Protokół przedstawia szczegółowy proces standaryzacji formuły wywaru i techniki zgłębnika, na przykładzie wywaru z Yiqi Jiedu w mysim modelu kostniakomięsaka. Opisano w nim ochronę zwierząt i poprawiono wiarygodność danych badawczych, dostarczając skutecznych strategii badania skuteczności terapeutycznej i mechanizmów molekularnych formuł wywarowych in vivo.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Strategia zgłębnika dla formuły wywaru tradycyjnej medycyny chińskiej u myszy modelowych kostniakomięsaka
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Formuła wywaru jest najczęściej używaną formą dawkowania w tradycyjnej medycynie chińskiej i stosowaną w praktyce klinicznej od tysięcy lat przez podawanie przezustne, które charakteryzuje się szybkim efektem, łatwym wchłanianiem i zindywidualizowanym leczeniem opartym na specyficznych zespołach pacjentów. Jakość formuły wywaru jest bezpośrednio odpowiedzialna za skuteczność kliniczną tradycyjnej medycyny chińskiej; Dlatego proces standaryzacji formuły wywaru jest ważny, aby uniknąć różnic w jakości wywaru spowodowanych czynnikami subiektywnymi. Tymczasem, ze względu na ograniczenia związane z przeprowadzaniem eksperymentów klinicznych, małe zwierzęta będące nosicielami chorób ludzkich, takie jak myszy, są często wykorzystywane w badaniach medycznych w celu zbadania skuteczności terapeutycznej i kompleksowych mechanizmów różnych interwencji, w tym formuły wywaru dla tradycyjnej medycyny chińskiej. W związku z tym, jako ważna metoda podawania przezustnego, wykwalifikowana technika zgłębnika jest szczególnie ważna, aby uniknąć potencjalnego uszkodzenia przełyku i rozlania leku, co zapewni równą ilość leku podawaną każdemu zwierzęciu modelowemu, prowadząc do dokładnych wyników eksperymentalnych. Ponadto ustandaryzowana metoda przygotowania formuły wywaru i umiejętna strategia gajnikowania są niezbędne do ochrony dobrostanu zwierząt i zminimalizowania liczby wykorzystywanych zwierząt. Tutaj przedstawiliśmy szczegółowy proces standaryzacji formuły wywaru i techniki zgłębnika na przykładzie wywaru Yiqi Jiedu w mysim modelu kostniakomięsaka. Skuteczność oceniano na podstawie objętości guza. Protokół ten zmaksymalizuje ochronę zwierząt i poprawi wiarygodność danych badawczych, zapewniając w ten sposób skuteczne strategie dla przyszłych badań nad skutecznością terapeutyczną i mechanizmami molekularnymi formuły wywaru dla tradycyjnej medycyny chińskiej in vivo.
Wprowadzenie
Formuła wywaru jest najczęściej używaną formą dawkowania tradycyjnej medycyny chińskiej i płynnych leków leczniczych1,2. Formuła wywaru tradycyjnej medycyny chińskiej jest przetwarzana przez dekodację ziół w wodzie po namoczeniu, a następnie filtrowanie w celu odrzucenia osadów.
