Subskrypcja JoVE jest wymagana do oglądania tego materiału. Zaloguj się lub rozpocznij bezpłatny okres próbny.

Artykuł badawczy

Przyczynowe skutki metabolitów osocza na uszkodzenie ścięgna Achillesa: Badanie randomizacji metodą Mendla

268 wyświetleń

⸱

DOI:

10.3791/69807

⸱

27 marca 2026

 ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  ,  , 
1Department of Orthopaedic Centre Hand-Foot Surgery, People's Hospital of Ningxia Hui Autonomous Region, Ningxia Medical University, 2Ningxia Yinchuan Energy College, Nursing College, 3General Surgery Department, People's Hospital of Ningxia Hui Autonomous Region, Ningxia Medical University

W tym artykule

Podsumowanie

Przedstawiamy tutaj połączony protokół randomizacji mendelowskiej i eksperymentalnej walidacji mających na celu identyfikację metabolitów przyczynowych w uszkodzeniu ścięgna Achillesa, identyfikację 19 metabolitów osocza z przyczynowymi powiązaniami z uszkodzeniem ścięgna Achillesa oraz demonstrację terapeutycznego zastosowania 5,6-dihydrotyminy i hydroksyasparaginy w wspieraniu naprawy tkanek i redukcji stanu zapalnego.

Streszczenie

Aby zbadać przyczynowy wpływ metabolitów osocza na postęp i regenerację urazu ścięgna Achillesa (ATI), zastosowano randomizację mendelowską (MR) przy użyciu podejścia dwóch prób z danymi genetycznymi z dwóch dużych zbiorów danych. Dane ATI pochodzą z projektu IEU-OpenGWAS (ebi-a-GCST90018895), natomiast dane dotyczące metabolitów w osoczu obejmowały 1 400 metabolitów. Zidentyfikowano istotne zmienne instrumentalne (IV) dla metabolitów, a do oceny zależności przyczynowych zastosowano pięć metod MR – IVW, MR-Egger, mediana ważona, tryb prosty i tryb ważony – do oceny zależności przyczynowych. Przeprowadzono odwrotną analizę MR, aby zbadać wpływ ATI na poziomy metabolitów. Naprawę tkanek oraz ekspresję IL-6, TNF-α, VEGFA i TGF-β1 w tkance ścięgna Achillesa myszy oceniono 7. dnia po leczeniu za pomocą 5,6-dihydrotyminy (Dih) i hydroksyasparaginy (Hyd) za pomocą barwienia H&E oraz Western blot. Analiza MR zidentyfikowała 19 metabolitów o istotnych powiązaniach przyczynowych z ATI. Spośród nich 12 metabolitów, w tym Dih (IVW: OR = 1,197, 95% CI: 1,074-1,334; P = 0,001) oraz Pregnanediolu-3-glukuronidu (IVW: OR = 1,098, 95% CI: 1,023-1,177; P = 0,001), były pozytywnie powiązane z progresją ATI. Dla porównania, 7 metabolitów, takich jak Hyd (IVW: OR = 0,789, 95% CI: 0,707-0,880; P < 0,001), były powiązane z odzyskiwaniem ATI. Analiza odwrotnej MR nie wykazała istotnych skutków przyczynowych ATI na poziomy metabolitów, co sugeruje jednokierunkowy związek. Badania rentgenowskie i H&E wykazały, że leczenie Dih i Hyd znacząco poprawiło gojenie ścięgna Achillesa w zależności od dawki. Ponadto leczenie Dih i Hyd znacząco obniżyło ekspresję IL-6 i TNF-α (P < 0,05), jednocześnie zwiększając poziomy VEGFA i TGF-β (P < 0,05), co wskazuje na zmniejszenie stanu zapalnego i sprzyjanie naprawie tkanek. Badanie to zidentyfikowało potencjalne związki przyczynowe między konkretnymi metabolitami osocza a wynikami ATI. Te odkrycia mogą wpłynąć na przyszłe strategie terapeutyczne i podkreślić przydatność MR w badaniu powiązań metabolit-choroba.

