Artykuł metodologiczny

Wytwarzanie rozszerzalnej matrycy mózgu, którą można dostosować na różne etapy rozwoju

DOI:

10.3791/68638

⸱

20 lutego 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Spinal Cord and Brain Injury Research Center, Department of Physiology, College of Medicine, University of Kentucky, 2Department of Biomedical Engineering, College of Engineering, University of Kentucky, 3Department of Neurosurgery, University of Kentucky

W tym artykule

Podsumowanie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Opisano innowacyjną metodę budowy rozszerzalnych macierzy mózgu do cięcia koronalnych lub strzałkowych plasterków do stosowania u noworodkowych prośiąt. To przystępne cenowo podejście wykorzystuje akrylowe płytki rzeźbione szablonami z agarozowego żelu do formowania mózgu, stosuje się do wielu gatunków i pozwala na rozszerzanie się w celu rozwoju mózgu.

Streszczenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Rosnące zainteresowanie wykorzystaniem nowo narodzonych prośi jako modelu badawczego rozwoju noworodków i patologii zwiększyło potrzebę wykonania matrycy mózgu do dokładnego pobierania sekcji histologicznych. Jednak szybki wzrost mózgu noworodka ogranicza użyteczność komercyjnie dostępnych macierzy do wąskiego okna rozwojowego. W związku z tym opracowano regulowaną metodę konstrukcji matrycy mózgu. Najpierw na mokrym lodzie umieszczono szklany pojemnik, a na dnie nakładano warstwę żelu agarozowego o stężeniu 4%. Następnie na tej warstwie umieszczono mózg związany formaliną, który został osadzony w żelu agarozowym o stężeniu 4%. Po zastygnięciu żelu żel nad mózgiem został ostrożnie usunięty, a mózg usunięty. Wnętrze wypełniono żelem agarozowym o 4% i 2% atramentem indyjskim. Po zastygnięciu blok żelowy był usuwany i krojony na pożądaną grubość (2 mm lub 5 mm) oraz orientację (koronalną lub strzałkową), aby wydrukować szablony mózgu na papierze w skali. Szablony były kopiowane na serię przezroczystych płytek akrylowych (o grubości 2 mm lub 5 mm) i odpowiednio wycięte piłą taśmową. Na koniec płyty zostały złożone i zabezpieczone trzema zestawami śrub i nakrętek przez wstępnie nawiercone otwory wyrównujące, aby zbudować spersonalizowaną matrycę mózgową. Konstrukcja zarówno macierzy koronalnych, jak i strzałkowych została zilustrowana dla mózgu noworodka w dniu 5 o stopniach 2 mm oraz matrycy koronalnej dla mózgów w dniu poporodowym 32-38 o krokach 5 mm. Poprzez dodawanie lub usuwanie odpowiednich płyt akrylowych matrycę dostosowywano do różnych rozmiarów mózgów prosiaczek. W ten sposób do środowiska badaczy neurologicznych wprowadza się prostą, opłacalną metodę dostosowania macierzy mózgu do różnych rozmiarów dużych zwierząt.

Wprowadzenie

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Rozwój mózgu prosiaczka bardzo przypomina rozwój mózgu u ludzi 1,2,3,4. W związku z tym rośnie zainteresowanie wykorzystaniem prosiatek do badań przedklinicznych zaburzeń neurorozwojowych, chorób noworodkowych i dziecięcych oraz urazów (Rysunek 1A,B)5,6,7,8,9,10. Jak widać na Rysunku 1, noworodkowy prosiaczek, jako duży model zwierzęcy, ma czaszkę i mózg bliższy rozmiarowi przedwcześniackiego ludzkiego płodu (Rysunek 1A,B), podczas gdy czaszki dorosłej myszy i szczura są co najmniej dwa magnitudy mniejsze.