Ponieważ formuła wywaru może być zindywidualizowana w zależności od potrzeb klinicznych, szczególnie zgodnie z charakterystyką leczenia opartego na dowodach w tradycyjnej medycynie chińskiej, ta forma dawkowania poprzez podanie przezoralne jest stosowana w praktyce klinicznej od tysięcy lat z konkretnymi i niezastąpionymi zaletami3,4. Jakość formuły wywaru jest bezpośrednio związana ze skutecznością kliniczną. Dlatego formuła wywaru musi być przygotowana w oparciu o zasady standardowych metod wywaru, aby zapewnić maksymalną ekstrakcję i ochronę składników aktywnych3. Tymczasem leki gotowe do wywaru są główną formą surowych chińskich ziół stosowanych w praktyce klinicznej; standardy jakości i metody produkcji leków gotowych do spożycia na receptę muszą być zgodne z przepisami Farmakopei Chińskiej2. Co więcej, przepisane leki gotowe do spożycia muszą być namoczone w zimnej wodzie pitnej przez co najmniej 30 minut, zanim zostaną zdekodowane w specjalnym garnku farmaceutycznym przez podgrzanie5. Badania wykazały, że większość składników aktywnych można ekstrahować przez dwukrotne odkrawanie, a Kodeks Postępowania w Podawaniu Pomieszczeń Do Sporządzania Wywarów Tradycyjnych Leków Chińskich w Placówkach Medycznych również zaleca, aby wywar był sporządzany dwukrotnie4,6,7. Jeśli przepisane są specjalne chińskie zioła, takie jak zioła o twardej konsystencji lub toniki, zaleca się wydłużenie czasu wywaru. Przybory do wywaru i pojemniki do przechowywania, które mają bezpośredni kontakt z formułą wywaru, począwszy od pojemnika, w którym moczy się przepisane leki gotowe do wywaru, powinny być stabilne chemicznie i mieć pokrywki, takie jak zapiekanki, ceramika, szkło i stal nierdzewna. Nie należy jednak używać aluminium i zwykłych produktów z tworzyw sztucznych, a żelazo i inne przybory powinny być zabronione, aby uniknąć możliwych reakcji chemicznych, które zmniejszą skuteczność terapeutyczną, a nawet wywołają szkodliwe skutki4,6,7.
Ze względu na ograniczenia związane z przeprowadzaniem eksperymentów klinicznych, małe zwierzęta przenoszące ludzkie choroby, takie jak myszy, są często wykorzystywane w badaniach medycznych do badania skuteczności terapeutycznej i kompleksowych mechanizmów różnych interwencji, w tym formuły wywaru tradycyjnej medycyny chińskiej8,9; Jednak w przeciwieństwie do ludzi, formuły wywarów powinny być przygotowywane codziennie, mieszane ze sobą i świeżo podawane 2x dziennie w praktyce klinicznej. Zwierzęta nie są w stanie dobrowolnie przyjąć leków na czas z wymaganą dawką, a większość eksperymentów na zwierzętach związanych z tradycyjną medycyną chińską polega obecnie na doustnym podawaniu formuł wywarów na zasadzie zgłębnika. Formuły wywarów stosowane w doświadczeniach na zwierzętach in vivo powinny być przygotowane z wyprzedzeniem, porcjowane, przechowywane w temperaturze -20 °C i rozmrożone tuż przed użyciem3,4,10. Co więcej, niespełniające norm unieruchomienie zwierząt i manipulacja igłą zwiększa ryzyko niepotrzebnych urazów i negatywnych emocji. Dlatego, jako ważna metoda przezdoustnego dostarczania leków, wykwalifikowana technika zgłębnika jest szczególnie ważna, aby uniknąć możliwego uszkodzenia przełyku i rozlania leku, zapewniając w ten sposób, że każde zwierzę modelowe otrzyma równą ilość przepisanego leku ziołowego, aby osiągnąć dokładne wyniki eksperymentalne. Tutaj przedstawiamy protokół zgłębnika dla formuły wywaru tradycyjnej medycyny chińskiej.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
Ten protokół opisuje szczegółową technikę zgłębnika u myszy modelujących kostniakomięsaka, używając wywaru Yiqi Jiedu jako próbki. W tym eksperymencie wykorzystano czterotygodniowe samce myszy atymimiczne (BALB/c nago) i trzymano w pomieszczeniu hodowlanym klasy SPF w Centrum Zwierząt Laboratoryjnych na Uniwersytecie Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Szanghaju. Wszystkie eksperymenty na zwierzętach zostały zatwierdzone przez Zarząd Zwierząt i Komitet Uniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Szanghaju, były zgodne z Kodeksem Etyki dla Zwierząt Laboratoryjnych (Numer Zatwierdzenia Etyki Zwierząt: PZSHUTCM2304060007) i przeprowadzone w ścisłej zgodności z międzynarodowymi wymaganiami dotyczącymi zwierząt laboratoryjnych.