Wprowadzenie

Uraz ścięgna Achillesa (ATI) to powszechna i wyniszczająca choroba układu mięśniowo-szkieletowego, szczególnie u sportowców i osób aktywnych fizycznie. 1,2. Ścięgno Achillesa, największe i najsilniejsze ścięgno w ludzkim ciele, odgrywa kluczową rolę w poruszaniu się, przekazując siły z mięśni łydki na piętę podczas takich aktywności jak chodzenie, bieganie czy skoki 3,4,5,6. Jej ograniczone ukrwienie i wysoki nacisk mechaniczny sprawiają, że jest szczególnie podatna na przeciążenie i urazy 2,7. ATI objawia się w różnych formach, od łagodnej tendinopatii po całkowite pęknięcie, powodując znaczny ból, utrudnienie mobilności i długotrwałą rehabilitację 8,9. Pomimo postępów w leczeniu, ATI często powoduje utrzymujący się ból, zmniejszoną ruchomość i wydłużony czas rekonwalescencji, z wyższym ryzykiem przewlekłych powikłań i ponownych urazów 5,10,11,12.

Najnowsze badania podkreśliły kluczową rolę metabolitów osocza w procesie gojenia ATI 13,14. Uważa się, że te metabolity, zaangażowane w różne szlaki biochemiczne, wpływają na kluczowe czynniki, takie jak stan zapalny, naprawa tkanek oraz zdrowie ścięgien15. Na przykład specyficzne aminokwasy i lipidy są niezbędne do syntezy kolagenu i zarządzania stresem oksydacyjnym, co jest kluczowe w patologii ścięgien16,17. Osocze bogatopłytkowe (PRP), bogate w czynniki wzrostu takie jak PDGF, TGF-β, VEGF i IGF, wykazało potencjał w wspomaganiu gojenia ścięgien, choć jego skuteczność w leczeniu przewlekłej tendinopatii Achillesa pozostaje dyskusyjna14. W ostatnich latach technologie omiki o wysokiej przepustowości, takie jak metabolomika i proteomika, stworzyły bezprecedensowe możliwości eksploracji molekularnego krajobrazu złożonych schorzeń, takich jak ATI18,19. Zaawansowane technologie metabolomiczne ułatwiły identyfikację biomarkerów powiązanych z wynikami ATI, dostarczając wglądu w to, jak konkretne metabolity wpływają na postęp urazu i rekonwalescencję.

Profilowanie metabolitów oraz analiza szlaków metabolicznych stały się skutecznymi metodami identyfikacji biomarkerów i szlaków związanych z urazem20,21. Randomizacja mendelowska (MR) to solidna metoda wnioskowania przyczynowego, która wykorzystuje warianty genetyczne jako zmienne instrumentalne (IV) do zwalczania błędnych błędów powszechnych w tradycyjnych badaniach epidemiologicznych 22,23,24,25,26,27. MR jest szczególnie przydatne do badania przyczynowych zależności między ekspozycjami, takimi jak metabolity osocza, a wynikami takimi jak ATI. W przeciwieństwie do konwencjonalnych badań obserwacyjnych, które są podatne na zakłócenia i odwrotne przyczynowości, MR wykorzystuje warianty genetyczne jako dożylne dożylności, aby zapewnić silniejsze wnioski przyczynowe. Głębsze zrozumienie, jak metabolity osocza wpływają na zdrowie ścięgien, jest niezbędne dla rozwoju strategii terapeutycznych i poprawy wyników powrotu do zdrowia.

Bazując na tych postępach, niniejsze badanie bada przyczynową rolę metabolitów osocza w ATI za pomocą MR. Analizowano genetyczne różnice związane z poziomami metabolitów, aby zidentyfikować konkretne metabolity związane z progresją i odzyskiwaniem ATI. Dodatkowo, kandydaty na metabolity, takie jak 5,6-dihydrotymina (Dih) i hydroksyasparagina (Hyd), zostały eksperymentalnie zweryfikowane w modelach zwierzęcych, aby wyjaśnić ich wpływ na przebieg i gojenie ATI.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Protokół

Zatwierdzenie etyki i zgoda na udział

Wszystkie projekty eksperymentalne na zwierzętach były ściśle przeprowadzane zgodnie z Laboratorium Zarządzania Zwierzętami Prowincji Ningxia i zatwierdzone przez Komitet Etyki Szpitala Ludowego Regionu Autonomicznego Ningxia Hui, Uniwersytetu Medycznego Ningxia.

