W tym badaniu opracowano metodę ułatwiającą przenoszenie ustawień eksperymentalnych i szablonów analizy między dwoma cytometrami przepływowymi w dwóch laboratoriach do wykrywania limfocytów u dzieci zaszczepionych japońskim zapaleniem mózgu. Metoda standaryzacji eksperymentów z cytometrem przepływowym pozwoli na efektywne prowadzenie projektów badawczych w wielu ośrodkach.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Standaryzacja transferu między laboratoriami między cytometrami przepływowymi w celu wykrywania limfocytów u dzieci zaszczepionych japońskim zapaleniem mózgu
* These authors contributed equally
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Coraz więcej laboratoriów musi zbierać dane z wielu cytometrów przepływowych, szczególnie w przypadku projektów badawczych prowadzonych w wielu ośrodkach. Wyzwania związane z używaniem dwóch cytometrów przepływowych w różnych laboratoriach obejmują brak znormalizowanych materiałów, problemy ze zgodnością oprogramowania, niespójności w konfiguracji przyrządów oraz stosowanie różnych konfiguracji dla różnych cytometrów przepływowych. Aby ustanowić standaryzowany eksperyment cytometrii przepływowej w celu osiągnięcia spójności i porównywalności wyników eksperymentalnych w wielu ośrodkach, opracowano szybką i wykonalną metodę standaryzacji do przenoszenia parametrów między różnymi cytometrami przepływowymi.
Metody opracowane w tym badaniu pozwoliły na transfer ustawień eksperymentalnych i szablonów analizy między dwoma cytometrami przepływowymi w różnych laboratoriach do wykrywania limfocytów u dzieci zaszczepionych japońskim zapaleniem mózgu (JE). Stałą intensywność fluorescencji uzyskano między dwoma cytometrami za pomocą standardowych kulek fluorescencyjnych w celu ustalenia ustawień cytometru. Porównywalne wyniki uzyskano w dwóch laboratoriach z różnymi typami instrumentów. Korzystając z tej metody, możemy ustandaryzować analizę w celu oceny funkcji immunologicznej dzieci zaszczepionych JE w różnych laboratoriach za pomocą różnych instrumentów, zmniejszyć różnice w danych i wynikach między cytometrami przepływowymi w wielu ośrodkach i zapewnić wykonalne podejście do wzajemnej akredytacji wyników laboratoryjnych. Metoda standaryzacji eksperymentów z cytometrem przepływowym zapewni efektywną realizację projektów badawczych w wielu ośrodkach.
Wprowadzenie
Standaryzacja cytometrii przepływowej jest przydatna dla porównywalności wyników uzyskanych z różnych cytometrów w różnych laboratoriach i ośrodkach badawczych oraz sprzyja wzajemnemu uznawaniu wyników w celu poprawy efektywności pracy. Coraz więcej scenariuszy wymaga standaryzacji. Podczas procesu opracowywania leku ważna jest standaryzacja cytometrii przepływowej, ponieważ opracowany i zwalidowany test będzie wspierał cały proces opracowywania leku, od analizy przedklinicznej po kliniczną. Metody cytometrii przepływowej są często przenoszone między przemysłem farmaceutycznym a współpracującymi laboratoriami1. Ponadto niezbędne jest uzyskanie ....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Badanie zostało zatwierdzone przez Komitet Etyki Szpitala Dziecięcego w Pekinie, Stołecznego Uniwersytetu Medycznego (Numer zatwierdzenia: 2020-k-85). Zrezygnowano ze świadomej zgody ludzi, ponieważ w tym badaniu wykorzystano tylko próbki szczątkowe po testach klinicznych. W badanie zaangażowane są dwa laboratoria. Laboratorium transferowe to miejsce, w którym opracowano znormalizowaną metodę przy użyciu jednego cytometru przepływowego. Cytometr w tym laboratorium jest dalej określany jako cytometr A. Laboratorium metody badawczej to laboratorium, które otrzymuje metody przy użyciu innego cytometru przepływowego, a cy....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Rysunek 1 przedstawia ogólny arkusz szablonu wartości docelowych dla jasnych kulek kalibracyjnych CST. Na wykresie FSC/SSC wyznaczono bramkę wielokąta w celu wyselekcjonowania jasnych kulek CST. Dla jasnych kulek CST uzyskano histogramy dla 10 kanałów fluorescencji: FITC, PE, BB700, PE-Cy7, APC, R718, APC-H7, BV421, V500 oraz BV605. Wartość docelowa dla każdego parametru została przedstawiona jako mediana w obrębie bramek histogramów w Tabeli 2. Zrzuty ekranu szablonów i ust.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Immunofenotypowanie podzbiorów limfocytów krwi obwodowej może pomóc w zrozumieniu zmian w odporności nabytej za pośrednictwem komórek po szczepieniu u dzieci. W zastosowaniach klinicznych zdarzają się nieoczekiwane sytuacje, takie jak niemożność wykrycia próbek w odpowiednim czasie lub wymiana cytometru przepływowego; Dlatego potrzebne są szybkie, znormalizowane metody, które ułatwiają transfery między cytometrami przepływowymi w różnych laboratoriach 9,10,11
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy deklarują brak konfliktu interesów.