1. Materiały
- Zaopatrz się w następujące materiały: zioła chińskie (żeń-szeń 42 g, Hedyotis diffusa 52,5 g, ziele tarczycy kolczastej 31,5 g), strzykawkę 1 ml i igłę do głębków łokciowych 12 G/55 mm (Rysunek 1).
2. Określenie dawki
- Oblicz dzienną dawkę w następujący sposób: dzienna dawka dla dorosłych o standardowej masie ciała 60 kg to żeń-szeń 12 g, Hedyotis diffusa 15 g i ziele tarczycy kolczastej 9 g, o łącznej zawartości 36 g leku gotowego do wywaru, czyli 0,6 g leków gotowych do wywaru/kg masy ciała. Odnosząc się do 12 razy dla dawki równoważnej, 6 razy dla niskiej dawki i 24 razy dla wysokiej dawki między dorosłymi o standardowej masie ciała 60 kg a myszami o standardowej masie ciała 25 g zgodnie z powierzchnią ciała11, a także naszymi wstępnymi danymi, użyj 20-krotnego stosunku dawki wywaru Yiqi Jiedu dla myszy w obecnym badaniu, W związku z tym dawka dla myszy wynosiła 12 g leków gotowych do sporządzenia wywaru/kg masy ciała.
- Oblicz dawkę dla każdej myszy, korzystając z równania:
Dawkowanie dla myszy (masa ciała w pozycji stojącej) = Dawkowanie dla osoby dorosłej (masa ciała w pozycji stojącej) x 20 (wyznaczony stosunek dawki równoważnej).
Dzienna dawka każdej myszy wynosi 0,3 g [(12 g leków gotowych do wywaru/1000 g masy ciała) x 25 g masy ciała] w 200 μl przy końcowym stężeniu 1,5 g/ml. - Oblicz całkowitą ilość leków gotowych do spożycia wywaru dla myszy (n=7) w grupie wywaru Yiqi Jiedu z podawaniem przez zgłębnik przez 28 dni na 58,8 g. Stęż to do 39,2 ml, aby osiągnąć końcowe stężenie 1,5 g/ml.
- Biorąc pod uwagę możliwą utratę leku podczas wywaru i zgłębnika oraz dla wygody obliczeń, przygotuj łącznie 126 g (żeń-szeń 42 g, Hedyotis diffusa 52,5 g, ziele tarczycy kolczastej 31,5 g) leku gotowego do wywaru, skoncentruj do końcowej objętości 84 ml.
3. Źródło komórek i hodowla
- Kup komórki kostniakomięsaka 143B pochodzenia ludzkiego z banku komórek ATCC.
- Zasiewaj 1 x 106 komórek 143B w 10 ml pożywki MEM zawierającej 10% FBS, 100 U/ml penicyliny i 100 μg/ml streptomycyny w 10-centymetrowym naczyniu do hodowli komórkowej.
- Hodować komórki 143B w temperaturze 37 °C w inkubatorze o stężeniu 5% CO2 do momentu, aż komórki zlewają się w 80%-90%.
4. Metody modelowania
- Zebrać 80% zlewających się komórek 143B z hodowli konfluentnej, ponownie zawiesić w 6 ml 10% pożywki MEM zawierającej surowicę i wymieszać z żelem macierzy błony podstawnej w stosunku objętościowym 1:1, aby uzyskać zawiesinę komórek o końcowym stężeniu 1 x 107 komórek/ml.
- Wstrzyknij 10 μl zawiesiny komórkowej do lewej kości piszczelowej każdej myszy atymicznej, aby ustalić model myszy kostniakomięsaka in situ ksenoprzeszczepu, jak opisano w naszej poprzedniej publikacji12. Kroki w skrócie są następujące.
- Umyj komórki 2x PBS. Trypsynizuj komórki 1,5 ml 0,25% trypsyny przez 3 min. Dodaj 6 ml 10% pożywki MEM zawierającej surowicę. Zebrać komórki w probówce wirówkowej o pojemności 15 ml.
