Protokół ten opisuje technikę chirurgiczną pobierania ludzkiego modelu płata perforatora opartego na głębokim dolnym szypułku tętnicy nadbrzuszkowej, przeznaczonego do badań eksperymentalnych.
Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.
Artykuł metodologiczny
Protokół ten opisuje technikę chirurgiczną pobierania ludzkiego modelu płata perforatora opartego na głębokim dolnym szypułku tętnicy nadbrzuszkowej, przeznaczonego do badań eksperymentalnych.
Ostatnio pojawiły się metody konserwacji, takie jak wstrzykiwanie środków cytoprotekcyjnych, perfuzja maszyn ex vivo oraz superchłodzenie, które pomagają długoterminowo zachować zarówno narządy standardowe, jak i marginalne poprzez łagodzenie uszkodzeń niedokrwiennych i hipoksycznych. Choć zachęcające, jego zastosowanie w dziedzinie naczynowo-kompozytowej allotransplantacji (VCA) pozostaje w dużej mierze ograniczone do badań przedklinicznych. Dotychczas większość badań nad strategiami perfuzji VCA opierała się na modelach zwierzęcych, szczególnie na kompozytach świń lub gryzoni. Chociaż modele te dostarczają cennych informacji mechanistycznych, ich różnice anatomiczne, immunologiczne i fizjologiczne ograniczają powtarzalność i znaczenie translacyjne dla zastosowań u ludzi.
W tym protokole szczegółowo opisano każdy krok chirurgiczny wymagany do pozyskania ludzkiego płata głęboko dolnego perforatora nadbrzuszka (DIEP) do badań konserwatorskich. Perforator jest przecięty powyżej powięzi bez żadnej sekcji podpowięziowej, co daje krótki, ale wystarczający pedikul do cewnikowania. Model ten wykorzystuje odrzuconą tkankę ze standardowych procedur abdominoplastyki, nie stwarzając dodatkowego ryzyka dla pacjenta. Przedstawiono kluczowe kroki, aby zapewnić pobranie funkcjonalnego płata bez przedłużania czasu operacji lub narażania bezpieczeństwa pacjenta. Następnie wykonywane jest obrazowanie funkcjonalne, aby potwierdzić żywotność płatów przed zastosowaniem eksperymentalnym, a następnie mogą być przeprowadzane sekwencyjne biopsje w celu śledzenia integralności tkanek. Model ten jest szczególnie odpowiedni do badań dotyczących procedur VCA oszczędzających mięśnie — takich jak częściowy przeszczep twarzy — i może mieć również znaczenie dla badań nad autologicznym zachowaniem wolnych płatów.
Naczyniowa kompozytowa allotransplantacja (VCA) stanowi obiecujące rozwiązanie rekonstrukcyjne dla pacjentów ze złożonymi wadami tkanek, szczególnie twarzy i kończyn górnych1. Jednak VCA jest bardzo podatna na uszkodzenia spowodowane niedokrwieniem i reperfuzją, które może zagrozić żywotności przeszczepu i długoterminowym rezultatom2. W tym kontekście pojawiły się metody konserwacji, takie jak wstrzyknięcie środków cytoprotekcyjnych, perfuzja maszyn ex vivo oraz superchłodzenie, które wydłużają czas konserwacji, optymalizują jakość przeszczepów oraz umożliwiają ocenę żywotności przed przeszczepem 3,4,5,6,7. Chociaż normotermiczna perfuzja narządów stałych ex vivo została w ciągu ostatniej dekady z powodzeniem przeniesiona z eksperymentalnej techniki laboratoryjnej do praktyki klinicznej, z obiecującymi wynikami, pozostaje w dużej mierze ograniczona do badań w dziedzinie VCA9.