Jednak stosowanie większych ssaków w badaniach biomedycznych wiąże się z wyzwaniami w porównaniu do bardziej stosowanych modeli myszy. Mózgi noworodkowych prosiaczek szybko rosną w ciągu pierwszych 3 miesięcy po urodzeniu. W ciągu pierwszych 5 tygodni życia mózg prosiatka niemal podwaja się pod względem wagi i potraja objętość (Rysunek 1C)4,11,12,13. W okresie od p5 do p38 zauważalny był wzrost i rozwój zagięć i sulezów w mózgu (rysunek 1C). Masa i objętość mózgu prosiatka p5 wynosiły odpowiednio 29,5 g i 18,9 mL, podczas gdy dwa mózgi p32 miały odpowiednio 51,4 i 52,6 g oraz 49,6 i 53,5 mL. Po 38 dniach mózg urósł do 53,7 g i 52,5 mL, co oznacza 80% wzrost masy ciała i 170% wzrost objętości w porównaniu z p5. Ten szybki wzrost mózgu noworodka świni stanowi wyzwanie dla dokładnego histologicznego przecięcia mózgów od prosiatu w różnym wieku, odmianach lub płciach, przy użyciu jednej macierzy.

Komercyjne matryce mózgowe dla prosiatek kosztują mniej więcej od 1 000 do 3 600 dolarów za sztukę i są dostępne tylko w jednym rozmiarze, przeznaczone do stosowania dla prosiatek mających 2 tygodnie lub młodszych. Chociaż istnieje kilka publikacji, które wykorzystywały technikę skanowania 3D i druku 3D do tworzenia różnych macierzy mózgu dla danio pręgowanych, myszy i ptaków 14,15,16, macierze te są stosunkowo małe. Nie istnieje ustalona seria obrazów MRI ani szczegółowej tabeli wzrostu dla mózgów noworodkowych prośiąt, zwłaszcza u osób poniżej 2 tygodni. Dlatego stworzyliśmy kilka szablonów przekrojów mózgu, korzystając z mózgów zebranych między 5. a 38. dniem, na podstawie których powstał regulowany system matrycy mózgowej.

Protokół ten opisuje innowacyjną metodę tworzenia szablonów mózgu noworodków oraz opracowywania akrylowej płytki, konfigurowalnej konstrukcji matrycy mózgu, która może być wykorzystywana do przecinania mózgu koronalnego lub strzałkowego w różnych rozmiarach.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

W tym artykule pozyskano i przygotowano cztery mózgi prosiat do barwienia histologicznego po humanitarnej eutanazji zgodnie z protokołem zatwierdzonym przez Komitet ds. Opieki i Użycia Zwierząt Instytucjonalnych (IACUC) Uniwersytetu Kentucky do osobnego badania. Wszystkie procedury na osobach zwierzęcych zostały zatwierdzone, a odpowiednio obezpiekowano zwierzęta, aby zminimalizować stres lub ból związany z leczeniem lub eutanazją.

1. Zwierzęta

  1. Pozyskaj cztery naiwne samce noworodków (dzień poporodowy 4, p4) prosto (masa ciała 1,5-1,8 kg) z genetycznym tłem 62,5% Landrace, 25% Large White i 12,5% Yorkshire.
  2. Zwierzęta trzymać razem w jednym dedykowanym pomieszczeniu w chlewce, wspierając lampę grzewczą i podłogę pokrytą ręcznikiem. Karm je ad libitum preparatem zastępczym mleka przez pierwszy tydzień, a następnie stopniowo przechodź na granulki po 2-3 tygodniach.
  3. Monitoruj aktywność fizjologiczną i masę ciała oraz wykonuj cotygodniowe badania MRI pod znieczuleniem izofluoranowym.
  4. Uśpienie przedawkowaniem pentobarbitalu i przekrzdenkowe przedawkowanie solą fizjologiczną heparynowaną, a następnie 10% neutralną formaliną buforowaną.
  5. Rozcinamy mózg od czaszki17, naprawiam formaliną przez noc, a następnie wlej 30% sacharozy do PBS na 3 dni do krioprezerwacji.

