Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł metodologiczny

Kation Nanoemulsja kapsułkowana kwasem retinowym jako adiuwant w celu promowania specyficznych dla OVA odpowiedzi ogólnoustrojowych i błony śluzowej

1.8K wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/66270

⸱

23 lutego 2024

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1National Engineering Research Center of Immunological Products, Department of Microbiology and Biochemical Pharmacy, College of Pharmacy, Third Military Medical University

W tym artykule

Podsumowanie

W tym protokole opracowaliśmy kationowy kwas retinowy (RA) kapsułkowany nanoemulsją, który ma być stosowany jako adiuwant do promowania specyficznych dla antygenu odpowiedzi ogólnoustrojowych i śluzówkowych. Poprzez dodanie zatwierdzonego przez FDA RA do nanoemulsji, sIgA specyficzne dla antygenu było promowane w pochwie i jelicie cienkim po domięśniowym wstrzyknięciu nanoemulsji.

Streszczenie

Nanostruktury kationowe pojawiły się jako adiuwant i system dostarczania antygenu, który wspomaga dojrzewanie komórek dendrytycznych, wytwarzanie ROS i wychwyt antygenu, a następnie promuje specyficzne dla antygenu odpowiedzi immunologiczne. W ostatnich latach kwas retinowy (RZS) cieszy się coraz większym zainteresowaniem ze względu na jego wpływ na aktywację odpowiedzi immunologicznej błony śluzowej; jednak, aby użyć RZS jako adiuwanta błony śluzowej, konieczne jest rozwiązanie problemu jego rozpuszczania, ładowania i dostarczania. Tutaj opisujemy kationowy system dostarczania kwasu retinowego w kapsułkach nanoemulsyjnych (CNE-RA) składający się z kationowego lipidu 1,2-dioleoilo-sn-glicero-3-fosfocholiny (DOTAP), kwasu retinowego, skwalenu jako fazy olejowej, polisorbatu 80 jako środka powierzchniowo czynnego i trioleinianu sorbitolu 85 jako kosurfaktantu. Jego właściwości fizyczne i chemiczne scharakteryzowano za pomocą dynamicznego rozpraszania światła i spektrofotometru. Immunizacja myszy mieszaniną antygenu (albuminy jaja kurzego, OVA) i CNE-RA znacznie podniosła poziom immunoglobuliny wydzielniczej anty-OVA A (sIgA) w płynie z płukania pochwy i płynie z płukania jelita cienkiego myszy w porównaniu z samym OVA. Protokół ten opisuje szczegółową metodę przygotowania, charakterystyki i oceny działania adiuwantowego CNE-RA.

Wprowadzenie

Adiuwanty są często stosowane w celu zwiększenia skuteczności szczepionki poprzez stymulację układu odpornościowego do silniejszej reakcji na szczepionkę, zwiększając w ten sposób odporność na określony patogen1. Adiuwant nanoemulsyjny (NE) odnosi się do koloidalnego układu dyspersyjnego o stabilności termodynamicznej poprzez emulgowanie pewnej proporcji fazy olejowej i fazy wodnej w celu wytworzenia emulsji w postaci wody w oleju (W/O) lub oleju w wodzie (O/W)2. Adiuwant nanoemulsyjny O/W może wytwarzać cytokiny i chemokiny w miejscu wstrzyknięcia, indukować szybką agregację i proliferację ważnych komórek odpornościowych, takich jak monocyty, neutrofile i eozynofile, oraz wzmacniać odpowiedź immunologiczną i poprawiać immunogenność antygenów3. Obecnie trzy adiuwanty nanoemulsyjne (MF59, AS03 i AF03) zostały dopuszczone do stosowania w szczepionkach i wykazały dobre bezpieczeństwo i skuteczność4.

Jednakże, odporność błony śluzowej została słabo rozwiązana przez obecnie licencjonowane preparaty uzupełniające w konwencjonalnych szczepieniach pozajelitowych5. Doniesiono, że kwas retinowy (RZS) indukuje naprowadzanie komórek odpornościowych w jelitach, ale jego niska polarność, słaba rozpuszczalność w wodzie oraz słaba stabilność świateł i termiczna ograniczają jego zastosowanie w solidnych szczepieniach dojelitowych. Nanoemulsje dają możliwości zwiększenia biodostępności wysoce lipofilnych leków, a rdzeń olejowy adiuwantów emulsyjnych O/W nadaje się do rozpuszczania substancji niepolarnych, takich jak RA6. Dlatego nanoemulsje mogą być stosowane jako nośniki RZS w celu uzyskania efektu podwójnej odpowiedzi odporności ogólnoustrojowej i odporności błony śluzowej.

