Ten protokół opisuje model krążenia pozaustrojowego (CPB) u noworodków świń, z zatrzymaniem krążenia i krążenia jako narzędzie do badania poważnych uszkodzeń mózgu i innych powikłań wtórnych do CPB.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
* These authors contributed equally
Ten protokół opisuje model krążenia pozaustrojowego (CPB) u noworodków świń, z zatrzymaniem krążenia i krążenia jako narzędzie do badania poważnych uszkodzeń mózgu i innych powikłań wtórnych do CPB.
Wrodzona wada serca (CHD) jest najbardziej rozpowszechnioną wadą wrodzoną, dotykającą około miliona urodzeń rocznie na całym świecie. Kompleksowe badanie tej choroby wymaga odpowiednich i zwalidowanych modeli zwierzęcych. Prosięta są powszechnie wykorzystywane do badań translacyjnych ze względu na ich analogiczną anatomię i fizjologię. Praca ta miała na celu opisanie i walidację modelu krążenia pozaustrojowego (CPB) z zatrzymaniem krążenia i krążenia (CA) u noworodków z prosiętami jako narzędzia do badania poważnych uszkodzeń mózgu i innych powikłań kardiochirurgicznych. Oprócz dołączenia listy materiałów, praca ta stanowi mapę drogową dla innych badaczy w celu zaplanowania i wykonania tego protokołu. Po tym, jak doświadczeni praktycy przeprowadzili kilka prób, reprezentatywne wyniki modelu wykazały 92% wskaźnik sukcesu, przy czym niepowodzenia przypisano małym rozmiarom prosiąt i wariantowi anatomii naczynia. Co więcej, model pozwolił praktykom na wybór spośród szerokiej gamy warunków eksperymentalnych, w tym różnych czasów CA, zmian temperatury i interwencji farmakologicznych. Podsumowując, metoda ta wykorzystuje materiały łatwo dostępne w większości warunków szpitalnych, jest wiarygodna i powtarzalna oraz może być szeroko stosowana w celu wzbogacenia badań translacyjnych u dzieci poddawanych operacjom serca.
Wrodzona wada serca (CHD) jest najbardziej rozpowszechnioną wadą wrodzoną, której dotyczy około miliona urodzeń rocznie na całym świecie1. Chociaż nowoczesne postępy w kardiochirurgii i leczeniu intensywnej terapii poprawiły wskaźniki śmiertelności, choroby współistniejące są nadal niezwykle powszechne2,3,4,5. Nieprawidłowości neurorozwojowe, w tym upośledzenie funkcji poznawczych i motorycznych, a także trudności w uczeniu się, są zgłaszane u około 25%-50% tych pacjentów6,7,8. Wykazano, że zabiegi chirurgiczne w pierwszych dniach życia, zwłaszcza te, które wymagają zatrzymania krążenia i krążenia (CA), zwiększają zachorowalność9. Zmiany hemodynamiczne podczas operacji mogą mieć istotny wpływ na wrażliwy, rozwijający się mózg noworodka. Modele eksperymentalne są niezbędne, aby lepiej zrozumieć pochodzenie tych nieprawidłowości i zbadać strategie neuroprotekcyjne w celu poprawy rokowań u tych pacjentów.
Wykorzystanie modeli zwierzęcych do badania tej populacji zostało szeroko udokumentowane5,10,11,12,13,14. Warto zauważyć, że prosięta stanowią doskonałą opcję, biorąc pod uwagę bliskie przybliżenia w anatomii serca (Rysunek 1), genomie i fizjologii, a także ich stosunkowo większy rozmiar w porównaniu z innymi modelami zwierzęcymi15 (Rysunek 2). Wykorzystanie modeli prosiąt do badania skutków zarówno krążenia pozaustrojowego (CPB), jak i CA zostało już wcześniej opisane. Te eksperymentalne modele zwierzęce są przydatne do badania zmian hemodynamicznych i związanych z nimi powikłań narządowych w tkankach końcowych14,16,17,18,19,20. Modele te zostały opracowane, aby umożliwić naukowcom badanie warunków panujących u ludzi w kontrolowanych warunkach, z elastycznością dla różnych warunków eksperymentalnych. Większość badań donosi o zastosowaniu centralnej kaniulacji, techniki, która wymaga zaawansowanych umiejętności chirurgicznych, wymaga większego wykorzystania zasobów i utrudnia zapewnienie długoterminowego przeżycia. Chociaż wcześniejsze badania udokumentowały wykorzystanie prosiąt w badaniu CPB12,15, niewiele z nich zaproponowało technikę kaniulacji obwodowej.
