Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Strategie moksyterapii dla myszy

1.7K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/63119

⸱

7 stycznia 2022

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Traditional Chinese Medicine, Sichuan Provincial People's Hospital, University of Electronic Science and Technology of China, 2Chinese Academy of Sciences Sichuan Translational Medicine Research Hospital, 3Acupuncture and Tuina School, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 4Department of Pharmacy Service, Hospital of Chengdu University of Traditional Chinese Medicine, 5Department of Acupuncture, Southwest Medical University Affiliated Traditional Chinese Medicine Hospital, 6Department of Acupuncture, Chongqing Traditional Chinese Medicine Hospital

* These authors contributed equally

W tym artykule

Podsumowanie

Obecny protokół opisuje metodę stosowania moksowania u myszy, z korzyściami w postaci zmniejszenia lękliwości myszy, zagwarantowania ich dobrostanu i poprawy efektywności dla badaczy.

Streszczenie

Dziedzina badań nad moksowaniem rozwija się, z szybkim wzrostem liczby publikacji w ostatnich latach. Moxibustion to terapia, która rozpala moksę na skórze człowieka, powodując wzrost temperatury skóry obwodowej i miejscowe zaczerwienienie. Podczas tego zabiegu biorca musi pozostać nieruchomy, aby zapobiec poparzeniom i odsłonić miejsca interwencji w celu łatwej manipulacji; Jednak utrzymanie stałej postawy podczas moksoterapii jest dużym wyzwaniem dla zwierząt. Tak więc manipulowanie moksobinacją u małych zwierząt, takich jak myszy, może prowadzić do wielu trudności dla badaczy. Ponadto niewygodna postawa zwierząt może prowadzić do strachu i odporności na moksowanie, zwiększonego ryzyka obrażeń, zmniejszonego dobrostanu zwierząt i mniej ważnych danych badawczych. Skuteczna i wygodna metoda moksyterapii jest potrzebna do ochrony dobrostanu zwierząt i zminimalizowania niekorzystnego wpływu na wyniki eksperymentalne. Jednak metody moksyterapii są bardzo zmienne i często mają ograniczoną skuteczność. Co ważniejsze, niewygodna postawa moksowa może powodować reakcję stresową, taką jak ta obserwowana z niepokojem, strachem i złością, co może wpłynąć na dane badawcze. Dlatego wymagane są strategie moksoterapii zwierząt, które wyrządzają jak najmniejsze szkody podczas interwencji. Protokół ten wprowadza metodę uwięzi myszy do interwencji moksowania, minimalizując dyskomfort myszy i poprawiając efektywność badania. Podkreślono podstawowe strategie uwiązywania myszy i stosowania moksybusji, a także opisano strukturę instrumentu do uwiązywania.

Wprowadzenie

Moxibustion to zewnętrzna metoda stosowana w tradycyjnej medycynie chińskiej1. Jest szeroko stosowany od wieków jako środek do utrzymywania sprawności oraz zapobiegania i leczenia chorób2,3. Jednak mechanizm moksoterapii pozostaje do wyjaśnienia; W związku z tym ta dziedzina badań rozszerzyła się w ostatnich latach, ponieważ naukowcy badają jej skutki i mechanizmy biologiczne.

