Modele ksenoprzeszczepów pochodzących od pacjentów (PDX) oraz genetycznie modyfikowane modele myszy do przeszczepu wiernie odwzorowują ludzką chorobę i są preferowanymi modelami do podstawowych i translacyjnych badań nad rakiem piersi. W tym miejscu opisano metodę ortotopowego przeszczepiania fragmentów guza piersi do poduszeczki tłuszczowej sutka w celu zbadania biologii guza i oceny odpowiedzi na lek.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Ortotopowe przeszczepy guzów piersi jako modele przedkliniczne raka piersi
* These authors contributed equally
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Modele przedkliniczne, które wiernie odwzorowują heterogeniczność guza i odpowiedź terapeutyczną, są kluczowe dla translacyjnych badań nad rakiem piersi. Unieśmiertelnione linie komórkowe są łatwe w hodowli i modyfikacji genetycznej w celu zbadania mechanizmów molekularnych, jednak selektywna presja ze strony hodowli komórkowej często prowadzi z czasem do zmian genetycznych i epigenetycznych. Modele ksenoprzeszczepów pochodzących od pacjentów (PDX) wiernie odwzorowują heterogeniczność i reakcję na leki w ludzkich nowotworach piersi. Modele PDX wykazują stosunkowo krótkie opóźnienie po przeszczepie ortotopowym, co ułatwia badanie biologii guza piersi i odpowiedzi na leki. Genetycznie modyfikowane modele myszy do przeszczepu pozwalają na badanie odporności guza piersi. Obecny protokół opisuje metodę ortotopowego przeszczepiania fragmentów guza piersi do poduszeczki tłuszczowej sutka, a następnie leczenia farmakologicznego. Te modele przedkliniczne dostarczają cennych podejść do badania biologii guza piersi, odpowiedzi na leki, odkrywania biomarkerów i mechanizmów oporności na leki.
Wprowadzenie
Większość zgonów z powodu raka piersi można przypisać nawracającej chorobie, która jest oporna na konwencjonalne terapie1,2. Niejednorodność między i wewnątrz guza raka piersi przyczynia się do oporności na leczenie. Co więcej, niejednorodność guza może mieć wpływ na dokładne rokowanie i stanowić wyzwanie w leczeniu choroby3,4. Identyfikacja predykcyjnych biomarkerów odpowiedzi znacznie poprawi wyniki kliniczne pacjentek z rakiem piersi. Mimo że większość typów raka piersi to immunologicznie "zimne" nowotwory, które prawdopodobnie nie reagują na immuno....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Wszystkie protokoły z wykorzystaniem zwierząt zostały sprawdzone i zatwierdzone przez Instytucjonalny Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt (IACUC). Fragmenty guza, o wielkości około 1−2mm3, pochodzą z żywotnie zamrożonego materiału uzyskanego z ksenoprzeszczepu pochodzącego od pacjenta i zaawansowanych modeli in vivo w Baylor College of Medicine.
1. Przygotowanie kriokonserwowanych fragmentów guza sutka do przeszczepu
- Przenieś kriowial z fragmentami guza z ciekłego azotu do łaźni wodnej o temperaturze 37 °C.
- Mieszaj kriowial, od czasu do czasu delikatnym ruchem podczas rozmrażania.
- Po rozmroże....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Rysunek 1 przedstawia sprzęt (Rysunek 1A) oraz kluczowe procedury (Rysunek 1B) transplantacji ortotopowej. Rysunek 2 przedstawia charakterystykę przeszczepionego guza PDX (MC1). Fragmenty guza (1 mm3) modelu MC1 przeszczepiono do 4. poduszki tłuszczowej myszy SCID/Beige. Po miesiącu średnia wielkość guza osiągnęła około 350 mm.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Aby zmniejszyć różnice we wzroście guza u zwierząt, konieczne jest pocięcie tkanki nowotworowej na fragmenty o wielkości 1 mm3 do przeszczepu. Modele, które rosną z tkanką miękką, są trudniejsze w obróbce, a fragmenty guza muszą być nieco większe (1−2 mm3). Umieszczając tkankę w kieszeni poduszeczki tłuszczowej sutka, należy uważać, aby nie podzielić tkanki na wiele części, ponieważ spowoduje to powstanie wielu małych guzów lub guzów o dziwnym kształcie.
Ponadto, Do Przes.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
MTL jest założycielem komandytariusza w StemMed, Ltd. oraz założycielem i menedżerem w StemMed Holdings, jej komplementariuszu. MTL jest założycielem i udziałowcem Tvardi Therapeutics, Inc. LED jest opłacanym pracownikiem StemMed, Ltd.
Podziękowania
Ta praca była wspierana przez National Institutes of Health (R37CA228304 i R01HL146642 do Xi Chen, CA148761 do Jeffreya M. Rosena), Departament Obrony USA (W81XWH-19-1-0524 do Xi Chen, W81XWH-19-1-0035 do Xiangdong Lv), American Cancer Society (RSG-18-181-01-TBE do Xi Chen) oraz Cancer Prevention and Research Institute of Texas (RR150009 CPRIT Scholar in Cancer Research Award dla Xi Chena), Rdzeń Ksenoprzeszczepu Pochodzącego od Pacjenta i Zaawansowanych Modeli In Vivo w Baylor College of Medicine (finansowanie z RP170691 CPRIT Core Facility Award i NCI-CA125123 P30 Cancer Center Support Grant).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| 1 mg/ml Buprenorfina-SR | ZooPharm (przez weterynarzy BCM) | Sterylna | |
| strzykawka 26G | BD | 148232E | Sterylny |
| peeling betadynowy | Fisher | 19-027132 | |
| Waciki bawełniane | VWR International Laboratory | 89031-272 | Sterylny |
| DMEM | Fisher | MT 10-013-CM | Sterylny |
| elektryczny Golarka | Oster | 78005-050 | |
| Sterylizator koralików szklanych (Germinator) | Sklep chirurgiczny Roboz | DS-401 | |
| Smar maść okulistyczna | Akorn Animal Health | 17478-062-35 | |
| Kleszcze do mikropreparacji; Ząbkowane, kątowe (zwykłe kleszcze) | Sklep chirurgiczny Roboz | RS-5139 | Sterylne |
| nożyczki sprężynowe do mikropreparowania (obcinacz do poduszek tłuszczowych) | Sklep chirurgiczny Roboz | RS-5658BT | Sterylne |
| mikrokleszcze (kleszcze do umieszczania tkanek) | Sklep chirurgiczny | Roboz RS-5069 | Sterylna |
| szalka Petriego | Fisher | 08-757- 100D | Sterylna |
| sterylna serweta | Sai Technologia infuzyjna | PSS-SD1 | Sterylne |
| nożyczki chirurgiczne | Sklep chirurgiczny | Roboz RS-5960 | Sterylne |
| kleszczyki do tkanek (kleszczyki do pazurów) | Sklep chirurgiczny Roboz | RS-5158 | Sterylny |
| aplikator do klipsów do ran | BD Autoclip Wound System | 01-804 | Sterylny |
| do usuwania klipsów do ran | BD Autoclip Wound System | 01-804-15 | Sterylny |
| Klipsy do ran | BD Autoclip Wound System | 01-804-5 | Sterylne |
Bibliografia
- Waks, A. G., Winer, E. P. Breast Cancer Treatment: A Review. JAMA. 321 (3), 288-300 (2019).
- Harbeck, N., et al. Breast cancer. Nature Reviews Disease Primers. 5 (1), 66(2019).
- Harbeck, N., Salem, M., Nitz, U., Gluz, O., Liedtke, C.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