W porównaniu do neutralnych lub anionowych systemów dostarczania, kationowe systemy dostarczania mają stosunkowo skuteczne możliwości enkapsulacji i dostarczania antygenów, co może zwiększyć immunogenność antygenów7,8,9. Kationowy ładunek powierzchniowy różnych systemów adiuwantowych jest ważny dla ich efektów adiuwantowych10,11,12. Ładunek kationowy jest ważnym czynnikiem przedłużającym retencję szczepionki w miejscu wstrzyknięcia, zwiększającym prezentację antygenu i przedłużającym stymulację odporności komórkowej w organizmie12.

Na podstawie powyższych rozważań, opracowaliśmy kationową nanoemulsję, aby skutecznie dostarczać RA i antygeny. Wielkość cząstek i potencjał zeta nanoemulsji określono za pomocą dynamicznego rozpraszania światła (DLS), a ogólnoustrojowe i śluzówkowe odpowiedzi immunologiczne nanoemulsji w połączeniu z OVA oceniono za pomocą wstrzyknięcia domięśniowego13.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Eksperymenty na zwierzętach zostały przeprowadzone zgodnie z Przewodnikiem po użytkowaniu i opiece nad zwierzętami laboratoryjnymi oraz zatwierdzone przez Komisję ds. Dobrostanu i Etyki Zwierząt Laboratoryjnych Trzeciego Wojskowego Uniwersytetu Medycznego.

1. Przygotowanie nanoemulsji (NEs)

  1. W celu przygotowania fazy wodnej rozpuścić 0,15 g polisorbatu 80 w 28,2 ml soli fizjologicznej buforowanej fosforanami (PBS), mieszając w temperaturze 40 °C.
  2. Do przygotowania fazy olejowej należy użyć preparatu nanoemulsji w fazie olejowej przedstawionego w tabeli 1. Rozpuścić trileinian sornitanu 85, DOTAP i RA w skwalenie, mieszając w temperaturze 40 °C.
  3. W celu przygotowania pierwotnej emulsji O/W, należy mieszać fazę olejową magnetycznie z prędkością 1400 obr./min, dodając roztwór wodny powoli i kroplami z szybkością 1 ml/min. Mieszaninę należy wstępnie zemulgować za pomocą emulgatora o wysokim ścinaniu przy 30 000 obr./min przez 6 min.
  4. W przypadku homogenizacji wysokociśnieniowej (HPH) przygotowaną powyżej emulsję O/W należy poddać działaniu homogenizatora wysokociśnieniowego przez 12 cykli pod ciśnieniem 900 barów, aby uzyskać jednorodną nanoemulsję w zakresie 160-190 nm.
  5. Pod koniec procesu zebrać emulsję do kolby o pojemności 50 ml i przefiltrować emulsję przez membranę filtracyjną PES o grubości 0,2 μm.
  6. Podłączyć kolbę do przewodu Schlenka przez cewnik, obracając trójdrogowy zawór odcinający, aby podłączyć system do rury próżniowej i włączyć pompę próżniową, aby wytworzyć podciśnienie w kolbie. Następnie, obracając trójdrogowy kurek, podłącz system do rurki Argon i napełnij ją Argonem. Powtórz ten krok 3 razy, aby upewnić się, że kolba jest wypełniona argonem.
  7. Wymienić korek i uszczelnić folią paraffine, owinąć kolbę w folię aluminiową i przechowywać w temperaturze 4 °C.