2. Formowanie żelowe agarozy

  1. Zanurz szklany pojemnik w wiadrze z mokrym lodem do połowy wysokości (Rysunek 2A).
  2. Użyj wytrzymałego plastikowego paska jako wyściełki do pojemnika i upewnij się, że spód i boczne ścianki są całkowicie zakryte, zostawiając oba końce co najmniej 5 cm powyżej górnej krawędzi.
  3. Podgrzej 150 mL PBS w szklanej zlewce do 90 °C na gorącej płycie mieszającej za pomocą mieszadła magnetycznego, a następnie stopniowo dodaj i rozpuszczaj 6 g agarozy, aby uzyskać 4% żelu agarozowego w PBS.
  4. Wlej warstwę o grubości 0,5-1 cm do szklanego pojemnika (rysunek 2B) i poczekaj, aż zastygnie.
  5. Nałóż cienką warstwę oleju mineralnego miejscowo na mózg (rysunek 2C) i umieść mózg na warstwie żelowej (rysunek 2D).
  6. Pozwól roztworowi agarozy ostygnąć do 50 °C. Osadz mózg w schłodzonym żelu agarozowym (Rysunek 2E) i pozwól zastygnąć (Rysunek 2F), co zazwyczaj zajmuje ~10 minut na mokrym lodzie.
  7. Ostrożnie usuń wierzchnią warstwę żelu agarozowego nad mózgiem (rysunek 2G) sondą chirurgiczną i wyciągnij mózg z zastygłej formy (rysunek 2H,I).
  8. Podgrzej 98 mL PBS w kolejnej szklanej zlewce do 90 °C na gorącej płycie mieszającej magnes, dodaj 4 g agarozy i 2 mL atramentu indyjskiego, a następnie pozwól dobrze wymieszać i wymieszać. Wlej 4% agarozy z 2% indyjskiego tuszu do jamy pozostawionej po wyekstrahowanym mózgu (rysunek 2J) aż do pełna, i pozwól jej stwardnieć na mokrym lodzie przez 15 minut (rysunek 2K).
  9. Używając wystających fragmentów plastikowego paska, podnieś plastikowy pasek, aby usunąć cały blok agarozy z pojemnika (Rysunek 2L).

3. Cięcie bloków agarozowych i kopiowanie szablonów na papier w skali

  1. Aby chronić papier przed wilgocią podczas krojenia, umieść jeden kawałek papieru skalowego pomiędzy dwoma przezroczystymi akrylowymi płytkami o grubości 0,76 mm (0,03") (Rysunek 3A) i umieść laminowaną płytkę papierowo-akrylową blisko krawędzi stołu.
  2. Przymocuj kwadraty narożne do stołu za pomocą zacisków w odpowiedniej pozycji, aby utrzymać dwie akrylowe płytki o grubości 5 mm i mocno trzymać blok żelowy pomiędzy nimi w pożądanej orientacji (strzałkowy na Rysunku 3). Upewnij się, że krawędź każdej pionowej płytki akrylowej jest wyrównana do tej samej linii na papierze skalowym, aby służyć jako odniesienie do cięcia bloku żelu. Użyj ciężarka, aby zabezpieczyć blok żelowy na końcu przeciwnym od miejsca cięcia (Rysunek 3B).
  3. Korzystając z papieru skalowego pod spodem jako przewodnika, przesuń blok żelowy do przodu między płytkami akrylowymi w pożądanym kroku (2 mm lub 5 mm), trzymaj ostrze mikrotomu obiema rękami i przetnij część poza przednią krawędź płytki akrylowej (rysunek 3B).
  4. Zbierz każdy kawałek (Rysunek 3C), połóż go na osobnym papierze w skali (Rysunek 3D), delikatnie dociskaj indyjski tusz na papierze skalowym, aby przenieść kontur (Rysunek 3E), obrysuj cały sekcję żelu długopisem, usuń sekcję żelową i obrysuj indyjski tusz również długopisem (Rysunek 3F). Zwróć uwagę, aby orientacja każdego fragmentu i skopiowany szablon były spójne.
  5. Powtarzaj kroki 2.3 i 2.4, aż wszystkie kawałki żelu zostaną skopiowane na papier do wagi i ponumerowane kolejno. Ponownie sprawdź przekroje i ich odciski (reprezentatywne obrazy koronalnych przekrojów i odcisków na Rysunku 3G,H).

