Opisujemy ogólny protokół, który integruje analizę spektrometrii mas o wysokiej rozdzielczości i dokowanie molekularne w badaniach tradycyjnej medycyny chińskiej.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Tandemowa spektrometria mas o wysokiej rozdzielczości do badania składników chemicznych Gynura bicolor DC
* These authors contributed equally
W tym artykule
Podsumowanie
Streszczenie
Separacja i analiza pożądanych składników chemicznych są ważnymi tematami dla podstawowych badań tradycyjnej medycyny chińskiej (TCM). Ultra-wysokosprawna chromatografia cieczowa z kwadrupolową tandemową spektrometrią mas czasu przelotu (UPLC-Q-TOF-MS/MS) stopniowo stała się wiodącą technologią identyfikacji składników TCM. Gynura dwukolorowa DC. (BFH), wieloletnie zioło bez łodyg używane w medycynie i żywności w Chinach, ma działanie lecznicze, takie jak usuwanie ciepła, nawilżanie płuc, łagodzenie kaszlu, rozpraszanie zastojów i łagodzenie obrzęków. Polifenole i flawonoidy zawierają liczne izomery, które utrudniają identyfikację złożonych związków w BFH. W artykule przedstawiono systematyczny protokół badania składników chemicznych BFH w oparciu o ekstrakcję rozpuszczalnikową i zintegrowane dane za pośrednictwem UPLC-Q-TOF-MS.
Opisana tutaj metoda obejmuje systematyczne protokoły wstępnej obróbki próbek, kalibracji MS, akwizycji MS, przetwarzania danych i analizy wyników. Wstępna obróbka próbki obejmuje zbieranie, czyszczenie, suszenie, kruszenie i ekstrakcję. Kalibracja MS składa się z korekcji wielopunktowej i jednopunktowej. Przetwarzanie danych obejmuje import danych, ustalanie metody, przetwarzanie analizy i prezentację wyników. W artykule przedstawiono reprezentatywne wyniki typowego wzorca fragmentacji kwasów fenolowych, estrów i glikozydów w Gynura bicolor DC. (BFH). Ponadto szczegółowo omówiono wybór rozpuszczalników organicznych, ekstrakcję, integrację danych, wybór energii zderzeń i doskonalenie metod. Ten uniwersalny protokół może być szeroko stosowany do identyfikacji złożonych związków w TCM.
Wprowadzenie
Tradycyjna medycyna chińska (TCM) jest klinicznie praktykowana w Chinach od tysięcy lat i odgrywa istotną rolę w utrzymaniu zdrowia Chińczyków1. Skład TCM jest zróżnicowany i złożony, a TCM został szeroko opisany w wielu badaniach jakościowych koncentrujących się na składzie chemicznym2. Składniki chemiczne w TCM można z grubsza podzielić na następujące kategorie, takie jak alkaloidy, kwasy organiczne, fenylopropanoidy, kumaryny, lignany, chinony, flawonoidy, terpenoidy, saponiny triterpenoidowe, saponiny steroidowe, glikozydy nasercowe i garbniki3. Biorąc pod uwagę dużą liczbę nieznanych składnik....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Protokół
1. Wstępna obróbka próbki
- Umyj całe ziele BFH w czystej wodzie, aż nie będzie widocznych osadów i zanieczyszczeń. Umieść czysty BFH w naczyniu, a następnie włóż go do piekarnika (Rysunek 1B). Nastaw piekarnik na 50 °C na 24 godz.
UWAGA: Cała roślina BFH została zebrana w prowincji Syczuan w Chinach. - Rozdrobnić suszony BFH w wielofunkcyjnej kruszarce szybkoobrotowej. Przenieś gruboziarnisty proszek na sito o oczkach 50 (Rysunek 1C). Zbierz drobny proszek w hermetycznej torbie i przechowuj go w wieży suszącej.
- Dokładnie zważyć sześć próbek BFH po 0,25 g k....
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wyniki
Do prezentacji reprezentatywnych wyników wykorzystano identyfikację składu chemicznego BFH jako modelu. Chromatogramy pików bazowych Gynura bicolor DC. ekstrahowanych rozpuszczalnikiem przedstawiono w Supplemental File 1-Supplemental Figure S1-S6, a zaobserwowany czas retencji (RT), nazwę składnika, wzór, stosunek masy do ładunku (m/z) oraz błąd masy wymieniono w tabelach S1-S6. W ZBTK zidentyfikowano wszystkie 35 rodzajów związków z rozdzielonych pików w UPLC-TOF-MS. Jak pokazano w Supp.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Dyskusja
Oprócz wywaru wodnego12, ekstrakcja rozpuszczalnikiem organicznym jest kolejną powszechną metodą wstępnej obróbki TCM13. Zgodnie z zasadą rozpuszczania w podobnych fazach, wiele składników zostało wyekstrahowanych przez połączenie różnych rozpuszczalników organicznych14. Ekstrakcja wspomagana ultradźwiękami jest jedną z głównych metod stosowanych do otrzymywania składników w TCM15. Ekstrakcja dwutlenkiem węgla w stanie nadkryt.......
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Oświadczenia
Autorzy deklarują brak sprzecznych interesów finansowych.
Podziękowania
Ta praca została sfinansowana przez Narodową Fundację Nauk Przyrodniczych Chin (82104881), Zespół ds. Dziedziczenia i Innowacji Leczenia Chorób Immunologicznych TCM, Chongqing Medical Scientific Research Project (Wspólny projekt Komisji Zdrowia Chongqing oraz Biura Nauki i Technologii) (2022DBXM007), Specjalny projekt motywacyjny i przewodnicki Instytutu Badań Naukowych Chongqing (cstc2022jxjl120005), Specjalny projekt dla Chongqing Postdoctoral Science Fundacja (2022CQBSHTB3035), Program Starszych Talentów Medycznych Chongqing dla Yong i osób w średnim wieku, Program dla Instytucji Naukowych Chongqing (niezależny projekt badawczy nr 2022GDRC015).
....Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Materiały
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| chloroform | Sinopharm Chemical ReagentCo., Ltd | CAS 67-66-3 | |
| etanol | ChuandongChemical | CAS 64-17-5 | |
| octan etylu | ChuandongChemical | CAS 141-78-6 | |
| chromatograf cieczowy | Waters | ACQUITY Class 1 plus | |
| oprogramowanie | |||
| sterujące MassLynx Waters V4.2 MSAlkohol n-butylowy | ChuandongChemical | CAS 71-36-3 | |
| eter naftowy | ChuandongChemical | CAS 8032-32-4 | |
| Kwadrupolowa spektrometria mas czasu przelotu | Wody | SYNAPT XS | |
| UNIFI | Waters | Oprogramowanie do analizy danych |
Bibliografia
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Przedruki i uprawnienia