- Odessać 20 μl zawiesiny komórek do komory płytki do zliczania komórek i obliczyć stężenie komórek za pomocą automatycznego licznika komórek. Odwirować komórki przy 800 x g przez 5 minut w temperaturze pokojowej.
- Odrzucić supernatant za pomocą pipety, ponownie zawiesić osad komórkowy w matrycy błony podstawnej o stężeniu 8,5 mg/ml i umieścić go na lodzie.
- Znieczulij myszy, wystawiając je na działanie 2% izofluranu i 98% tlenu (natężenie przepływu tlenu, 2 l/min). Nałóż niewielką ilość maści weterynaryjnej na oczy, aby zapobiec wysuszeniu podczas znieczulenia.
- Całą procedurę należy wykonać w dobrze wentylowanym pomieszczeniu. Przed wstrzyknięciem komórek kostniakomięsaka upewnij się, że każda mysz jest w głębokim znieczuleniu, delikatnie dotykając stopy; Jeśli mysz nadal ma odpowiedzi, takie jak drgnięcie lub szarpnięcie. Poczekaj dłużej, jeśli mysz nadal ma odpowiedzi, takie jak drgnięcie lub szarpnięcie, aż te odpowiedzi znikną.
- Umieść mysz w pozycji leżącej. Przytrzymaj kostkę myszy za pomocą kciuka i palca wskazującego i zdezynfekuj miejsce wstrzyknięcia kości piszczelowej trzema naprzemiennymi rundami betadyny i wacika z 70% etanolu.
- Przymocować igłę do strzykawki o pojemności 1 ml i skierować końcówkę igły w stronę miejsca wstrzyknięcia, równolegle do osi kości piszczelowej. Przezskórnie wprowadzić igłę, aby wywiercić otwór przez platformę piszczelową w kierunku dystalnego końca kości piszczelowej.
- Załaduj zawiesinę komórek kostniakomięsaka, która została wcześniej umieszczona na lodzie, do strzykawki do mikroobjętości i zastąp strzykawkę o pojemności 1 ml w kości piszczelowej strzykawką mikroobjętościową z komórkami kostniakomięsaka. Powoli wstrzyknąć około 10 μl (1 x 107 komórek/ml) zawiesiny komórek kostniakomięsaka do kości piszczelowej każdej myszy atymicznej.
- Wyjąć strzykawkę z mikroobjętością z miejsca wstrzyknięcia i uciskać miejsce wstrzyknięcia bawełnianym wacikiem przez około 30 sekund. Umieść mysz z powrotem w czystej klatce i obserwuj jej regenerację przez 10 minut.
5. Przygotowanie formuły wywaru z tradycyjnej medycyny chińskiej do zgłębnika ( Rysunek 2)
- Oblicz dawkę zgodnie z krokiem 2.
- Namocz wszystkie zioła lecznicze na wywar, z wyjątkiem drogiego zioła żeń-szenia, w wodzie pitnej o poziomie 3 cm wyższym niż powierzchnia leku, przez 30 minut, a następnie wykonaj wywar 2x, jak opisano poniżej.
- Wykonaj pierwszy wywar, podgrzewając do wrzenia na silnym ogniu, a następnie podgrzewając przez 15-25 minut na łagodnym ogniu. Łagodny ogień odnosi się do ciepła o niskiej mocy o temperaturze zwykle od 80 °C do 100 °C, podczas gdy silny ogień odnosi się do ciepła o dużej mocy, zwykle w zakresie od 200 °C do 300 °C.
- Wlej płyn wywarowy do jednego pojemnika.
- Wykonaj drugi wywar, podgrzewając zioła lecznicze w wodzie pitnej, o objętości wystarczającej do zanurzenia powierzchni leku, do wrzenia na silnym ogniu, a następnie podgrzewania przez 15-25 minut na łagodnym ogniu.
- Wlej płyn z wywaru do tego samego pojemnika, co w kroku 5.4.
- Namocz i odejmij 42 g żeń-szenia osobno, popijając wodą pitną o 3 cm wyżej niż powierzchnia leku, ponieważ jest to drogie.