4. Rzeźbienie akrylowe na płytach

  1. Wytnij rowki na dużej akrylowej płyce, używając noża do cięcia pleksi, a duże płytki rozłamuj na kawałki o wymiarach 10 x 8,5 cm.
    UWAGA: Całkowita liczba kawałków zależy od wielkości mózgu, pożądanej grubości kawałka oraz orientacji cięcia. Zazwyczaj przygotowujemy 25 kawałków akrylowych płytek o średnicy 2 mm do matrycy koronnej lub strzałkowej dla mózgów noworodków oraz 15 płytek o średnicy 5 mm dla większych mózgów, co ułatwia obsługę.
  2. Oznacz trzy otwory kotwiczeniowe na akrylowej płycie na współrzędnych x, y, mierzone od lewego dolnego rogu (w mm): (11, 42); (45, 15); oraz (88, 42).
  3. Zabezpiecz płytki akrylowe za pomocą narożnych kwadratów i zacisków na platformie wiertarki. Wywierć trzy otwory kotwiczeniowe na wymienionych współrzędnych wiertłem akrylowym (rysunek 4A). Narysuj kolorową linię po prawej stronie wszystkich tablic, aby wskazać orientację.
  4. Usuń folię ochronną z płyty akrylowej i umieść ją nad szablonem na papierze skalowym, wyrównując górną krawędź płyty akrylowej z górnymi liniami szablonu, który został skopiowany na papierze w skali. Narysuj kontur mózgu na akrylowej płycie markerem permanentnym (rysunek 4B). Oznaczaj tablicę sekwencyjnie, tak jak w szablonie.
  5. Wytnij akrylową płytkę na piłce taśmowej wzdłuż linii szablonu (rysunek 4C). Alternatywnie użyj narzędzia obrotowego z wielofunkcyjnym zestawem do cięcia i końcówką do rzeźbienia drewna, aby usunąć niepożądane miejsca.
  6. Poleruj krawędź tnącą za pomocą narzędzia obrotowego z końcówką szlifierską do wygładzania krawędzi pozostawionych przez narzędzie tnące (Rysunek 4D).
  7. Ponownie sprawdź cięcia na płytkach akrylowych względem szablonu na papierze skalowanym (rysunek 4E). Przytnij i wypoleruj, jeśli trzeba.
  8. Wstępnie złóż macierz, układając wycięte płyty w kolejności kolejnej i sprawdzając ich wyrównanie (Rysunek 4F).

5. Składanie i rozszerzanie macierzy mózgu

  1. Umieść trzy podkładki pomiędzy akrylowymi płytami, każda wyśrodkowana wokół jednego otworu kotwiącego (Rysunek 5A). Przyklej je wokół otworów mocujących superglue po tej samej stronie wszystkich płyt akrylowych, aby skrócić czas montażu (rysunek 5A).
  2. Układaj płyty akrylowe kolejno, wprowadzaj śruby ze stali nierdzewnej przez każdy otwór kotwiący, aby złożyć matrycę, i dokręć nakrętki do zabezpieczenia (rysunek 5A).
  3. Na koniec poleruj wycięte krawędzie, które będą stykać się z mózgami, aby wygładzić płyty.
  4. Oznacz kolorami górną część macierzy, aby ułatwić identyfikację kroków podczas cięcia. Alternatywnie pokoloruj górne krawędzie płyty na czarno, czerwono, a następnie na blank, aby utworzyć wzór. Powtarzaj ten krok, aż wszystkie tablice będą oznaczone tym samym wzorem kolorowym (rysunek 5).
  5. Aby dostosować geometrię lub rozmiar wnęki, aby lepiej pasowała do określonych mózgów, usuń lub dodaj wybrane płytki akrylowe (rysunek 5B), aby dostosować się do różnych rozmiarów mózgów, co znacznie zwiększa elastyczność tych macierzy i pozwala zaoszczędzić materiał oraz nakład pracy.