2. Charakterystyka nanoemulsji

  1. Wykrywanie wielkości cząstek i potencjału zeta
    1. Włącz przyrząd i odczekaj 30 minut, aż laserowe źródło światła się ustabilizuje.
    2. Rozcieńczyć NE 50-krotnie ultraczystą wodą i dodać 1 ml próbki do odpowiedniej celi próbki.
    3. Aby zmierzyć wielkość cząstek, ustaw temperaturę na 25 °C, wybierz wodę jako medium dyspergujące i wybierz jednorazowe plastikowe naczynia jako celę pomiarową. Załaduj próbki i zmierz automatycznie. Jako wynik końcowy należy podać średnią wartość z trzech powtórzonych pomiarów dla każdej próbki.
    4. Do pomiaru potencjału zeta należy ustawić temperaturę na 25 °C. Ze względu na wybór fazy wodnej jako medium dyspersyjnego, należy wybrać model Smoluchowsiego, a jako celę pomiarową złożoną komórkę kapilarną. Załaduj próbki i zmierz automatycznie. Jako wynik końcowy należy podać średnią z trzech powtórzonych pomiarów dla każdej próbki.
  2. Oznaczanie szybkości kapsułkowania i szybkości ładowania leku
    1. Aby określić ilość RA załadowanego w NE, należy użyć absolutnego etanolu do demulgacji i ekstrakcji RA z NE. Do 5 μl próbki dodać 995 μl etanolu i oznaczyć zawartość RA w roztworze za pomocą spektrofotometru przy długości fali 355 nm. Porównaj absorbancję z krzywą wzorcową. Użyj następującego równania:
      Enkapsulacja = rzeczywiste obciążenie RZS/waga dodanego leku
      Szybkość ładowania leku = rzeczywiste ładowanie RA / jakość próbki

3. Procedury szczepień i pobieranie próbek

  1. Procedura szczepień i grupowanie szczepień
    1. Grupa samic myszy Balb/C w wieku 6-8 tygodni i o wadze około 18-21 g w zestawach po 5 sztuk do immunizacji w dniu 0, dniu 14, dniu 28 według następujących grup eksperymentalnych: (1) grupa PBS, (2) grupa albuminy jaja kurzego (OVA), (3) grupa OVA+ NE-RA (OVA/ NE-RA), (4) grupa OVA+CNE-RA(OVA/CNE-RA).
    2. Uodpornić wszystkie myszy przez wstrzyknięcie domięśniowe do górnych mięśni czworogłowych za pomocą 200 μl różnych preparatów szczepionek: 100 μl emulsji i 15 μg OVA wchłoniętych w 100 μl PBS, zmieszanych przed podaniem. Wstrzyknąć 100 μl/tylną nogę. Dla myszy w grupie kontrolnej podawać sam PBS.
    3. Eutanazja: Poddaj eutanazji wszystkie myszy przez dootrzewnowe wstrzyknięcie 100 mg/kg 1% pentobarbitalu sodu 2 tygodnie po zakończeniu trzech szczepień.
    4. Pobieranie i przetwarzanie próbek: Po eutanazji użyj nożyczek, aby rozciąć klatkę piersiową myszy i włóż strzykawkę bezpośrednio do serca, aby odessać około 0,5 ml pełnej krwi. Pozostawić krew na 2 godziny w temperaturze pokojowej, a następnie odwirować przy 1800 x g przez 5 minut w temperaturze 4 °C. Zebrać surowicę, podwielokrotność i przechowywać w temperaturze -80 °C do dalszej analizy.
    5. Zbierz krew pełną, śledzionę, płyn z płukania pochwy (VLF), płyn z płukania oskrzelowo-pęcherzykowego (BALF), płyn z płukania nosa (NLF) i płyn z płukania jelita cienkiego (SILF).
  2. Izolacja limfocytów śledziony