Do tej pory większość badań nad protokołami perfuzji VCA opierała się na modelach zwierzęcych, szczególnie na kompozytach świń lub gryzoni10. Chociaż modele te dostarczają cennych informacji, z natury ograniczają powtarzalność i znaczenie translacyjne ze względu na różnice anatomiczne, immunologiczne i fizjologiczne11,12. Modele tkanek ludzkich dostarczają bardziej istotnych informacji, ale świeże tkanki od dawców z martwymi mózgiem są niezwykle trudne do uzyskania w celach badawczych, wymagając złożonej logistyki, ścisłej zgody regulacyjnej i budzących wątpliwości etyczne13,14. Idealną alternatywą byłby model płata bez kadaveric, etycznie akceptowalny, oparty na człowieku, który nie niesie ze sobą złożoności ani ryzyka pełnego zabiegu VCA i jest całkowicie bezpieczny dla pacjenta. Co ważne, powinien być również łatwo dostępny, aby ułatwić powtarzalne, skalowalne badania.
Tutaj opisano model płata głębokiego dolnego nadbrzusznego (DIEP) dla badań nad zachowaniem VCA, wykorzystujący odrzuconą tkankę z zabiegów abdominoplastyki bez dodatkowego ryzyka dla pacjenta.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Wszyscy pacjenci otrzymali standardową opiekę humanitarną zgodnie z Deklaracją Helsińską, a protokół został zatwierdzony przez komisję etyki instytucjonalnej (projekt nr IRB00014528_2025_32). Pacjent wyraził świadomą zgodę na wykorzystanie odrzuconych tkanek do celów badawczych.
1. Opieka przedoperacyjna
UWAGA: Te płaty perforatorowe skórne, z wyłączeniem powięzi i mięśni, pochodzą z odpadów chirurgicznych u pacjentów, najczęściej po bariatryczności, i mogą być pobierane tylko w przypadkach wcześniejszej dermolipektomii z przewidywalną transpozycją pępkową (czyli istotną pannus brzuszną). Planowana liposukcja podczas zabiegu jest kryterium wykluczenia. Równoczesna naprawa diastazy nie jest przeciwwskazaniem, ponieważ zabieg ten odbywa się po odebraniu płata. Pannus brzuszny zazwyczaj zapewnia przynajmniej częściowe pokrycie okolicy łonowej. Pacjenci nie mogą mieć historii zdarzeń zakrzepowiowych, a wskaźnik masy ciała (BMI) musi być poniżej 30 kg/m², ponieważ wyższe wartości wiążą się z otyłością i niekorzystnym stosunkiem ryzyka do korzyści przy planowych zabiegach nieistotnych w znieczuleniu ogólnym. Poprzednie operacje jamy brzusznej, z wyjątkiem liposukcji, zazwyczaj nie stanowią przeciwwskazania, pod warunkiem, że perforator zostanie zidentyfikowany za pomocą badania Dopplera lub bezpośrednio zobrazowany wewnątrzoperacyjnie. Tej procedury badawczej należy również unikać w prawdziwych klinicznych jednostronnych rekonstrukcjach DIEP z wolnymi płatami, które już są długotrwałymi i złożonymi operacjami, gdzie dodatkowe kroki przedoperacyjne byłyby irracjonalne i zwiększałyby ryzyko proceduralne.