6. Koronalne lub strzałkowe cięcie mózgu

  1. Owiń jeden koniec ostrza kriostatu o wysokim profilu taśmą laboratoryjną na co najmniej 2 cm długości, aby chronić dłoń użytkownika. Umieść mózg bezpiecznie w jamie matrycy. Trzymając owinięty koniec ostrza, ostrożnie umieść ostrze między akrylowymi płytkami matrycy, a następnie przetnij mózg na koronalne lub strzałkowe cięcia, podtrzymując mózg i zabezpieczony drugą ręką (rysunek 6A,B).
    UWAGA: Uwaga: 1) Ponieważ każda część mózgu ma inną teksturę po utrwaleniu formaliny, należy zachować ostrożność, aby wywierać równomierny nacisk na ostrze. 2) Co więcej, mózg prosiatka jest duży, więc lepiej użyć ruchu cięcia niż bezpośredniego "pchania" w dół. 3) Kluczowe jest, aby mózg ściśle pasował do matrycy z pomocą drugiej ręki podczas cięcia, aby uniknąć przechyleń lub zmian jego orientacji. Nadmiernego nacisku na mózg na matrycę należy zawsze unikać.
  2. Wszystkie plasterki włóż do talerza z PBS na 6 dołków lub do stalowej tacy. Ostrożnie układaj kawałki w tej samej orientacji (rysunek 6C,D) i zachowuj lub kontynuuj w razie potrzeby.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Jedno prosięcie zostało uśpione po przedawkowaniu pentobarbitalu w wieku 5 lat. Pozostałe trzy zwierzęta wykazywały prawidłową aktywność fizjologiczną i podobny przyrost masy ciała (osiągając 7,44-8,4 kg). Dwa prosięta otrzymywały cotygodniowe badania MRI pod znieczuleniem izofluranowym, aż do uśpienia na p32. Czwarte prosiętko pozostało naiwne aż do eutanazji na stronie 38.

Podobieństwo wielkości głowy między prosiakiem a płodem ludzkim można zobaczyć na Rysunku 1A,B

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Protokół ten przedstawia metodologię tworzenia przystępnych cenowo i łatwych do zbudowania macierzy mózgowych, które mogą być użyte do wspomagania cięcia mózgu prosiatka lub dowolnego innego gatunku dużych zwierząt w pożądanej orientacji i grubości. Co ważne, w przeciwieństwie do komercyjnych macierzy o "stałym rozmiarze", które działają tylko z ograniczonym zakresem rozmiarów mózgu, to podejście pozwala na wygodną korektę lub powiększenie macierzy tak, aby pasowała do szerokiego zakresu rozmiarów mózgu. W tym raporcie z...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Autorzy nie mają żadnych konfliktów interesów do ujawnienia.