- Wykonaj pierwszy wywar z namoczonego żeń-szenia, podgrzewając go na silnym ogniu przez 60 min.
Wlej płyn z wywaru do tego samego pojemnika, co w kroku 5.4. - Wykonaj drugi wywar z żeń-szenia w wodzie pitnej o objętości wystarczającej do zanurzenia powierzchni leku, podgrzewając go na łagodnym ogniu przez 40 minut. Wlej płyn z wywaru do tego samego pojemnika, co w kroku 5.4.
UWAGA: Pojemniki używane do wywaru powinny być stabilne chemicznie, takie jak zapiekanki (najczęściej stosowane w praktyce klinicznej), ceramika, szkło i stal nierdzewna, aby uniknąć ewentualnych reakcji chemicznych z substancjami leczniczymi. Cały płyn wywarowy uzyskany z różnych etapów należy umieścić w tym samym pojemniku. - Wymieszaj i przefiltruj płyn wywarowy za pomocą trzech warstw gazy przymocowanej do wylotu miarki za pomocą gumowych opasek.
- Przefiltrowany wywar zagotuj na silnym ogniu w garnku, a następnie zmień ogień na łagodny i utrzymuj łagodny ogień aż do osiągnięcia docelowego stężenia (końcowa objętość 84 ml przy końcowym stężeniu 1,5 g/ml).
- Przygotować 21 ml porcji zagęszczonego wywaru zgodnie z dawką wymaganą do podawania dożołądkowego przez 1 tydzień i przechowywać podwielokrotności w lodówce w temperaturze -20 °C.
6. Podawanie zgłębnika u myszy za pomocą urządzenia do gavage
- Umieść mysz na powierzchni klatki myszy lub innej bardziej szorstkiej powierzchni.
- Chwyć ogon myszy kciukiem i palcem wskazującym prawej ręki. Następnie chwyć szyję myszy kciukiem, palcem wskazującym i środkowym palcem lewej ręki.
- Przytrzymaj ogon myszy pozostałymi dwoma palcami lewej ręki, aby głowa, szyja i tułów myszy były w linii prostej.
UWAGA: Upewnij się, że mysz jest zrelaksowana podczas całego procesu chwytania. Jeśli mysz nadal ma trudności z poruszaniem się, proces chwytania należy wykonywać, dopóki mysz nie zostanie zrelaksowana. - Trzymaj zgłębnik w prawej ręce i załaduj 200 μl wywaru dla myszy o masie ciała 20 g (100 μl wywaru / 10 g masy ciała myszy).
- Włóż igłębkę do ust od kącika oka i dociśnij język do górnej szczęki myszy.
- Trzymaj ciało myszy w tym samym kierunku i delikatnie popchnij igłębnik w kierunku żołądka wzdłuż przełyku, aż około 10 mm igły do zgłębnika pozostanie na zewnątrz.
UWAGA: Pojawia się uczucie pustki, gdy igła do zgłębnika wchodzi do przełyku. Długość igły do głębka wbitej w mysz powinna być mierzona do szczytu mostka. Całkowita długość igły do zgłębnika wynosi 60 mm (Rysunek 3), dlatego około 50 mm igły do zgłębnika należy wprowadzić do ciała myszy przed wstrzyknięciem wywaru do żołądka myszy. - Wstrzyknij formułę wywaru do żołądka myszy. Napotkanie oporu lub płynu wydostającego się z kącika ust oznacza niewłaściwe umieszczenie igły do wbijania, czego należy unikać. Ponadto należy zmniejszyć prędkość wtrysku, jeśli formuła wywaru jest gęsta.
- Zwolnij mysz i obserwuj je przez 10 minut. Zgłębnik jest udany, jeśli nie zaobserwuje się żadnych nieprawidłowości w oddychaniu i wróci mysz do klatki (Rysunek 4).