Ta nowa technika kaniulacji obwodowej jest łatwiejsza, mniej agresywna i bardziej wykonalna w porównaniu z innymi opublikowanymi badaniami19. Co więcej, walidacja tej techniki u noworodków i małych zwierząt jest nowatorska i powinna być rozważona do wykorzystania przez wszystkich badaczy zainteresowanych wykorzystaniem modelu zwierzęcego do badania choroby niedokrwiennej serca i powiązanych z nią chorób współistniejących. Jest to szczególnie odpowiednie dla osób mających dostęp do laboratorium wyposażonego w materiały, zasoby i personel doświadczony w przeprowadzaniu eksperymentów na modelach zwierzęcych.
Podsumowując, głównym celem tego badania jest opisanie i walidacja modelu CPB u noworodków z CA u prosiąt. Protokół ma na celu zbadanie poważnych uszkodzeń mózgu i innych możliwych powikłań operacji CPB w kontrolowanych warunkach z różnymi warunkami eksperymentalnymi. Ta metoda zapewnia model, który można uogólnić, jest wiarygodny i wysokiej jakości, a który może być używany w wielu różnych protokołach eksperymentalnych.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Obecna procedura została zatwierdzona przez Komitet Etyki Eksperymentów na Zwierzętach (CEEA) Centrum Medycyny Porównawczej i Bioimage w Katalonii (CEEA-CMCiB). Rząd Katalonii zatwierdził również protokół eksperymentalny (nr 11652), numer identyfikacyjny pliku FUE-2022-02381434 i numer identyfikacyjny QBXQ3RY3J. Doświadczeni praktycy, w tym certyfikowani lekarze weterynarii zapewniający nadzór i pomoc, przeprowadzili wszystkie eksperymenty. Do badań wykorzystano prosięta (Sus scrofa domestica) w wieku 4-6 dni, o wadze 2,5-3,5 kg. Podjęto próbę zrównoważenia rozkładu płci, aby uniknąć związanych z tym uprzedzeń.
1. Sedacja, intubacja i dostęp
2. Konfiguracja i zalewanie obwodu CPB
3. Operacja i rozpoczęcie CPB
UWAGA: Rysunek uzupełniający 1 przedstawia materiały chirurgiczne wymagane do założenia kaniuli.
4. Zatrzymanie krążenia i krążenia (CA)
5. Pozaustrojowa resuscytacja krążeniowo-oddechowa (eCPR)
6. Opieka pooperacyjna
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
W okresie 6 miesięcy cały protokół został wykonany 12 razy przez interdyscyplinarny zespół lekarzy intensywnej terapii dziecięcej, kardiologów dziecięcych, weterynarzy oraz techników (Rycina uzupełniająca 2 i Rycina uzupełniająca 3).