Podziękowania

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,

Prace te były wspierane przez National Institutes of Health (NIH) #R21-NS114771 (K.E.S.), #R56-NS117587, #R01-EB028792, #R01-HD101508, #R21-HD091118, #R41-NS122722, #R42-MH135825 (G.Y.), American Heart Association (AHA) #16GRNT30820006 (G.Y.) i #14SDG20480186 (L.C.) oraz Priorytetowy Obszar Badań Neurobiologii Uniwersytetu Kentucky (L.C.). Naiwne samce noworodków zostały zakupione przez Wydział Zasobów Zwierząt Laboratoryjnych (DLAR) od Centrum Chlewiej Wydziału Rolnictwa Uniwersytetu Kentucky.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
1/4"-20 x 3-1/2" śruba maszynowa z głowicą kratownicową ze stali nierdzewnej (25 części), gwint gruby, stal nierdzewna 18-8 (304), za pomocą łącznika śrubSuwak zamkahttps://www.amazon.com/
Stala-Phillips-Machine
-Bolt-Dropper/dp/B07D1L8
7VB/ref=sr_1_2?crid=38M
PNERXG39Q3& Słowa kluczowe
=1%2F4%22+3,5+cal+
stal nierdzewna+śruby& qid=16427
82626& s=industrial& sprefiks
=1%2F4+3,5+inch+stal nierdzewna
+bolts%2Cindustrial%2C62
& sr=1-2
10 opakowań 8 x 10" Panele PET Sheet/Plexi 0,03" Gruba  CALPALMYhttps://www.amazon.com/dp
/B084P4YSST/?coliid=I1S59
82XD9P6CB& colid=XJ78FAX
D85BF& psc=1& ref_=lv_ov_lig_dp_it
3 opakowania 3/16" (4,5 mm) przezroczystej płyty akrylowej o wymiarach 8" x 12" odlewanej z pleksi (0,177") Gruby nominalny rozmiar AZMEkspozycje AZMhttps://www.amazon.com/4-5mm
-Akryl-Plexiglass-Nominal-AZM
/dp/B082CGYSCK/ref=sr_1_12?
dchild=1& słowa kluczowe=akryl+arkusz %2C+4,5mm& qid=1617572206& sr=8-12
3  Podkładka skracająca ramiona płaska; Podkładka, stal nierdzewna 18-8, śruba 1/2", średnica 0,501", średnica 0,750", grubość 0,016" (opakowanie 50 sztuk)Małe partiehttps://www.amazon.com/Shoulder-
Shortening-Washer-Stalless-Stee
l-0-251/dp/B004K1FFZA/ref=sr_1_
3?crid=1K8LO0VN4GLE& dchild=1
& słowa kluczowe=Pralki& pd_rd_r=
0ffe510e-abe5-4eae-b975-ed945
08ac71a& pd_rd_w=HuED5& pd_r
d_wg=fixK7& pf_rd_p=b4950e17-f
2f6-494c-bba5-69a9d0aa3887& pf
_rd_r=BRVGS2378CHD1WBC2E
4P& pid=3tntl8w& qid=1617573484
& refinements=p_n_feature_twenty
_browse-bin%3A17420898011%2
Cp_n_feature_twenty-one_browse
-bin%3A19047154011& S=Industria
L& sprefix=washer%2Bfor%2B%2C
aps%2C202& sr=1-3& th=1
Płyta 6 studniAvantor76520-650
8-32 nakrętka sześciokątna, gruba gwint sześciokątna, 18-8 stalowa siodełka sześciokątna, srebrny ton, ?100 części?Fullerkreghttps://www.amazon.com/Fullerkreg
-Maszyna-Stala-Jasna-Ilość/
dp/B078S3J765/ref=sr_1_4?crid=4
VSSI5B9MJ2D& słowa kluczowe=1%2F4
%22-20+cal+Stal+
Hex+nut+grubo-gwint& qid=1
642782823& s=industrial& sprefiks
=1%2F4+-20+inch+stainless+ste
el+hex+nut+coarse+thread%2Cin
dustrial%2C61& sr=1-4
Kwadraty do pozycji 90 stopni Stop aluminiumHINMAYhttps://www.amazon.com/Positioni
ng-Aluminium-Woodworking-Carp
enter-Clamping/dp/B08294FZ7L/r
ef=sr_1_6?crid=1I97TLVRYREPQ
& dchild=1& keywords=corner+squ
are& qid=1625683905& sprefix=co
rner+squ%2Caps%2C182& sr=8-6
agarozaAvantor97062-244
piła taśmowaSKIL
Zamiennik mleka Birthright (Pipestone)PipestoneSKU  8229https://pipevet.com/birthright-baby-pig-milk-replacer
wiadroAvantor89233-340
Zestaw narzędzi obrotowych Dremel 4300-5/40 o wysokiej wydajnościDremelhttps://www.amazon.com/dp/B0
1M1SJNVU/?coliid=IMLRI62ZL
JTSJ& colid=2XZ304Y9M7PV7
& psc=1& ref_=lv_ov_lig_dp_it
Wiertła do plastiku (akryl, pleksi, ABS, leksan, poliwęglan, PVC)FTMhttps://www.amazon.com/dp/B
07D1B3B51/?coliid=I26RS6UP
UJ3P1Y& colid=2XZ304Y9M7P
