacjenta jest wyrównywany przestrzennie (tzn. normalizowany lub rejestrowany do wspólnego szablonu), aby skorygować różnice w wielkości, kształcie i orientacji mózgu, tak aby każdy woksel na mapie zmian reprezentował tę samą strukturę anatomiczną u wszystkich pacjentów7. W przestrzeni standardowej można przeprowadzić kilka rodzajów analiz, które zostały tutaj krótko podsumowane.
W celu wykazania różnic w rozmieszczeniu zmian u pacjentów z deficytami w porównaniu do pacjentów bez deficytów można przeprowadzić prostą analizę odejmowania zmian (lesion-subtraction analysis). Powstała mapa odejmowania wskazuje obszary, które są częściej uszkodzone u pacjentów z deficytami, a oszczędzone u pacjentów bez deficytów1. Chociaż analiza odejmowania zmian może dostarczyć pewnych informacji na temat korelatów określonej funkcji, nie stanowi ona dowodu statystycznego i obecnie jest stosowana głównie w przypadkach, gdy wielkość próby jest zbyt mała, aby zapewnić wystarczającą moc statystyczną dla mapowania objawów i zmian w oparciu o woksele (voxel-based lesion-symptom mapping).
W mapowaniu objawów w oparciu o voxele (voxel-based lesion-symptom mapping), związek między obecnością zmiany a sprawnością poznawczą jest określany na poziomie każdego pojedynczego voxela w mózgu (Rysunek 1). Główną zaletą tej metody jest wysoka rozdzielczość przestrzenna. Tradycyjnie analizy te były przeprowadzane w podejściu masowo-jednowymiarowym (mass-univariate approach), co wymaga korekty na wielokrotne testowanie i wprowadza błąd przestrzenny spowodowany korelacjami między voxelami, które nie są brane pod uwagę1,10,11. Niedawno opracowane podejścia, które uwzględniają korelacje między voxelami (zazwyczaj określane jako wielowymiarowe metody mapowania objawów, takie jak analiza bayesowska13, regresja wektorów nośnych4,14 lub inne algorytmy uczenia maszynowego15), wykazują obiecujące wyniki i wydają się poprawiać czułość i swoistość wyników analiz LSM przeprowadzanych voxel po voxelu w porównaniu z metodami tradycyjnymi. Dalsze ulepszanie i walidacja metod wielowymiarowych dla LSM na poziomie voxela jest procesem ciągłym. Wybór najlepszej metody dla konkretnego mapowania objawów zależy od wielu czynników, w tym od rozkładu zmian, zmiennej wynikowej oraz podstawowych założeń statystycznych danych metod.
W mapowaniu zależności między zmianami a objawami w oparciu o obszary zainteresowania (ROI), określa się związek między rozległością zmian w konkretnym regionie mózgu a sprawnością poznawczą (ilustrację przedstawiono na Rysunku 1 w pracy Biesbroek i wsp.2). Główną zaletą tej metody jest uwzględnienie skumulowanej rozległości zmian w obrębie struktury anatomicznej, co w niektórych przypadkach może być bardziej informacyjne niż zmiana w pojedynczym wokselu. Z drugiej strony, analizy oparte na ROI mają ograniczoną moc wykrywania wzorców występujących jedynie w podzbiorze wokseli w danym regionie16. Tradycyjnie mapowanie zależności między zmianami a objawami oparte na ROI wykonuje się przy użyciu regresji logistycznej lub liniowej. Ostatnio wprowadzono metody wielowymiarowe, które lepiej radzą sobie z koliniowością (np. bayesowską analizę sieciową17, regresję wektorów nośnych4,18 lub inne algorytmy uczenia maszynowego19), co może zwiększyć swoistość wyników badań nad mapowaniem zależności między zmianami a objawami.
