Method Article

Test pustej przestrzeni w czasie rzeczywistym

DOI:

10.3791/64621

⸱

February 10th, 2023

 ,  ,  ,  , 
1Renal-Electrolyte Division, Department of Medicine, University of Pittsburgh, 2Department of Cell Biology, University of Pittsburgh

In This Article

Summary

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Ten artykuł opisuje nową metodę badania zachowania myszy podczas mikcji poprzez włączenie monitoringu wideo do konwencjonalnego testu pustego miejsca. Takie podejście dostarcza czasowych, przestrzennych i wolumetrycznych informacji na temat zdarzeń mikcji i szczegółów zachowania myszy podczas jasnych i ciemnych faz dnia.

Abstract

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Normalne zachowanie związane z oddawaniem moczu jest wynikiem skoordynowanej funkcji pęcherza, cewki moczowej i zwieraczy cewki moczowej pod właściwą kontrolą układu nerwowego. Aby zbadać dobrowolne zachowania związane z oddawaniem moczu w modelach mysich, naukowcy opracowali test pustki (VSA), metodę, która mierzy liczbę i obszar plam moczu osadzonych na bibule filtracyjnej wyściełającej podłogę klatki zwierzęcia. Chociaż technicznie prosty i niedrogi, test ten ma ograniczenia, gdy jest stosowany jako test punktu końcowego, w tym brak czasowej rozdzielczości zdarzeń mikcji i trudności w ilościowym określeniu nakładających się plam moczu. Aby przezwyciężyć te ograniczenia, opracowaliśmy monitorowany wideo VSA, który nazywamy VSA W CZASIE RZECZYWISTYM (RT-VSA) i który pozwala nam określić częstotliwość mikcji, ocenić objętość mikcji i wzorce mikcji oraz dokonywać pomiarów w ciągu 6-godzinnych okien czasowych zarówno w ciemnej, jak i jasnej fazie dnia. Metoda opisana w tym raporcie może być zastosowana do szerokiej gamy badań na myszach, które badają fizjologiczne i neurobehawioralne aspekty dobrowolnego oddawania moczu w stanach zdrowotnych i chorobowych.

Introduction

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Magazynowanie moczu i oddawanie moczu są koordynowane przez centralny obwód (ośrodkowy układ nerwowy), który otrzymuje informacje o stanie napełnienia pęcherza przez nerwy miednicy i podbrzusza. Nabłonek dróg moczowych wyściełający drogi moczowe od miedniczki nerkowej do bliższej cewki moczowej tworzy ścisłą barierę dla produktów przemiany materii i patogenów obecnych w moczu. Jest to integralny składnik sieci czuciowej, która wyczuwa i komunikuje stan wypełnienia pęcherza moczowego do leżących poniżej tkanek i nerwów doprowadzających1,2. Przerwanie bariery urotelialnej lub zmiany w szlakach mechanotransdukcji....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Protocol

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Urothelial Piezo1/2 myszy z podwójnym nokautem (Pz1/2-KO, genotyp: Piezo1fl/fl; Piezo2fl/fl; Upk2CRE+/-) i kontrolne (Pz1/2-C, genotyp: Piezo1fl/fl; Piezo2fl/fl; Upk2CRE-/-) zostały wygenerowane we własnym zakresie ze szczepów rodzicielskich uzyskanych z laboratoriów Jax (szczep Piezo1fl/fl # 029213; Szczep Piezo2fl/fl # 027720; Upk2CRE+/- szczep # 029281). W eksperymentach wykorzystano zarówno samice (1,5–3 miesiące i waga 17–20 g), jak i samce (2–4 miesiące i waga 23–29 g). Do eksperymentów z zapaleniem pęcherza moc....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Results

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zachowanie mikcji myszy z nokautem urotelialnym Piezo1/2

Podczas fazy przechowywania cyklu mikcji, przypuszcza się, że nabłonek dróg moczowych wyczuwa napięcie wywierane przez mocz zgromadzony w pęcherzu moczowym i przekształca ten bodziec mechaniczny w reakcje komórkowe, takie jak uwalnianie surowiczego ATP1,3. Wcześniej wykazaliśmy, że mechanicznie aktywowane kanały PIEZO1 i PIEZO2 są wyrażane w mysim uroth.......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Discussion

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Zastosowanie monitoringu wizyjnego jest opłacalną modyfikacją, która ma kilka zalet w porównaniu z klasycznym VSA. W klasycznym VSA, który jest zwykle używany jako test punktu końcowego, trudno jest odróżnić nakładające się na siebie puste miejsca. Nie jest to błahy problem, ponieważ myszy mają tendencję do wielokrotnego oddawania moczu w tym samym obszarze, gdy test jest przedłużony o kilka godzin, zwykle w rogach klatki. Tak więc pierwszą zaletą RT-VSA jest to, że badacz może łatwo zidentyfikować poszczególne miejsca, .......

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Disclosures

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy nie mają nic do ujawnienia.