V7& psc=1& ref_=lv_ov_lig_dp_it
szklana zlewka x 2Avantor470335-854
Szklane pojemnikiNaczynia do barwienia WheatonWHEATON®   900303
Notes na papier milimetrowy: 1 mm cienkie i o 10 mm grubsze jasnoszare linie siatki (metryczne, 120 stron):https://www.amazon.com/
Papier-milimetrowy-zeszyt-
dwustronny-nieperforowany
/dp/154319026X/ref=sr_1_13?
dchild=1& słowa kluczowe=milimetr
+papier& qid=1617634163& sr=8-13
MIKROTOMOWY NÓŻ HACKER INSTRUMENTSHACKER INSTRUMENTS
Wytrzymały plastikowy pasekAvantor89072-136
India InkSpeedball SUPER BLACK
IRWIN QUICK-GRIP Zaciski, jednoręczne, minibar, 6-calowy, 4-pack (1964758)IRWINhttps://www.amazon.com/IRWIN
-QUICK-GRIP-1964758-One-
Handed-Clamp/dp/B001DSY4
QO/ref=sr_1_5?crid=3NJ320
86LJCS6& dchild=1& Słowa kluczowe
=zaciski+dla+stolarstwo& qid
=1617634545& sprefix=clamp%
2Caps%2C184& sr=8-5
Kreg KHC-Premium Ośmówka do przodu  Kreghttps://www.amazon.com/KREG
-KHC-PREMIUM-Kreg-Face-
Clamp/dp/B001DC9UR8/ref=sxin
_11?ascsubtag=amzn1.osa.27
eddff2-544b-4c29-9242-220b3f
760cb0. ATVPDKIKX0DER.en_
USA i creativeASIN=B001DC9UR
8& crid=3NJ32086LJCS6& cv_ct_
cx=zaciski+for+stolarstwo& CV
_ct_id=AMZN1.OSA.27EDDFF2-544B
-4C29-9242-220B3F760CB0. ATVP
DKIKX0DER.en_US& cv_ct_pg=
search& cv_ct_we=asin& cv_ct_wn
=osp-single-source-earns-comm&
dziecko=1& słowa kluczowe=zaciski+dla+
stolarstwo & linkCode=oas& pd_r
d_i=B001DC9UR8& pd_rd_r=eeaf7
178-eee3-4399-862a-479ffb6cfc3&
pd_rd_w=W3Inj& pd_rd_wg=PKPUl&
pf_rd_p=e666D5aa-04ca-46aa-86b0-
07ac28e037d4& pf_rd_r=22RKP4S4S
SS5PYDM2ZFD& qid=1617634545& s
prefiks=clamp%2Caps%2C184& SR=1-
2-64F3A41A-73CA-403A-923C-8152C4
5485FE& tag=thisoldhouse05-20
taśma laboratoryjnaAvantor76276-016
Loctite 1363589 4-gramowa butelka z ultrażelowym klejem kontrolującym, 3-pakietLoctitehttps://www.amazon.com/Loctite-
1363589-4-Gram-Control-Adhesive/
dp/B01HPT0AWQ/ref=sr_1_13?
słowa kluczowe=superglue+power+glue
+for+plastic& qid=1642782991& s
prefiks=superglue%2Caps%2C83& sr=8-13
Jednorazowe łopatka Microtome o profiluOptymalna naukahttps://www.amazon.com/Optimal
-Naukowy-mikrotomowy-Wysoki profil
-Jednorazowy/dp/B08MCSN6SL/ref
=sr_1_1?dchild=1& keywords=hig
h+profile+cryostat+blade& qid=16
17592221& sr=8-1
Olej mineralnySigma-AldrichM8410-100ml
PBSAvantor97062-818
Końcówka szlifierska do polerowania20 części węglika z żarnem 1/8" trzpień
Granulki przedstarterowe Non-Med - #50 (Pipestone)PipestoneSKU  8228https://pipevet.com/pre-starter-pellet-non-med-50-hubbard
Red Devil 1170 PLEXIGLASS Narzędzie do cięcia KARTOWANECzerwony Diabełhttps://www.amazon.com/dp
/B000BZZ1D0/?coliid=I3C0K3
AKD3TS75& colid=XJ78FAXD8
5BF& psc=1& ref_=lv_ov_lig_dp_it
Markery permanentne Markery Sharpie | Znaczniki do końca dłutaSharpiehttps://www.amazon.com/
Markery markerów permanentnych
-Dłuto klasyczne/dp/B00006IFI
A/ref=sr_1_8?crid=2GD78WJ5COF
NN& słowa kluczowe=permanent+marker
s+assorted+colors& qid=16427831
06& sprefiks=permanent+markers%
2Caps%2C129& sr=8-8
Mieszanie płyty grzewczeCorning100493-718
Mieszanie magentVWR58948-138
STYLEZONE 10 Pieces Przezroczyste przezroczyste arkusze akrylowe 8 x 10 cali 0,08 cala o grubości 2 mmStylezonehttps://www.amazon.com/dp/
B08GJYS4TT/?coliid=I11RLE
V42BKEFB& colid=XJ78FAX
D85BF& psc=1& ref_=lv_ov_lig_dp_it
Tacka chirurgicznaAvantor10193-194
Mokry lódLaboratoryjnie wykonany
Wskazówka do drewna CarvignNarzędzia do rzeźbienia drewna do narzędzi obrotowychhttps://www.amazon.com/
stores/page/28E50A85-D8C
1-4669-8272-D5D435EA126F