Podczas moxibustion, odbiorca musi pozostać nieruchomy, aby osiągnąć najlepsze wyniki4. Moksowanie trwa zazwyczaj 15-30 minut5,6. Z tego powodu manipulacja moksoterapii u zwierząt, zwłaszcza małych zwierząt, takich jak myszy i szczury (korzystna do stosowania w eksperymentach na zwierzętach), stała się dużym wyzwaniem dla badaczy. Większość urządzeń do moksyterapii nadaje się do użytku klinicznego i nie może być stosowana u zwierząt, zwłaszcza u małych zwierząt, takich jak myszy7,8,9. Poza tym, w przeciwieństwie do ludzi, zwierzęta ledwo wykonują polecenia i przez jakiś czas pozostają w równowadze. Stała i niewygodna postawa zwierząt może prowadzić do pasywnych emocji, w tym niepokoju, strachu, złości, nerwowości i oporu wobec leczenia, zwiększając ryzyko urazów, zmniejszając dobrostan zwierząt i powodując mniej ważne dane badawcze10. Aby rozwiązać ten problem, w poprzednich badaniach, środki znieczulające były stosowane przez dłuższy czas podczas eksperymentów na zwierzętach obejmujących zewnętrzne terapie tradycyjnej medycyny chińskiej, w tym badania nad akupunkturą, moksyplastrą i masażem11,12,13. Biorąc jednak pod uwagę, że warunki fizyczne zmieniają się wraz ze znieczuleniem, a w większości przypadków klinicznych moksowanie jest podawane osobom w stanach przytomności, znieczulenie może mieć wpływ na autentyczność danych badawczych. Dlatego metoda świadomego i wygodnego uwiązywania zwierząt staje się wyzwaniem. Aby rozwiązać te problemy techniczne, wprowadzono specjalistyczne urządzenia do moksowania myszy. Protokół ten zapewnia metodę uwięzi, która pomoże naukowcom w przeprowadzaniu zabiegu moksyterapii na zwierzętach, pozwalając zwierzętom pozostać stabilnym, świadomym i wygodnym.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Wszystkie eksperymenty zostały przeprowadzone zgodnie z Przewodnikiem National Institutes of Health dotyczącym opieki i użytkowania zwierząt laboratoryjnych i zostały zatwierdzone przez Komitet ds. Opieki i Użytkowania Zwierząt Uniwersytetu w Chengdu. Opieka i utrzymanie zwierząt w laboratorium były wykonywane zgodnie z Bibliografia14,15. Do testu wykorzystano dorosłe samce myszy C57BL/6J o wadze 20-25 g. Wszystkie myszy utrzymywano w 12-godzinnym cyklu światło/ciemność w temperaturze 24 °C i wilgotności 40%-50%, ze swobodnym dostępem do pożywienia i wody. Poniższy protokół przedstawia procedury moksyterapii w typowych warunkach laboratoryjnych.

1. Przygotowanie sprzętu

  1. Tethering myszy
    1. Przygotuj urządzenie do uwięzi myszy składające się z pionowej płyty, pionowej podstawy płyty i wsporników wykonanych z drewna.
      1. Zbuduj stały korpus za pomocą prostej drewnianej szyny (długość: 30 cm x szerokość: 3 cm x wysokość: 3 cm) i przymocuj stały pasek na rzep (który składa się z dwóch stron: strony haczykowej (4 cm x 3 cm) i strony pętelkowej (10 cm x 3 cm)), aby umożliwić wiązanie korpusu myszy przy zachowaniu elastyczności (patrz Tabela materiałów).
      2. Użyj pistoletu do klejenia, aby przymocować stronę haczyka po prawej stronie drewnianej szyny i przymocuj 1/4 długości strony pętli po lewej stronie.
    2. Umieść mysz na stałym łóżku i użyj stałego paska na rzep, aby przywiązać tułów myszy.
      UWAGA: Upewnij się, że pas mocujący nie jest wystarczająco napięty, aby wywierać nacisk na serce, co może doprowadzić do śmierci myszy. Przywiąż mysz luźno, ale mocno.
    3. Użyj taśmy, aby przymocować dolne/górne kończyny po obu stronach drewnianej szyny i przymocuj ogon do powierzchni drewnianej szyny.
  2. Przygotowanie stelaża na łóżko pod mysz
    UWAGA: Stojak składa się z pionowej drewnianej płyty, drewnianej podstawy i drewnianych wsporników. Wspornik składa się z kawałka stali nierdzewnej w kształcie litery L, który zapewnia podparcie dla każdego łóżka myszy.
    1. Przymocuj pionową płytkę do płyty podstawy i utwórz kwadratowe rowki w płycie podstawy, aby włożyć drewniane patyczki używane jako przegrody (Rysunek 1).
    2. Przygotuj przezroczystą, plastikową osłonę głowy, jeśli myszom podaje się moksoterapię nad głową.
      1. Użyj strzykawki o pojemności 1000 ml i wyjmij igłę oraz pręt rdzeniowy. Za pomocą narzędzia tnącego lub noża przeciąć osłonę strzykawki na pół.
      2. Wybierz dowolną stronę osłonki strzykawki, odetnij głowę i ogon, a środkową część (długość: 4 cm) odłóż na bok jako osłonę głowy dla myszy.
      3. Wywierć otwór (1 cm) na środku osłony strzykawki za pomocą wiertarki i umieść w nim patyczek do moksy. Umieść nakrycie głowy na głowie myszy, aby ograniczyć ruchy głowy i chronić ją przed zapaloną moksy.
    3. Przymocuj dwa równoległe drewniane paski (długość: 7 cm x szerokość: 1 cm) i poziomą poprzeczkę (długość: 7,5 cm x szerokość: 1 cm) do końca głowy łóżka myszy, jeśli myszom podaje się moksyterapię na przednie kończyny (Rysunek 2).
      UWAGA: Odstęp między każdym równoległym drewnianym paskiem a łożem myszy powinien wynosić 1 cm. Liczbę wsporników i wysokość płyt pionowych można określić na podstawie wymagań doświadczalnych. Te kroki należy wykonywać delikatnie, aby nie przestraszyć myszy. Pamiętaj, aby zapewnić myszom trening adaptacyjny przez 1 tydzień przed eksperymentem.
  3. Przygotowanie uchwytu na kij do moksoterapii
    1. Przygotuj uchwyt na patyczek do moksyterapii składający się z magnetycznego metalowego prostokąta (długość: 30 cm), podstawy wspornika (długość: 5 cm x szerokość: 5 cm x wysokość: 2 cm) i drewnianych kostek (długość: 3 cm x szerokość: 1,5 cm x wysokość: 1 cm), każda z otworem (średnica: 0,55 cm) pośrodku, w którym można umieścić patyczek do moksy (patrz tabela materiałów).
    2. Przymocuj płaski, cienki magnes (długość: 3 cm × szerokość: 1,5 cm, grubość: 0,2 cm) z jednej strony każdej kostki. Magnetyczne przyciąganie pomiędzy kostkami z patyczkami do moksy a uchwytem umożliwia regulację wysokości patyczków do moksy.
      UWAGA: Upewnij się, że bieguny magnetyczne magnesów sześciennych znajdują się naprzeciwko bieguna magnesu uchwytu.
  4. Aby zarejestrować początek i koniec procedury moksyfikacji, umieść urządzenie do pomiaru czasu (patrz Tabela materiałów) w pobliżu urządzenia do uwięzi myszy, gdzie można je łatwo odczytać.
  5. Używaj gołej lub cienkiej dłoni w rękawiczce podczas trzymania i wiązania myszy. Dłoń w cienkiej rękawiczce jest również skuteczna podczas zabiegu moksyterapii.