Rysunek 1: Ocena przedoperacyjna przed pobariatryczną dermolipektomią jamy brzusznej z pobraniem płatów DIEP. (A) Przedoperacyjne oznaczanie wykonane za pomocą akustycznego Dopplera i dermograficznego długopisu w celu identyfikacji i wyznaczenia perforatorów przypępowiowych po obu stronach linii środkowej. (B) Chirurg wykazuje wiotkość skóry brzucha i tkanki podskórnej do resekcji, podkreślając nacięcie mięśnia adipokutanealnego przed nacięciem wzdłuż poziomej linii znakowania. Proszę kliknąć tutaj, aby zobaczyć większą wersję tej figurki.
2. Pozyskiwanie płatek

Rysunek 2: Widok śródoperacyjny zabiegu dermolipektomii brzusznej ze szkieletyzacją głębokich dolnych pierdzielnic nadbrzuszka. Obraz pokazuje pole operacyjne przed rozwarstwieniem pępkowym i podłużnym podziałem śródpębkowym. Dwa dominujące dwustronne podpępkowe, głębokie dolne perforatory nadbrzuszkowe są odsłonięte i podświetlane narzędziami chirurgicznymi. Proszę kliknąć tutaj, aby zobaczyć większą wersję tej figurki.

Rysunek 3: Widok śródoperacyjny po rozwarstwieniu nadpębkowym, pokazujący obustronne głębokie dolne perforatory nadbrzuszkowe. Pierforatory nie są podwiązowane, a ich przebieg i długość podpowięzi można lepiej docenić pod delikatnym naciskiem (białe strzałki). Proszę kliknąć tutaj, aby zobaczyć większą wersję tej figurki.

Rysunek 4: Widok śródoperacyjny pokazujący płaty DIEP obrysowane na skórze w kształcie eliptycznym przed podwiązaniem. (A) Wiosło skórne jest regulowane i obrysowane w kształcie eliptycznym za pomocą dermograficznego długopisu (białego koła), aby zapewnić włączenie perforatora wzdłuż przyśrodkowej krawędzi płata po obu stronach mięśnia okołowego adipocutane. (B) Powiększony widok pokazujący zarys płata DIEP oraz perforator oznaczony literą "x" zgodnie z przedoperacyjnym mapowaniem Dopplera (biała strzałka). Proszę kliknąć tutaj, aby zobaczyć większą wersję tej figurki.
Ilustracja uzupełniająca 1: Trakcja w dół na górnej części płata brzucha pomaga określić ilość nadmiarowej skóry do resekcji. Długi koniec niewchłanialnego szwu środkowego łączącego obszary nadpębkowe i łonowe służy jako przewodnik. Za pomocą dermograficznego długopisu narysuj linię resekcji wzdłuż szwu (białe strzałki) na redundantnym adipokutanym panniculus. Przedłuż tę linię boczną w kierunku każdego przedniego górnego kolca biodrowego. Klapy DIEP znajdują się poniżej tej oznaczonej linii resekcji. Proszę kliknąć tutaj, aby pobrać ten plik.

Rysunek 5: Widok wewnątrzoperacyjny głębokich płatów perforatora tętnicy nadbrzusznej dolnej (DIEP) podczas pobrania, po podwiązaniu opiekuna odrążkowego. (A) Płat DIEP, o wymiarach około 10 cm × 6 cm, jest wyznaczany markerem chirurgicznym po lokalizacji perforatora. (B) Nacięcie skóry i pobieranie płatów wykonuje się zgodnie z wcześniej ustalonymi oznaczeniami. Początkowe nacięcie wykonuje się ostrzem nr 15, następnie następuje sekcja za pomocą monopunktycznego elektrokauteru ustawionego na około 50-60 °C oraz 80 W w trybie krzepnięcia, gdy nadmiar tkanki skórnej tłuszczowej pozostaje przyczepiony do pacjenta. Gdy tkanka zostaje całkowicie odłączona, do zakończenia rozdzielenia używa się sterylnego, jednorazowego, zasilanego baterii jednorazowego pióra do kauteryzacji (duży czubek, około 1200 °C). Proszę kliknąć tutaj, aby zobaczyć większą wersję tej figurki.
3. Przygotowanie klapy

Rysunek 6: Widok po zbiorze badawczego płata DIEP. (A) Pobrany płat DIEP pokazano z rozciętym i izolowanym szypką naczyniową za pomocą kleszczy mikrochirurgicznych. Koniec tętnicy jest przycięty o kilka milimetrów, aby uzyskać czyste cięcie, a lumen delikatnie otwiera się kleszcze mikrorozszerzające. (B) Zbliżenie pokazujące mikrochirurgiczne kleszcze zabezpieczające dominującą tętnicę perforatorową, z cewnikem 24 G wprowadzonym do lumenu do wstrzyknięcia środka kontrastowego. Proszę kliknąć tutaj, aby zobaczyć większą wersję tej figurki.

Rysunek 7: Cewnikowanie pedikula płatowego DIEP. (A) Cewnik jest mocowany delikatnie zawiązanym jedwabnym szwem 5-0, aby nie zatkać światła oczka. (B) Widok cewnika umieszczonego bez podłączonej strzykawki, pokazujący zakres wszczepienia cewnika do światła naczyniowego. Proszę kliknąć tutaj, aby zobaczyć większą wersję tej figurki.