Bibliografia

$$\rightleftharpoonup{xx}$$ $$\longleftharp{xx}$$, $$\longrightharp{xx}$$,
  1. Jelsing, J., et al. The postnatal development of neocortical neurons and glial cells in the Gottingen minipig and the domestic pig brain. J Exp Biol. 209 (Pt 8), 1454-1462 (2006).
  2. Conrad, M. S., Dilger, R. N., Johnson, R. W. Brain growth of the domestic pig (Sus scrofa) from 2 to 24 weeks of age: a longitudinal MRI study. Dev Neurosci. 34 (4), 291-298 (2012).
  3. Conrad, M. S., Dilger, R. N., Nickolls, A., Johnson, R. W. Magnetic resonance imaging of the neonatal piglet brain. Pediatr Res. 71 (2), 179-184 (2012).
  4. Dobbing, J. The later growth of the brain and its vulnerability. Pediatrics. 53 (1), 2-6 (1974).
  5. Sorby-Adams, A. J., Vink, R., Turner, R. J. Large animal models of stroke and traumatic brain injury as translational tools. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 315 (2), R165-R190 (2018).
  6. Sauleau, P., Lapouble, E., Val-Laillet, D., Malbert, C. H. The pig model in brain imaging and neurosurgery. Animal. 3 (8), 1138-1151 (2009).
  7. Huang, C., et al. Speckle contrast diffuse correlation tomography of cerebral blood flow in perinatal disease model of neonatal piglets. J Biophotonics. 14 (4), 2021(2021).
  8. Dobbing, J., Sands, J. Quantitative growth and development of human brain. Arch Dis Child. 48 (10), 757-767 (1973).
  9. Lossi, L., D'Angelo, L., De Girolamo, P., Merighi, A. Anatomical features for an adequate choice of experimental animal model in biomedicine: II. small laboratory rodents, rabbit, and pig. Ann Anat. 204, 11-28 (2016).
  10. Lind, N. M., et al. The use of pigs in neuroscience: modeling brain disorders. Neurosci Biobehav Rev. 31 (5), 728-751 (2007).
  11. Andersen, A. D., et al. Delayed growth, motor function and learning in preterm pigs during early postnatal life. Am J Physiol Regul Integr Comp Physiol. 310 (6), R481-R492 (2016).
  12. Desantis, S., Minervini, S., Zallocco, L., Cozzi, B., Pirone, A. Age-related changes in the primary motor cortex of newborn to adult domestic pig Sus scrofa domesticus. Animals (Basel). 11 (7), 2019(2021).
  13. Pond, W. G., et al. Perinatal ontogeny of brain growth in the domestic pig. Proc Soc Exp Biol Med. 223 (1), 102-108 (2000).
  14. Huang, C. C., Chen, Y. Y., Fang, Y. T., Chen, Y. C., Hung, C. M. Generating brain matrices for zebra finch brain sectioning using three-dimensional printing technology. J Neurosci Methods. 327, 108399(2019).
  15. Yamazaki, Y., Yuguchi, M., Honjo, B., Isokawa, K. Design and fabrication of customized brain slice matrices using CAD and 3D printing technology. PLoS One. 20 (1), e0317616(2025).
  16. Lattin, C. R., et al. A 3D-printed modular device for imaging the brain of small birds. J Neurosci Methods. 293, 183-190 (2018).
  17. Fleming, S. A., Monaikul, S., Mudd, A. T., Jacob, R., Dilger, R. N. Extraction and dissection of the domesticated pig brain. J Vis Exp. (170), e62030(2021).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Poproś o pozwolenie na ponowne wykorzystanie tekstu lub ilustracji tego artykułu JoVE

Poproś o pozwolenie

Tagi

Wytwarzanie matrycy m zguprzekroje m zgu prosi ciakonfigurowalna matryca m zgumatryca z p yty akrylowejagaroza do odlewu m zgukoronalne krojenie m zgustrza kowe krojenie m zguneuronauka du ych zwierz trozwojowy model m zgu

Powiązane artykuły