2. Procedura moksyterapii

  1. Załóż rękawice laboratoryjne. Przed zabiegiem moksyterapii należy ogolić sierść za pomocą golarki mysiej w miejscu moksybulacji, aby odsłonić akupunkturę.
  2. Włóż patyczki do moksy (o średnicy 0,5 cm i długości 10 cm) do uchwytu na patyczek do moksyterapii (który składa się z magnetycznego metalowego prostokąta, podstawy wspornika i drewnianych kostek z otworami w środku do wkładania patyczków do moksy, a jeden uchwyt na kij może pomieścić tylko jeden patyczek do moksy, krok 1.3).
  3. Aby ustalić temperaturę moksybinacji, podłącz cyfrowy detektor termiczny w punkcie akupunkturowym, aby monitorować zmiany temperatury.
  4. Uruchom minutnik i zapal patyczek do moksy; ustal lub kontroluj odległość między skórą punktu akupunkturowego a oświetlonym końcem patyczka do moksy w zależności od zmian temperatury wymaganych w eksperymencie.

3. Jednoczesna moksowanie myszy

UWAGA: Myszy mogą być leczone za pomocą moksowania jako grupa. Stojak na łóżko myszy służy do ustawiania łóżek myszy tak, aby grupa myszy mogła być leczona jednocześnie.

  1. Umieść każde łóżko myszy na stojaku i włóż drewniany patyczek do płyty podstawy, aby chronić myszy przed upadkiem (Rysunek 3).
  2. Włóż patyczki do moksy (o średnicy 0,5 cm i długości 12 cm) do uchwytu na patyczki do moksyterapii na poziomach pokrywających się z każdym łożem myszy. Dostosuj odległość między stojakiem na mysz a uchwytem na kij, a następnie zapal patyczki do moksy.
    UWAGA: Pozwala to na leczenie myszami moksowaniem w zrelaksowanym, komfortowym stanie. Podczas moksolacji upewnij się, że odległość między stojakiem na mysz a uchwytem na kij pozostaje stała dla wszystkich myszy.
  3. Przed modelowaniem przeprowadź reakcje myszy na test progu wycofania termicznego (TWL), aby określić, czy moksowanie będzie skuteczne w przeciwbólu.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Tabela 1 podsumowuje poszczególne czynniki wpływające na reakcje na moksybuscję. Pozytywne wyniki moksybuscji u myszy zostały wykazane za pomocą wielu wskaźników dobrostanu oraz efektów pozytywnych.