Acknowledgements

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Praca ta była wspierana przez R01DK119183 grantu NIH (dla GA i MDC), nagrodę za projekt pilotażowy za pośrednictwem P30DK079307 (dla MGD), nagrodę American Urology Association Career Development i grant Fundacji Winters (dla NM) oraz przez Cell Physiology and Model Organisms Kidney Imaging Cores z Pittsburgh Center for Kidney Research (P30DK079307).

....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Materials

List of materials used in this article
NameCompanyCatalog NumberComments
1,00" X 1,00 cala Profil z rowkiem teowym - cztery otwarte rowki teowe –   cięte do 10 cali80/201010Ilość: 20
1.00" X 1,00 cala Profil z rowkiem teowym - cztery otwarte rowki teowe –   cięte do 12 cali80/201010Ilość: 6
1.00" X 1,00 cala Profil z rowkiem teowym - cztery otwarte rowki teowe –   cięte do 40 cali80/201010Ilość: 4
1.00" X 1,00 cala Profil z rowkiem teowym - cztery otwarte rowki teowe – cięte do 14,75 cala80/201010Ilość: 12
1,00" X 1,00 cala Profil z rowkiem teowym - cztery otwarte rowki teowe – Przyciąć do 32 cali80/201010Ilość: 5
1/4-20 Podwójnie wsuwana ekonomiczna nakrętka teowa80/203280Ilość: 16
1/4-20 Potrójnie wsuwana ekonomiczna nakrętka teowa80/203287Ilość: 18
10 i 25 Seria 2 Otwór - 18mm Kątownik narożny z rowkiem wewnętrznym z podwójnym wspornikiem80/2014061Ilość: 6
10 Otwór serii 3 - prosta płaska płyta80/204118Ilość: 8
10 Seria 5 Otwór - Płaska płyta "L"80/204081Ilość: 8
10 Seria 5 Otwór - Płaska płyta "T"80/204080Ilość: 8
10 Seria 5 Otwór - Trójnik Płaski80/204140Ilość: 2
Standardowy zawias podnoszony serii 10 - prawy80/202064Ilość: 2
10 do 15 Seria 2 otwory - Lite Transition Inside Corner Bracket80/204509Ilość: 6
24-calowych lamp UVADJ Products LLCT8-F20BLB24Ilość: 2
Żarówka 20 W & ndash; 24" Długość fali: 365nm
Akrylowy arkusz lustraProfesional PlasticsIlość: 1
82,5 cm x 26,5 cm
Akrylowy arkusz lustraProfesional PlasticsIlość: 2
26,5 cm X 30,5 cm
Akrylowy arkusz lustraProfesional PlasticsIlość: 2
82,5 cm x 30,5 cm
Poliwęglan AR (odporność na promieniowanie UV)80/2065-2641Ilość: 2
4,5 mm gruby, przezroczysty, 38,5 cm x 26,5 cm
Poliwęglan AR (odporny na promieniowanie UV)80/2065-2641Ilość: 4
4,5 mm gruby, przezroczysty, 38,5 cm x 21,5 cm
Poliwęglan AR (odporny na promieniowanie UV)80/2065-2641Ilość: 4
4,5 mm gruby, przezroczysty, 26,5 cm x 21,5 cm
Poliwęglan AR (odporny na promieniowanie UV)80/2065-2641Ilość: 4
Grubość 4,5 mm, przezroczysty 37,5 cm x 23,9 cm
Poliwęglan AR (odporność na promieniowanie UV)80/2065-2641Ilość: 4
Grubość 4,5 mm, przezroczysty, 24,4 cm x 23,9 cm
Bibuła chromatograficzna (cienki papier)  Bibuła Thermo Fisher Scientific57144
Cosmos (gruby papier)Blick Art Materials10422-1005
ExcelMicrosoft Corporation
GraphPad PrismGraphPad SoftwareWersja 9.4.0oprogramowanie do tworzenia wykresów i statystyk
ImageJ FIDŻINIH
ParafilmMerckfolia przezroczysta
Oprogramowanie Quick Time Player 10.5 Odtwarzacz multimedialnyApple
Szpiegbezpieczeństwa Oprogramowaniesystem oprogramowania do nadzoru wideo
Standardowe zapięcie końcowe, 1/4-2080/203381Ilość: 80
Akryl przepuszczający promieniowanie UVSpartechPolycast Solacryl SUVTIlość: 2
38,5 cm x 26,5 cm 
Żel wodny: HydroGelClearH2O   70-01-5022(https://www.clearh2o.com/product/hydrogel/)
Kamerka internetowaLogitechC930eIlość: 4
Ben

References

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Dalghi, M. G., Montalbetti, N., Carattino, M. D., Apodaca, G. The urothelium: life in a liquid environment. Physiological Reviews. 100 (4), 1621(2020).
  2. de Groat, W. C., Griffiths, D., Yoshimura, N. Neural control of the lower urinary tract. Comprehensive Physiology. 5 (1), 327(2....

Access restricted. Please log in or start a trial to view this content.

Reprints and Permissions

Request permission to reuse the text or figures of this JoVE article

Request Permission

Tags

Void Spot AssayReal Time VSAVoiding BehaviorMouse ModelsUrine Spot AnalysisVoluntary MicturitionVideo MonitoringBladder FunctionUrethral SphincterCyclophosphamide Treatment

Related Articles