    1. Namocz myszy w etanolu 75% (v/v) w celu krótkiej sterylizacji, przenieś myszy na czystą ławkę. Przetnij skórę na lewym brzuchu nożyczkami, odsłoń i usuń śledzionę.
    2. Umieścić śledzionę na szalce Petriego zawierającej 3 ml PBS, zmielić i przefiltrować do probówki wirówkowej o pojemności 15 ml za pomocą sita (200 oczek, 70 μm) i pręta mielącego.
    3. Odwirować komórki przy 650 x g przez 5 minut w temperaturze pokojowej. Odrzucić supernatant i zawiesić osad w 3 ml roztworu do lizy czerwonych krwinek, inkubować w temperaturze pokojowej przez 5 minut.
    4. Dodać 10 ml PBS do probówki i dobrze wstrząsnąć, aby zakończyć reakcję, a następnie odwirować ją przy 650 x g przez 5 minut w temperaturze pokojowej.
    5. Odrzucić supernatant i ponownie zawiesić komórki w 10 ml PBS, dodać 20 μl rozcieńczenia komórek do automatycznego licznika komórek w celu zliczenia komórek.
    6. Odwirować komórki przy 650 x g przez 5 minut w temperaturze pokojowej. Odrzucić supernatant i rozcieńczyć komórki do 1 x 106 komórek/ml za pomocą 1640 kompletnej pożywki (1% penicylina-streptomycyna, 10% płodowa surowica bydlęca).
  3. Pobieranie VLF: Przepłukać pochwę 4 razy 75 μl 1%BSA/PBST, połączyć roztwór do płukania i zebrać do probówek wirówkowych o pojemności 1,5 ml, odwirować przy 5000 x g w temperaturze 4 °C przez 20 minut, a następnie zebrać supernatant pipetą i przechowywać w temperaturze -80 °C.
  4. Kolekcja BALF i NLF
    1. Zdezynfekuj myszy po uśmierceniu za pomocą 75% (v/v) etanolu. Trzymaj mysz brzuchem do góry i wyprostuj szyję. Użyj nożyczek, aby wykonać podłużne nacięcie w skórze szyi myszy i użyj kleszczy, aby oddzielić mięśnie i odpowiednio odsłonić tchawicę.
    2. Przeciąć tchawicę przez mały poprzeczny otwór i wprowadzić wąż w kierunku płuc, podłączyć strzykawkę do węża i wstrzyknąć 0,5 ml PBS do płuc i wycofać, powtórzyć płukanie 3x i odwirować przy 650 x g w temperaturze 4 °C przez 5 minut, przechowywać supernatant (BALF) w temperaturze -80 °C.
    3. Odwróć wąż do jamy nosowej, podłącz strzykawkę do węża i wstrzyknij 0,5 ml PBS, płyn przepłynie przez jamę nosową do probówki wirówkowej o pojemności 1,5 ml. Odessać popłuczynę z probówki wirówkowej i powtórzyć płukanie 2x, następnie odwirować przy 650 x g w temperaturze 4 °C przez 5 minut, przechowywać supernatant (NLF) w temperaturze -80 °C.
  5. Kolekcja SILF
    1. Przygotować roztwór PBS zawierający 0,1 mg/ml inhibitora trypsyny, 50 mM/L EDTA-2Na, 1 mM/l fluorku fenylometylosulfonylu (PMSF) jako roztwór do płukania jelita cienkiego. Mieszać w temperaturze pokojowej do rozpuszczenia i przechowywać w temperaturze 4 °C.
    2. Rozciąć jelito cienkie wzdłuż rurki jelitowej i zanurzyć w 3 ml płynu z płukania jelita cienkiego. Mieszać przez pionowe wytrząsanie przy 15 obr./min przez 30 min w temperaturze 4 °C. Wirować przy 1440 x g w temperaturze 4 °C przez 20 min i zebrać supernatant za pomocą pipety, następnie odwirować przy 5000 x g w temperaturze 4 °C przez 20 min. Przechowywać supernatant (SILF) w temperaturze -80 °C.