7. Przebieg leczenia
- Aby zbadać skuteczność terapeutyczną wywaru Yiqi Jiedu, należy utworzyć grupę kontrolną i grupę wywaru Yiqi Jiedu. W przypadku myszy z grupy kontrolnej podawać sól fizjologiczną raz dziennie przez 28 dni. W przypadku myszy z grupy wywaru Yiqi Jiedu należy podawać wywar Yiqi Jiedu raz dziennie przez 28 dni.
8. Działania niepożądane
- Uważnie obserwuj stan myszy po ponownym umieszczeniu w klatce, w tym utratę wagi i obniżony stan psychiczny z powodu niemożności dostania się pokarmu do żołądka.
- Myszy będą odczuwać trudności w oddychaniu i duszność z powodu niedrożności tchawicy spowodowanej pokarmem i będą kaszleć, próbując usunąć tchawicę. Jeśli którykolwiek z tych objawów zostanie zaobserwowany podczas zgłębnika, natychmiast przerwij zgłębnik i poddaj myszy eutanazji.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Hamujący wpływ wywaru Yiqi Jiedu na wzrost osteosarcoma in vivo określono w mysim modelu ksenoprzeszczepu osteosarcoma wewnątrzpiszczelowego, przygotowanym poprzez wstrzyknięcie komórek osteosarcoma 143B do kości piszczelowej myszy atypowych. Wywar Yiqi Jiedu podawano myszom w grupie Yiqi Jiedu poprzez zgłębnik przez 28 dni, zaczynając od drugiego dnia po wstrzyknięciu komórek 143B. Myszy w grupie kontrolnej otrzymywały sól fizjologiczną. Wszystkie myszy uśpiono po 28 dniach. Wyniki wykazały, że objętość guza w ...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Skuteczność kliniczna przepisywanych ziół w tradycyjnej medycynie chińskiej jest w dużej mierze związana z podawaną dawką i postacią dawkowania; Dlatego w praktyce klinicznej konieczne jest ustanowienie ustandaryzowanej strategii wywaru i wykwalifikowanego procesu podawania, a także poprawa wiarygodności wyników eksperymentalnych.
W tym badaniu najpierw przedstawiliśmy szczegółową strategię standaryzowanego wywaru z chińskich ziół stosowanych w praktyce klinicznej tradycyjnej medycyny chińskie...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy oświadczają, że nie mają nic do ujawnienia.
Podziękowania
Obecna praca jest wspierana przez granty z (1) National Nature Science Foundation (81973877 i 82174408), (2) National Key R&D Program of China (2020YFE0201600), (3) projektu budowy Centrum Badawczego Shanghai Top Priority (2022ZZ01009), (4) Shanghai Collaborative Innovation Center of Industrial Transformation of Hospital TCM Preparation oraz (5) Projektów badawczych w ramach budżetu Uniwersytetu Tradycyjnej Medycyny Chińskiej w Szanghaju (2021LK047).
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| Linia komórkowa 143B | ATCC | CRL-8303 | linia komórkowa kostniakomięsaka |
| Maszyna anestezjologiczna | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | R500IP | Sprzęt myszy anestezjologicznych |
| Automatyczny licznik komórek | Shanghai Simo Biological Technology Co., Ltd | IC1000 | Liczenie komórek |
| Myszy atymiczne BALB / c | Shanghai SLAC Laboratory Animal Co, Ltd. | Samiec | Zwierzę |
| Kolczasta jarmułka Zioło | Shanghai Yanghetang Tradycyjna Medycyna Chińska Tablet Co., Ltd. | 20230606 | Leki gotowe do wywaru |
| Matryca membrany podstawnej | Shanghai Uning BioscienceTechnology Co., Ltd | 356234, BD, Matrigel | ponownie zawieszone komórki |
| Probówka wirówkowa (15 ml) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 430790, Corning | Wirówka komórek |
| Igła do pomiaru stawu łokciowego (12 gauge/ 55 mm) | RWD Life Science Co., Ltd. | C21014-12 | Element urządzenia do perfuzji żołądka |
| Gauze | Haishi Hainuo Group Co., Ltd. | LC45 | Filtr wywarowy |