Następnie przedstawiono konkretne przykłady wyników uzyskanych, gdy technika moksyterapii została połączona z procedurami wstrzykiwania kompletnego adiuwantu Freunda (CFA). Do oceny skuteczności moksyterapii w łagodzeniu bólu wykorzystano test progu wycofania termicznego (TWL)

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

Technika moksyterapii jest skuteczna w przypadku wielu zaburzeń, takich jak zmęczenie, bezsenność, biegunka i zespół bólowy 20,21,22,23,24,25,26. Dzięki korzyściom płynącym z leczenia moksoterapii w przypadku wielu chorób, mechanizm tej techniki przyciągnął uwagę naukowców. Zastosowanie moks...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy oświadczają, że nie mają nic do ujawnienia.

Podziękowania

Ta praca została wsparta grantami z Narodowej Fundacji Nauk Przyrodniczych Chin (81704187, 8210152562), Sichuan Science and Technology Program (2019YJ0587, 2018JY0482, 2019YJ0329), Sichuan Academy of Medical Sciences i Sichuan People's Hospital Research Fund (2018ZX05), Xinglin Scholars Research Foundation Uniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Chengdu (QNXZ2019034).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
Kompletny adiuwant Freunda (CFA)Sigma-AldrichSF588102
Pistolet do klejeniaDeli Group Co., Ltd.DL5041
Rękawica laboratoryjnaBoci  Co., Ltd53625130323
Magnetyczny metalowy prostokąt (grubość: 0,2 cm)Sitoo Stationery Co., Ltd1007908729
Kij moksyFabryka Hanyi Airong5613
Blacha stalowaRizhan metal materials Co., Ltd1108
Strzykawka (1000 ml )Xinmin Fuda Co., Ltd
TimerBevoza Co., LtdKT003
Pasek na rzepMinnesota Mining and Manufacturing Co., Ltd3MSJ3550
Drewniana kostkaChuang Hing Wood Chip Co., Ltd2581457A Drewniana
szynaChuang Hing Wood Chip Co., Ltd3410968M
Drewniany kijChuang Hing Wood Chip Co., Ltd2785476M
Listwa drewnianaChuang Hing Wood Chip Co., Ltd2374652S
796341