4. Ocena odpowiedzi przeciwciał specyficznych dla OVA po podaniu domięśniowym

  1. Określić poziomy IgG w surowicy, podklasy IgG1, IgG2a oraz poziomy swoistego sIgA w VLF, BALF, NLF i SILF za pomocą testu immunoenzymatycznego (ELISA).
  2. W przypadku powlekania antygenowego rozcieńczyć OVA do 5 μg/ml buforem powlekającym i pokryć 96-dołkowe płytki ELISA przez noc w temperaturze 4 °C 100 μl roztworu OVA na studzienkę.
  3. Przemyć płytki ELISA 5x PBST i blokować przez inkubację z 250 μl 1%BSA/PBST w temperaturze 37 °C przez 2 godziny.
  4. Przemyć płytki ELISA 5x PBST, następnie dodać 100 μl próbki rozcieńczonej zgodnie z opisem poniżej do badania i inkubować w temperaturze 37 °C przez 1 godzinę. Rozcieńczyć surowicę, VLF, BALF, NLF 0,5% BSA/PBST, rozcieńczyć SILF 20% płodową surowicą cielęcą (FCS)/PBST.
    1. Rozpocząć od rozcieńczenia surowicy 1000x, stosując dwuetapową procedurę rozcieńczania: rozcieńczyć 20 μl surowicy do 1 ml, następnie rozcieńczyć 25 μl tej rozcieńczonej surowicy do 500 μl. Użyj tego rozcieńczenia surowicy do wykrycia IgG1, IgG2a.
  5. Dodać 200 μl surowicy rozcieńczonej 1000x do pierwszego rzędu powlekanej płytki i dodać 100 μl 0,5% BSA/PBST do wszystkich studzienek z wyjątkiem pierwszego rzędu. Przenieść 100 μl z pierwszego rzędu do drugiego rzędu i wymieszać 10x z pipetą. Powtórzyć ten krok do wiersza 8 i wylać 100 μl płynu, uzyskano surowicę o różnych stężeniach w celu wykrycia IgG.
  6. Wykonaj rozcieńczenie 1:1 BALF, NLF i SILF, aby wykryć IgA. W przypadku VLF należy stosować tę samą procedurę rozcieńczania, co w przypadku surowicy.
  7. Umyj płytki ELISA 5x za pomocą PBST. Dodać 100 μl sprzężonych z HRP kozich anty-mysich IgG/IgG1/IgG2a/IgA (rozcieńczonych w stosunku 1:10000 PBST) do odpowiednich studzienek i inkubować w temperaturze 37 °C przez 40 minut.
  8. Płytki ELISA przemyć 5x PBST, dodać 100 μL podłoża TMB ELISA (bardzo wrażliwego) i przenieść płytkę w miejsce chronione przed światłem na 5 min. Natychmiast dodać 100 μL roztworu zatrzymującego o długości 450 nm dla substratu TMB, aby zatrzymać reakcję.
  9. Zmierzyć absorbancję (OD) przy 450 nm dla każdej studzienki i obliczyć miano przeciwciał, przyjmując 2,1-krotność wartości surowicy myszy z grupy ślepej jako wartość odpowiedzi dodatniej.

5. Test ELISpot

  1. Postępuj zgodnie z wytycznymi dotyczącymi ELISpot Plus, użyj myszy IFN-γ (ALP) z zestawu, aby wykonać testy.
  2. Wyjąć płytkę z szczelnie zamkniętego opakowania i przemyć 4x sterylnym PBS (200 μL/basenik). Kondycjonować płytkę w 1640 kompletnym podłożu (200 μl/basenik) i inkubować przez 30 minut w temperaturze pokojowej.
  3. Usunąć pożywkę i dodać dostosowane stężenie zawiesiny limfocytów przygotowanej w kroku 3.2.2 (100 μl/dołek) do płytki, a następnie dodać 100 μl bodźca, tj. 1640 kompletnej pożywki zawierającej 20 μg/ml OVA257~264 lub OVA323~339 lub 1640 kompletnej pożywki. Umieścić płytkę w nawilżonym inkubatorze w temperaturze 37 °C z 5% CO2 przez 48 godzin. Owiń talerz folią aluminiową, aby uniknąć parowania.
  4. Wyrzucić zawiesinę komórkową i przemyć płytkę 5x PBS (200 μl/basenik). Rozcieńczyć przeciwciało wykrywające (R4-6A2-biotyna) do 1 μg/ml w PBS zawierającym 0,5% płodowej surowicy cielęcej (PBS-0,5% FCS). Dodać 100 μl/basenik i inkubować przez 2 godziny w temperaturze pokojowej.
  5. Umyj płytę jak w kroku 5.2. Rozcieńczyć streptawidynę-ALP (1:1000) w PBS-0,5% FCS i dodać 100 μl/basenik, inkubować przez 1 godzinę w temperaturze pokojowej.
  6. Umyj płytę jak w kroku 5.2. Przefiltruj gotowy do użycia roztwór substratu (BCIP/NBT-plus) przez filtr 0,45 μm i dodaj 100 μl/studzienkę. Rozwijaj się, aż pojawią się wyraźne plamy.
  7. Zatrzymaj rozwój koloru, myjąc go intensywnie w wodzie z kranu, usuń miękki plastik i pozostaw płytkę do wyschnięcia.
  8. Sprawdź i policz miejsca w czytniku ELISpot.