Rysunek 8: Fluoroskopia po-harvest płata DIEP demonstrująca anatomię naczyniową. (A,B) Kontrast jest wstrzykany przez cewnik 24-G do tętnicy perforacyjnej dominującej, przedstawiając wzór rozgałęzienia i obszar naczyniowy, potwierdzając żywotność płata na dwóch różnych płatach. Proszę kliknąć tutaj, aby zobaczyć większą wersję tej figurki.
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Pobrano jedenaście płatów od sześciu pacjentek biorących udział w badaniu. Dwóch starszych chirurgów plastycznych, doświadczonych w operacjach płatowych i abdominoplastyce, przeprowadziło sekcje. U jednego pacjenta płat został pobrany jednostronnie z powodu problemu z rozwarstwieniem. Pobrane płaty miały średnią masę 198,6 ± 24,4 g (n = 11) oraz średni rozmiar 10 cm × 6 cm, co odpowiadało wymaganiom próbek do badania konserwatorskiego, w którym te płaty były używane. Długość oczka, mierzona przy łagodnym napięciu, wynosi...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Modele ludzkie pomagają łączyć wyniki badań na zwierzętach z praktyką kliniczną, poprawiając znaczenie i predykcyjność badań przedklinicznych 16,17,18. Muszą być starannie zaprojektowane, aby zapewnić bezpieczeństwo i etyczną zgodność, często ograniczając zakres i inwazję eksperymentów17. Na czterech pobranych płatach nie było potrzeby dalszego sekcjonowania i nie było znaczącego wydłużenia czasu operacyj...
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.
Autorzy nie mają nic do ujawnienia.
| Nazwa | Firma | Numer katalogowy | Komentarze |
|---|---|---|---|
| 1 mL i 5 mL strzykawki Luer-Lok | Becton Dickinson | https://www.bd.com/en-us/products-and-solutions/products/product-page.309646 | |
| 11,5" Średni i mały Premium Surgiclip II Auto Suture do klipsa do okrętu | Covidien | Nie ma | |
| 22– grot z kaniulą 24 G | Medtronic Inc | Nie ma | |
| 5-0 szw jedwabny | Nie ma | Dowolny zgodny szew | |
| Jednorazowe, zasilane bateriami jednorazowe pióro do żalnika; | Helpmedical, Europa | Nie ma | 1200 stopni i stopień; C, duży czubek |
| Kleszcze Adson | MPM | 106-2112A | |
| Kleszcze do krzepnięcia dwubiegunowego | Olsen | 20-1320I | |
| Jednorazowy skalpel #15 i #21 | Sklar | Nie ma | |
| Eosin | Microm Microtech | U/C0363 | |
| Retraktory Faraboeufa | Medicta Instruments | Nie ma | |
| Kauter cienkiej igły | Cormedica | Nie ma | |
| OEC MiniView Max | GE Healthcare | Nie ma | System fluoroskopowy |
| Rozszerzacze kleszcze | WPI | 15910 | |
| Hematoksylina | Microm Microtech | U/C0303 | |
| Iohexol 300 mg I/mL | GE Healthcare Canada Inc. | Nie ma | |
| Mikronożyczki | WPI | 504492 | |
| Valleylab Monopolar Diathermy | Medtronic Inc | ||
| Niejonowy jodowany środek kontrastowy, Omnipaque 300 mg I/mL | GE Healthcare | Nie ma | |
| Przenośny akustyczny Doppler, 8 MHz | Parks Medical Electronics | https://www.parksmed.com/ | |
| Roztwór soli fizjologicznej 0,9% | GenDepot | S0600-101 | |
| Standardowy zestaw narzędzi chirurgii plastycznej | Aesculap | Nie ma | w tym trzonki skalpelowe nr 3, nożyczki Metzenbaum i Mayo, kleszcze Adson i Gillies, nożyczki do sekcji, hemostaty oraz uchwyty na igły. |
| Nożyczki zeza | Surtex | 102-4109 | |
| Chirurgiczne pióro markujące | Zdrowie kardynalne | 212PR | |
| Szwy Ethilon 4.0 i 3.0 | Ethicon | 1667G | |
| Kleszcze tkankowe | MPM | 106-0511 |
Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.