Projekt badania

Badanie to badało związki przyczynowe między 1 400 metabolitami osocza a ATI przy użyciu metodologii MR na dwóch próbkach. Aby zapewnić ważność IV w wnioskowaniu przyczynowym, należy spełnić trzy kluczowe założenia: (1) zmienność genetyczna jest bezpośrednio powiązana z interesującą się ekspozycją; (2) zmienność genetyczna nie jest zakłócona przez potencjalne czynniki zakłócające ekspozycję na wynik ekspozycji; oraz (3) zmienność genetyczna wpływa na wynik wyłącznie poprzez ekspozycję, a nie przez alternatywne szlaki.

Źródła danych GWAS dla ATI

Dane do badania Genome-Wide Association Study (GWAS) dotyczącego ATI pochodzą z projektu IEU-OpenGWAS (https://gwas.mrcieu.ac.uk/), wykorzystując konkretnie zbiór danych ebi-a-GCST90018895. Analiza GWAS objęła 357 658 osób pochodzenia europejskiego, w tym 7 746 przypadków i 349 912 grup kontrolnych. Zgodnie z procedurami kontroli jakości zidentyfikowano łącznie 19 072 056 polimorfizmów pojedynczych nukleotydów (SNP). Procedury kontroli jakości obejmowały usuwanie SNP o częstotliwości małych alleli <0,01, równowadze Hardy-Weinberga P<1×10-⁶ oraz wskaźniku wywołań genotypowych <0,95. Stratyfikację populacji oceniono za pomocą analizy głównych składników, a współczynnik inflacji genomowej (λ) obliczono w celu oceny systematycznego błędu.

Źródła danych GWAS dotyczące metabolitów osocza

Zbiór danych Exposure Factors zawiera dane GWAS dla 1 400 metabolitów osocza, obejmujących 1 091 poziomów metabolitów i 309 stosunków metabolitów, zgodnie z katalogiem w bazie danych GWAS (https://www.ebi.ac.uk/gwas/studies/GCST90199621-90201020). Analizy MR były ograniczone do osób pochodzenia europejskiego. Szczegółowe informacje o zbiorze danych znajdują się w Materiałach Uzupełniających, Tabela S1.

Wybór IV

W identyfikacji IV próg istotności statystycznej dla 19 072 056 SNP związanych z metabolitem osocza został ustalony na P < 1 × 10-5. Aby zapewnić niezależność analiz, SNP zostały zagregowane z wykorzystaniem progów r2 = 0,001 oraz kilobazy (kb) = 10 000, z wyłączeniem 19 037 213 SNP z r2 > 0,001 i kb < 10 000, aby wyeliminować potencjalne efekty nierównowagi sprzężenia (LD). SNP o wartościach F-statystyk < 10 zostały wykluczone z dalszych analiz ze względu na wysoką heterogeniczność, podczas gdy 34843 SNP spełniające kryteria zachowano jako ważne IV.