6. Analiza statystyczna

  1. Przeanalizuj różnice między danymi z 4 grup za pomocą jednokierunkowej ANOVA, a następnie wielokrotnego porównania Tukeya po teście. Wyraż wszystkie wyniki jako średnią ± SD. Wartość P mniejsza niż 0,05 została uznana za istotną.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

W sumie przygotowano cztery formulacje nanoemulsji, które scharakteryzowano pod kątem wielkości cząstek (Rysunek 1), potencjału zeta oraz wydajności enkapsulacji, zgodnie z danymi przedstawionymi w Tabeli 2. Wielkość cząstek koncentrowała się w przedziale 160-190nm, a dodatek DOTAP odwrócił potencjał zeta nanoemulsji. Poziom swoistych dla OVA przeciwciał IgG w surowicy oraz ich podgrup zmierzono 2 tygodnie po trzecim szczepieniu. Szczepionka z adiuwantem w postaci nanoemulsj...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

W tym protokole opracowaliśmy kationowy kwas retinowy w kapsułkach z nanoemulsją, który ma być stosowany jako adiuwant w celu promowania specyficznych dla antygenu odpowiedzi ogólnoustrojowych i śluzówkowych. W porównaniu z tradycyjnymi adiuwantami NE ma następujące dwie zalety. Po pierwsze, ogólnie rzecz biorąc, powierzchnia O/W NE ma wysoki ładunek ujemny, co utrudnia bezpośrednie ładowanie antygenów. Kationowe NE mogą skutecznie adsorpować antygeny peptydowe lub białkowe i wzmacniać swoistą immunogenność. Po drugie, d...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy oświadczają, że nie mają konfliktu interesów w związku z tą pracą.

Podziękowania

To badanie zostało sfinansowane przez Kluczowy Program Fundacji Nauk Przyrodniczych Chongqing (nr cstc2020jcyj-zdxmX0027) oraz Projekt Chińskiej Narodowej Fundacji Nauk Przyrodniczych (nr 32270988).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
1640 średniGIBCO, USAC11875500BT
450 nm Roztwór zatrzymujący do podłoża TMBAbcamab171529-1000 mL
Automatyczny licznik komórekCountstar, ChinyIC1000
BSASigma-Aldrich, USAWirówka B2064-100G
5810 REppendorf, Niemcy5811000398
Danamic Rozpraszanie światłaMalvernZetasizer Nano S90
DOTAPCordenPharma, SzwajcariaO02002
ELISpot Plus: Mysz IFN-gamma (ALP)mabtechab205719
Surowica bydlęcapłodu GIBCO, USA10099141C
W pełni funkcjonalny czytnik mikropłytekThermo Fisher Scientific, USAVL0000D2
Koza Anty-mysie IgG1 (HRP)Abcamab97240-1mg
Koza Anty-mysi łańcuch alfa IgA (HRP)Abcamab97235-1mg
Koza Anty-mysia IgG H& L (HRP)AbcamAb205720-500ug
Koza  Przeciw myszom IgG2a łańcuch ciężki (HRP)Abcamab97245-1mg
Homogenizator wysokociśnieniowyATS
MONTANE 85 PPISEPPIC, FrancjaL12910
MONTANOX 80 PPISEPPIC, Francja36372K
OVA257– 264Shanghai Botai Biotechnology Co., Ltd.NA
OVA323-339Shanghai Botai Biotechnology Co., Ltd.NA
Bufor fosforanowy sól fizjologicznaZSGB-bioZLI-9061
Bufor do lizy czerwonych krwinekSolarbio, ChinyR1010
kwas retinowyTCI, JaponiaTCI-R0064-5G
SkwalenSigma, USAS3626
T10 basic Ultra-TurraxIKA, Niemcy
PodłożeTMB ELISAAbcamab171523-1000ml
inhibitor trypsynyDiamondA003570-0100
Tween-20Macklin, Chiny9005-64-5
Spektrofotometr ultrafioletowyHitachiU-3900