Rysunek 1 oraz Rysunek 2 przedstawiają oczekiwaną anatomię zwierząt wykorzystanych w niniejszym protokole. Włączone do badania prosięta miały średnio 4,8 dnia (4-6 dni) i...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Pomostowanie krążeniowo-oddechowe jest powszechnie stosowane podczas operacji kardiochirurgicznych u dorosłych, dzieci i noworodków. Opiera się na zmotoryzowanym obwodzie pozaustrojowym i oksygenatorze membranowym, które współpracują ze sobą w celu natlenienia krwi i zapewnienia stabilizacji płuc i serca. Wcześniejsze badania wykazały, że CPB może niekorzystnie wpływać na wiele układów narządowych (nerkowych, mózgowych, płucnych, sercowych, żołądkowo-jelitowych) zarówno u chorych, jak i wcześniej zdrowych pacjentów 22,23...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
Ten projekt otrzymał dofinansowanie z programu Unii Europejskiej Horyzont 2020 w zakresie badań i innowacji na podstawie umowy o grant nr 101017113, Instituto de Salud Carlos III (PI20/00298), Beca Carmen de Torres (Fundació Sant Joan de Déu) oraz Vanderbilt Medical Scholars Program. Dziękujemy wszystkim pracownikom CMCiB, w tym Jordi Grifols, María del Mar Arevalo, Juan Ricardo Gonzalez, Sara Capdevila, Josep Puig i Gemma Cristina Monte Rubi. Szczególne podziękowania kierujemy również do Abrila Culella Camprubí i dr Sergiego Cesara Díaza za ich pomoc w rysunkach anatomicznych.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| 1,5% sewofluoran | Zoetis | 20070289 | |
| rurka dotchawicza 2,5 mm | Henry | Schein 988-1782 | |
| Cewnik 3 Fr do obwodowego dostępu tętniczego | Prodimed | 3872.1 | |
| Cewnik 4 Fr do obwodowego dostępu żylnego | Prodimed | 3872.13 | |
| 6 Francuska kaniula tętnicza dziecięca ECMO | Firma Medtronic | 77206 | |
| 8 Francuska kaniula żylna dziecięca ECMO | Firma Medtronic | 68112 | |
| Adrenaline | B Braun | 469801-1119 | |
| Kleszcze Adson | Instrumenty Allgaier | 08-030-130 | Można zastąpić dowolną markę |
| Mankiet BP | Mindray | ||
| Buprenorfina (0,01 mg/kg) | Richter Pharma | #9004114000537 | |
| Glukonian wapnia (2,25 mmol/10 ml) | B Braun | 570-12606194-1119 | |
| Deksmedetomidyna (0,5-2,0 &mikro; g/kg/min) | Orion farma | GTN 064321000017253 | |
| Dolethol | vetoquinol | #3605870004904 | |
| Dopamina | hikma | A044098010 | |
| Fentanyl (25-200 &mikro; g/kg/min) | Kern Pharma | 756650.2H | |
| Świeża krew świni dawcy Grupa O | Dowolna | ||
| Wymiennik ciepła | Maquet Gmbh & Co | MCP70107.2130 | |
| Heparyna (1350 UI) | ROVI | 641641.1 | |
| Retraktor Irwin | Aesculap | BV104R | Można zastąpić dowolną marką |
| Ketamina (20 mg / kg) | Richter Pharma | #9004114000452 | |
| Smar | Dowolny lubrykant | ||
| Midazolam (0,3 mg / kg) | Serra Pamies | 619627.4 | |
| Kleszczyki do komarów | Aesculap | BH109R | Można zastąpić dowolną markę |
| Kleszczyki igłowe | Aesculap | BM016R | Zamienniki dowolnej marki |
| Normalny sól fizjologiczna (0,9%) | B Braun Fisiovet | 5/469827/0610 | Można zastąpić dowolną markę |
| Plastikowe zaciski do rurek | Achim Schulz-Lauterbach | DBGM | Można zastąpić dowolną marką |
| Chlorek potasu (9 mEq) | B Braun | 3545156 | |
| Propofol (0,5 mg/kg) | Zoetis | 579742.7 | |
| Natłaczacz membranowy Quadrox | Maquet Gmbh & Co | BE-HMOSD 300000 | |
| Termometr doodbytniczy | Dowolny | ||
| system ECMO konsoli RotaFlow | Maquet Gmbh & Co | MCP00703177 | Skalpel systemu ECMO dla noworodków |
| Aesculap | BB074R | Można zastąpić dowolną marką | |
| Wodorowęglan sodu (1 M) | Fresenius Kabi | 634477.4 OH | |
| Nożyczki chirurgiczne | Talmed Inox | 112 | Można zastąpić dowolną markę |
| Szew (3/0 poliwchłanialny) | B Braun Novosyn (R) | 0068030N1 | Dowolna marka może zostać zastąpiona |
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.