Bibliografia

  1. Ebrary, I. Guide for the care and use of laboratory animals. NIH Publication. 327 (3), 963-965 (2011).
  2. Wang, M., et al. Mechanism of traditional chinese medicine in treating knee osteoarthritis. Journal of Pain Research. 13, 1421-1429 (2020).
  3. Wang, T., Xu, C., Pan, K., Xiong, H. Acupuncture and moxibustion for chronic fatigue syndrome in traditional Chinese medicine: A systematic review and meta-analysis. BMC Complementary and Alternative Medicine. 17 (1), 163(2017).
  4. Zimmermann, M. Ethical guidelines for investigations of experimental pain in conscious animals. Pain. 16 (2), 109-110 (1983).
  5. Zhou, W., et al. Effect of moxibustion and acupuncture on gastric mucosal cell apoptosis and expression of NF-κB, Bcl-2 in chronic atrophic gastritis rats. Acupuncture Research. 46 (4), 284-288 (2021).
  6. Wang, Y., et al. βEffect of moxibustion on -EP and Dyn levels of pain-related indicators in patients with rheumatoid arthritis. Evidence-based Complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2021, 6637554(2021).
  7. Huang, P., et al. Design of moxibustion device for experimental rabbits. Chinese Acupuncture & Moxibustion. 39 (09), 1024-1026 (2019).
  8. Li, M., Sun, Z. An automatic moxibustion box with temperature control. Chinese Acupuncture & Moxibustion. 39 (06), 649-650 (2019).
  9. Luo, Z., Zhang, C., Zhou, M., Chen, C. Manufacture and clinical application of a medical warm moxibustion instrument. Shanghai J Acu-mox. 37 (05), 596-598 (2018).
  10. Liang, Y. L., Sun, Y. H., Sun, Y. H., Sun, L. H., Jiang, H. T. Design and use of rat box for moxibustion experiment. Acupuncture Research. 36 (03), 224(2011).
  11. Meng, J., Fu, W., Zhu, G., Song, L. Effect of acupuncture on coronary collateral circulation function in dogs with experimental myocardial infarction. Acupuncture Research. 3 (1), 196-197 (1986).
  12. Tan, D. Experimental study on the effect of moxibustion at Neiguan point on the content of serum free fatty acid (FFA) in rabbits with acute myocardial ischemia. Liaoning Journal of Traditional Chinese Medicine. 6, 44-45 (1991).
  13. Seo, B., et al. Skeletal muscle regeneration with robotic actuation-mediated clearance of neutrophils. Science Translational Medicine. 13 (614), (2021).
  14. Bielitzki, J. T., Barbee, R. W., Garber, J. Guide for the care and use of laboratory animals. NIH Publication No 85-23(rev). 327 (3), 963-965 (2011).
  15. National Research Council (US), Institute for Laboratory Animal Research. Guide for the Care and Use of Laboratory Animals. National Research Council (US), Institute for Laboratory Animal Research. , National Academies Press. Washington (DC). (1996).
  16. Zuo, C., et al. Ipsi- and contralateral moxibustion generate similar analgesic effect on inflammatory pain. Evidence-based complementary and Alternative Medicine: eCAM. 2019, 1807287(2019).
  17. Poulaki, S., Rassouli, O., Liapakis, G., Gravanis, A., Venihaki, M. Analgesic and anti-inflammatory effects of the synthetic neurosteroid analogue BNN27 during CFA-induced hyperalgesia. Biomedicines. 9 (9), 1185(2021).
  18. Duan, L., et al. Metabolomics analysis on mice with depression ameliorated by acupoint catgut embedding. Frontiers in Psychiatry. 12, 703516(2021).
  19. Wang, J., et al. Protection against doxorubicin-induced cardiotoxicity through modulating iNOS/ARG 2 balance by electroacupuncture at PC6. Oxidative Medicine and Cellular Longevity. 2021, 6628957(2021).
  20. Chen, Y., Gao, X., Sun, C. Pricking and penetrating moxibustion therapy in patients with refractory insomnia: A randomized and controlled clinical trial. Journal of Traditional Chinese Medicine. 38 (5), 754-762 (2018).
  21. Liu, C., et al. Effectiveness and safety of fire-needle moxibustion on insomnia: Protocol for a systematic review and meta-analysis. Medicine. 98 (7), 14509(2019).
  22. Han, K., et al. Moxibustion for treating cancer-related fatigue: A multicenter, assessor-blinded, randomized controlled clinical trial. Cancer Medicine. 10 (14), 4721-4733 (2021).
  23. Bao, C., et al. Effect of mild moxibustion on intestinal microbiota and NLRP6 inflammasome signaling in rats with post-inflammatory irritable bowel syndrome. World Journal of Gastroenterology. 25 (32), 4696-4714 (2019).
  24. Chen, F., et al. Efficacy and safety of moxibustion for chronic low back pain: A systematic review and meta-analysis of randomized controlled trials. Complementary Therapies in Clinical Practice. 39, 101130(2020).
  25. Zhang, C., et al. The role of STIM1/ORAI1 channel in the analgesic effect of grain-sized moxibustion on inflammatory pain mice model. Life Sciences. 280, 119699(2021).
  26. Zhao, L., et al. Effectiveness of moxibustion treatment as adjunctive therapy in osteoarthritis of the knee: A randomized, double-blinded, placebo-controlled clinical trial. Arthritis Research & Therapy. 16 (3), 133(2014).
  27. Goldman, N., et al. Adenosine A1 receptors mediate local anti-nociceptive effects of acupuncture. Nature Neuroscience. 13 (7), 883-888 (2010).
  28. Torres-Rosas, R., et al. Dopamine mediates vagal modulation of the immune system by electroacupuncture. Nature Medicine. 20 (3), 291-295 (2014).
  29. Solovchuk, M., Deng, H., Sheu, T. Experimental and numerical study on the temperature elevation in tissue during moxibustion therapy. Evidence-based Complementary and Alternative Medicine:eCAM. 2020, 7514302(2020).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Tagi

Moksoterapia u myszydobrostan zwierz tmetoda przywi zaniainterwencja moksyterapeutycznaunieruchomienie myszyodpowied stresowamyszy do wiadczalneprotok moksyterapiiurz dzenie do przywi zania
Film wkrótce dostępny
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki Korzystania

Zasady

Copyright © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.