Bibliografia

  1. Pulendran, B., Arunachalam, P. S., O'Hagan, D. T. Emerging concepts in the science of vaccine adjuvants. Nat Rev Drug Discov. 20 (6), 454-475 (2021).
  2. Pandey, P., Gulati, N., Makhija, M., Purohit, D., Dureja, H. Nanoemulsion: A novel drug delivery approach for enhancement of bioavailability. Recent Pat Nanotech. 14 (4), 276-293 (2020).
  3. Chen, W. L., et al. Disintegration and cancer immunotherapy efficacy of a squalane-in-water delivery system emulsified by bioresorbable poly(ethylene glycol)-block-polylactide. Biomaterials. 35 (5), 1686-1695 (2014).
  4. Iwasaki, A., Omer, S. B. Why and how vaccines work. Cell. 183 (2), 290-295 (2020).
  5. Spadoni, I., Fornasa, G., Rescigno, M. Organ-specific protection mediated by cooperation between vascular and epithelial barriers. Nat Rev Immunol. 17 (12), 761-773 (2017).
  6. Singh, Y., et al. Nanoemulsion: Concepts, development and applications in drug delivery. J Cont Release. 252, 28-49 (2017).
  7. Yan, W. L., Chen, W. S., Huang, L. Mechanism of adjuvant activity of cationic liposome: Phosphorylation of a MAP kinase, ERK and induction of chemokines. Mol Immunol. 44 (15), 3672-3681 (2007).
  8. Korsholm, K. S., et al. The adjuvant mechanism of cationic dimethyldioctadecylammonium liposomes. Immunology. 121 (2), 216-226 (2007).
  9. Agger, E. M., et al. Cationic liposomes formulated with synthetic mycobacterial cordfactor (CAF01): A versatile ddjuvant for vaccines with different immunological requirements. Plos One. 3 (9), e3116(2008).
  10. Slutter, B., et al. Nasal vaccination with N-trimethyl chitosan and PLGA based nanoparticles: Nanoparticle characteristics determine quality and strength of the antibody response in mice against the encapsulated antigen. Vaccine. 28 (38), 6282-6291 (2010).
  11. Nochi, T., et al. Nanogel antigenic protein-delivery system for adjuvant-free intranasal vaccines. Nat Mater. 9 (8), 685-685 (2010).
  12. Henriksen-Lacey, M., et al. Liposomal cationic charge and antigen adsorption are important properties for the efficient deposition of antigen at the injection site and ability of the vaccine to induce a CMI response. J Control Release. 145 (2), 102-108 (2010).
  13. Zhong, X. F., et al. Nanovaccines mediated subcutis-to-intestine cascade for improved protection against intestinal infections. Small. 18 (1), e2105530(2022).
  14. Mora, J. R., et al. Generation of gut-homing IgA-secreting B cells by intestinal dendritic cells. Science. 314 (5802), 1157-1160 (2006).
  15. Iwata, M., et al. Retinoic acid imprints gut-homing specificity on T cells. Immunity. 21 (4), 527-538 (2004).
  16. Hammerschmidt, S. I., et al. Retinoic acid induces homing of protective T and B cells to the gut after subcutaneous immunization in mice. J Clin Invest. 121 (8), 3051-3061 (2011).
  17. Burger, C., Shahzad, Y., Brümmer, A., Gerber, M., du Plessis, J. Traversing the skin barrier with nano-emulsions. Curr Drug Deliv. 14 (4), 458-472 (2017).
  18. Lodaya, R. N., et al. Formulation design, optimization and evaluations of an α-tocopherol-containing self-emulsified adjuvant system using inactivated influenza vaccine. J Cont Release. 316, 12-21 (2019).
  19. Carmona-Ribeiro, A. M., Pérez-Betancourt, Y. Cationic nanostructures for vaccines design. Biomimetics. 5 (3), 32(2020).
  20. Lam, K., et al. trialkyl ionizable lipids are versatile lipid-nanoparticle components for therapeutic and vaccine applications. Adv Mater. 35 (15), e2209624(2023).
  21. Nie, T. Q., et al. Surface coating approach to overcome mucosal entrapment of DNA nanoparticles for oral gene delivery of glucagon-like peptide 1. Acs Appl Mater Inter. 11 (33), 29593-29603 (2019).
  22. Lou, G., et al. Delivery of self-amplifying mRNA vaccines by cationic lipid nanoparticles: The impact of cationic lipid selection. J Cont Release. 325, 370-379 (2020).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Przeglądaj więcej artykułów

Dostarczanie kwasu retinowegobłon śluzowa odpowiedź immunologicznapobieranie antygenudojrzewanie komórek dendrytycznychdynamiczne rozpraszanie światłaimmunizacja owalbuminiątest ELISAwydzielnicza IgAsystemowa odpowiedź immunologiczna
Kation Nanoemulsja kapsułkowana kwasem retinowym jako adiuwant w celu promowania specyficznych dla OVA odpowiedzi ogólnoustrojowych i błony śluzowej
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.