Podziękowania
RW był wspierany przez Beijing Natural Science Foundation, Chiny (nr 7222059), National Natural Science Foundation of China (nr 82002130), XZ był wspierany przez CAMS Innovation Fund for Medical Sciences (nr 2019-I2M-5-026).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| BD CompBeads Anti-Mouse Ig, κ/Zestaw kompensacji cząstek kontroli negatywnej | Kompensacja | 552843 | |
| BD FACSCanto BD FACSCanto | cytometria przepływowa A w laboratorium transferowym | ||
| BD FACSDiva CS& T Koraliki badawcze | BD | 655051 | definiowania linii bazowej cytometru przepływowego i śledzenia wydajności cytometru |
| BD Horizon BV421 Mysz Anti-Human CD127 | BD | 562436 | Przeciwciało fluorescencyjne |
| BD Horizon BV605 Mysz Anti-Human CD27 | BD | 562656 | Przeciwciało fluorescencyjne |
| BD Horizon V500 Mysz Anti-Human CD45 | BD | 560777 | Przeciwciało fluorescencyjne |
| BD LSRFortessa | BD LSRFortessa | Cytometria przepływowa B w laboratorium metod badawczych | |
| BD OptiBuild BB700 Mysz Anti-Human CD19 | BD | 745907 | Przeciwciało fluorescencyjne |
| BD OptiBuild R718 Mysz Anti-Human CD8 | BD | 751953 | Przeciwciało fluorescencyjne |
| BD Pharmingen APC Mysz Anti-Human CD45RA | BD | 550855 | Przeciwciało fluorescencyjne |
| BD Pharmingen APC-H7 Mysie przeciwciało anty-ludzkie CD3 | BD | 560176 | Fluorescencyjne |
| BD Pharmingen FITC Mysz Anti-Human CD4 | BD | 566320 | Przeciwciało fluorescencyjne |
| BD Pharmingen PE Mysz Anti-Human CD25 | BD | 555432 | Przeciwciało fluorescencyjne |
| BD Pharmingen PE-Cy7 Mysie przeciwciało anty-ludzkie IgD | BD | 561314 | fluorescencyjne |
| Brilliant Staining Buffer Plus | BD | 566385 | Wirówka do bufora do barwienia |
| Eppendorf | 5810 | ||
| Probówka wirówkowa | BD Falcon | BD-35209715 | Probówka wirówkowa 15 ml |
| CS& T IVD Koraliki | BD | 662414 | standardowe kulki do ustawiania ustawień cytometru w różnych cytometrach przepływowych |
| Roztwór lizujący 10x Koncentrat | BD | 349202 | liza czerwonych krwinek |
| Sól fizjologiczna buforowana fosforanami (PBS) | Gibco | 10010-023 | PBS |
| Probówka okrągłodenna | BD Falcon | 352235 | 5 ml |
Bibliografia
- Cabanski, M., et al. Flow cytometric method transfer: Recommendations for best practice. Cytometry Part B. Clinical Cytometry. 100 (1), 52-62 (2021).
- Le Lann, L., et al. Standardization procedure for flo....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