Wybór pacjentów
W badaniach LSM pacjentów zazwyczaj dobiera się na podstawie konkretnego rodzaju zmiany (np. zawały mózgu lub hiperintensywności istoty białej) oraz odstępu czasu między diagnozą a oceną neuropsychologiczną (np. udar w fazie ostrej w porównaniu z fazą przewlekłą). Optymalny projekt badania zależy od postawionego pytania badawczego. Na przykład przy badaniu architektury funkcjonalnej ludzkiego mózgu najlepiej włączyć pacjentów po udarze w fazie ostrej, ponieważ na tym etapie nie nastąpiła jeszcze reorganizacja funkcjonalna, natomiast pacjentów po udarze w fazie przewlekłej należy włączyć podczas badania długofalowych skutków udaru w zakresie funkcji poznawczych. Szczegółowy opis kwestii i pułapek związanych z doborem pacjentów przedstawiono w innym opracowaniu7.
Preprocessing obrazów mózgu w celu mapowania zależności między uszkodzeniami a objawami
Dokładna segmentacja zmian i ich rejestracja do wspólnego szablonu mózgu są kluczowymi etapami w mapowaniu objawów w zależności od lokalizacji zmian (lesion-symptom mapping, LSM). Ręczna segmentacja zmian pozostaje złotym standardem dla wielu typów uszkodzeń, w tym dla zawałów7. Przedstawiono szczegółowy samouczek dotyczący kryteriów ręcznej segmentacji zawałów w badaniach CT, obrazowaniu ważonym dyfuzją (DWI) oraz w sekwencjach MRI z odwracaniem i tłumieniem sygnału z płynów (FLAIR), zarówno w fazie ostrej, jak i przewlekłej. Posegmentowane zawały (tj. binarne mapy zmian 3D) muszą zostać zarejestrowane przed przeprowadzeniem jakichkolwiek analiz międzyosobniczych. Niniejszy protokół wykorzystuje metodę rejestracji RegLSM, która została opracowana w środowisku wieloośrodkowym4. RegLSM stosuje liniowe i nieliniowe algorytmy rejestracji oparte na elastix20 zarówno dla CT, jak i MRI, z dodatkowym etapem przetwarzania CT, zaprojektowanym specjalnie w celu poprawy jakości rejestracji skanów CT21. Co więcej, RegLSM umożliwia stosowanie różnych docelowych szablonów mózgu oraz (opcjonalny) pośredni etap rejestracji do szablonu CT/MRI specyficznego dla wieku22. Możliwość przetwarzania zarówno skanów CT, jak i MRI oraz możliwość dostosowania pośrednich i docelowych szablonów mózgu sprawiają, że RegLSM jest wysoce odpowiednim narzędziem do przetwarzania obrazów w LSM. Cały proces przygotowania i segmentacji skanów CT/MRI, rejestracji do szablonu mózgu oraz korekt ręcznych (jeśli są wymagane) opisano w następnej sekcji.

Rysunek 1: Schematyczna ilustracja koncepcji mapowania objawów w zależności od zmian ogniskowych w oparciu o woksele (voxel-based lesion-symptom mapping). Górna część przedstawia etapy wstępnego przetwarzania obrazów mózgu, składające się z segmentacji zmiany (w tym przypadku ostrego udaru niedokrwiennego), a następnie rejestracji do szablonu mózgu (w tym przypadku szablonu MNI-152). Poniżej przedstawiono fragment zarejestrowanej binarnej mapy zmian tego samego pacjenta w formie siatki 3D, gdzie każda kostka reprezentuje jeden woksel. Po połączeniu z mapami zmian 99 innych pacjentów generowana jest nakładkowa mapa zmian (lesion overlay map). Dla każdego woksela przeprowadzany jest test statystyczny w celu określenia związku między obecnością zmiany a wynikami funkcji poznawczych. Przedstawiony tutaj test chi-kwadrat jest jedynie przykładem; można zastosować dowolny test statystyczny. Zazwyczaj testuje się setki tysięcy wokseli w całym mózgu, a następnie przeprowadza się korekcję dla wielokrotnych porównań. Kliknij tutaj, aby wyświetlić większą wersję tego rysunku.