| Żeń-szeń | Szanghaj Wanshicheng Pharmaceutical Co., Ltd. | 20220704-2 | Leki gotowe do wywaru |
| Hedyotis diffusa | Shanghai Yanghetang Tradycyjna Medycyna Chińska Tablet Co., Ltd. | 2023071107 | Leki gotowe do wywaru |
| izofluran | Shenzhen RWD Life Technology Co., Ltd | VETEASY | Myszy anestezjologiczne |
| Strzykawka mikroobjętościowa | Szanghaj przemysł i handel gołębiami Co., Ltd | 0-50 μ L | Wstrzyknij precyzyjne komórki do kości piszczelowej |
| Sól fizjologiczna buforowana fosforanami | Beyotime Biotechnology | ST447 | umyj ludzkie komórki kostniakomięsaka |
| Gumki Shanghai Hengfei Biotechnology Co., Ltd. | XPJ | Gaza mocująca na miarce | |
| Strzykawka (1 ml) | Shanghai Mishawa Medical Industry Co., Ltd. | SBM0040 | Składnik urządzenia do perfuzji żołądka |
| Trypsyna (0,25%) | Shanghai YueNian Biotechnology Co., Ltd | 25200056, Gibco | trypsyna leczenie komórek |
Bibliografia
- Gao, S. Discussion on advantages and improvement of traditional Chinese medicine decoction. Chinese Community Physicians (Comprehensive Edition). (21), 12(2005).
- Chinese Pharmacopoeia Commission. Pharmacopoeia of the People's Republic of China. , (2015).
- An, Y., et al. Interpretation on specification of traditional Chinese medicine decoction. Herald Med. 42 (11), 1648-1652 (2023).
- Chen, S., et al. Research strategies in standard decoction of medicinal slices. China J Chinese Materia Medica. 41 (8), 1367-1375 (2016).
- Luo, F. Effect of soaking traditional Chinese medicine before decoction on active components. Shanghai Yiyao. 40 (9), 63-64 (2019).
- Liu, F., Chen, M. On the standardization of decocting methods of modern decoction. Global Trad Chinese Med. 7 (5), 377-378 (2014).
- Li, X., et al. Influence of decocting times and instrument on the quality of decoction. J Trad Chinese Med. 50 (6), 550-552 (2009).
- Li, X., et al. Herbal decoctosome is a novel form of medicine. Sci China. Life Sci. 62 (3), 333-348 (2019).
- Lan, Y., Hu, Y., Huang, W., Tang, S. Reflections on PK - PD model based on animal experiments for study of Chinese medicine. Lishizen Med Materia Medica Res. 34 (2), 395-397 (2023).
- Li, Y., Bai, M., Song, Y., Guo, H., Miao, M. Research and reflection on standard decoction of Chinese materia medica. Chinese Trad Herbal Drugs. 49 (17), 3977-3980 (2018).
- Department of Health and Human Services, Food and Drug Administration, Center for Drug Evaluation and Research (CDER). Estimating the maximum safe starting dose in initial clinical trials for therapeutics in adult healthy volunteers. , https://www.fda.gov/regulatory-information/search-fda-guidance-documents/estimating-maximum-safe-starting-dose-initial-clinical-trials-therapeutics-adult-healthy-volunteers (2005).
- Chang, J., et al. Intratibial osteosarcoma cell injection to generate orthotopic osteosarcoma and lung metastasis mouse models. J Vis Exp. (176), 63072(2021).
- He, C. Laboratory animal science. , (2006).
- Patten, A. R., Fontaine, C. J., Christie, B. R. A comparison of the different animal models of fetal alcohol spectrum disorders and their use in studying complex behaviors. Fronti Pedia. 2, 93(2014).
- Jones, C. P., Boyd, K. L., Wallace, J. M. Evaluation of mice undergoing serial oral gavage while awake or anesthetized. J Am Assoc Lab Animal Sci. 55 (6), 805-810 (2016).
- Recena Aydos, L., et al. Nonalcoholic fatty liver disease induced by high-fat diet in C57bl/6 models. Nutrients. 11 (12), 3067(2019).
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