Zwierzęta i projektowanie eksperymentalne

Wszystkie eksperymenty na zwierzętach przeprowadzano ściśle zgodnie z Procedurami Zarządzania Zwierzętami Laboratoryjnymi Prowincji Ningxia i zatwierdzono przez Komitet Etyki Szpitala Ludowego Autonomicznego Regionu Hui Ningxia, Uniwersytetu Medycznego Ningxia. Samce myszy BALB/c (8 tygodni, klasa SPF) zostały zakupione od Beijing Vital River Laboratory Animal Technology Co., Ltd. (Pekin, Chiny). Myszy były aklimatyzowane przez tydzień w kontrolowanym środowisku (temperatura 23 ± 1°C, wilgotność 60 ± 10%), z dostępem do standardowej żywności i wody oraz 12-godzinnym cyklem światła i 12 godzin ciemności. Po aklimatyzacji opracowano model urazu ścięgna myszy. Po podłużnym nacięciu skóry odsłonięto ścięgno lewego Achillesa i wykonano ustandaryzowane, pełnogrube przecięcie poprzeczne w środku ścięgna za pomocą nożyczek mikrochirurgicznych. Ścięgno zostało natychmiast naprawione za pomocą szwów 6-0 niechłonnych pod stereomikroskopem. Bezpośrednio po operacji wykonano obrazowanie rentgenowskie, aby potwierdzić pomyślne ustanowienie modelu myszy ATI. Równocześnie wykonywano zdjęcia rentgenowskie dla grupy kontrolnej w identycznych warunkach znieczulających, aby służyć jako blank control28. Wszystkie zabiegi wykonywano w znieczuleniu ogólnym wywołanym przez dootrzewnowe zastrzyk pentobarbitalu sodu (50 mg·kg-1), a pooperacyjne znieczulenie podawano buprenorfinę (0,05 mg·kg-1, podskórnie) co 12 godzin przez 48 godzin29 godzin. Po pomyślnym wprowadzeniu modelu myszy zostały losowo przydzielone do następujących grup: grup kontrolnych, modelowych i leczących, otrzymujących Dih w niskich (10 mg·kg-1, LD-Hyd), średnich (30 mg·kg-1, MD-Hyd) i wysokich (50 mg·kg-1, HD-Hyd). Obliczenie wielkości próby: Na podstawie wstępnych danych wykazujących 40% poprawę wyników gojenia po leczeniu metabolitów (SD = 15%), ustalono, że n = 6 myszy na grupę zapewni 80% mocy wykrywania tej różnicy przy α = 0,05 (dwustronne). Losowość przeprowadzono za pomocą komputerowo generowanych liczb losowych przez badacza ślepego na przydział grup. Procedury eksperymentalne i oceny wyników przeprowadzali badacze nieświadomi przydziałów grupowych30.

Barwienie hematoksyliny i eozyny (HE)

W 7. dniu po leczeniu myszy zostały uśpione pod głęboką anestezją wywołaną przez dootrzewnowkowe zastrzyki pentobarbitalu sodu (100 mg·kg-1), co zapewniło całkowitą utratę odruchów przed pobraniem tkanek zgodnie z nimi. Uszkodzona tkanka ścięgna Achillesa, w tym niewielka część otaczającej tkanki miękkiej, została starannie pobrana i przetworzona. Usunięto kawałek skóry o wymiarach 15 mm2 , skupiony na ścięgnie Achillesa. Próbki skóry zostały utrwalone w roztworze 4% paraformaldehydu w temperaturze pokojowej przez 48 godzin, następnie nastąpiło odwodnienie, osadzenie parafiny i sekcjonowanie 5 μm. Oceniono cechy strukturalne skóry rany, formowanie tkanki granulacyjnej oraz infiltrację komórek zapalnych za pomocą barwienia H&E. Do oceny histologicznej sekcje były deparafinizowane ksylenem (2 × 10 min), nawodniane przez etanol klasyfikowany (100%, 95%, 85% i 75% każda) i płukane w wodzie destylowanej. Preparaty były barwione hematoksyliną Harrisa przez 5 minut, płukane w bieżącej wodzie z kranu przez 5 minut, różnicowane w 1% alkoholu kwasowym przez 10 sekund oraz niebieskie w wodzie o stężeniu 0,2% amoniaku przez 30 sekund. Po umyciu sekcje były nakładane na 2 minuty barwą kontynentalną 0,5% eozyny, następnie odwodnienie, oczyszczanie i montaż. Wiarygodność oceny histologicznej: Aby zapewnić dokładność pomiarów, 20% losowo wybranych próbek zostało niezależnie ocenionych przez dwóch zaślepionych obserwatorów. Niezawodność między oceniającymi oceniano za pomocą współczynnika korelacji wewnątrzklasowej (ICC). ICC dla organizacji kolagenu wynosił 0,89 (95% CI: 0,81-0,94), dla degeneracji tkanek 0,92 (95% CI: 0,86-0,96), a dla infiltracji komórek zapalnych 0,87 (95% CI: 0,78-0,93), co wskazuje na doskonałą niezawodność. Niezawodność wewnątrz oceniającego oceniano tak, że jeden obserwator ponownie ocenił 15% próbek po dwutygodniowym odstępie, co dało wartości ICC > 0,85 dla wszystkich parametrów31.

Analiza zachodniej plamy

Ekspresja białek została przeanalizowana metodą Western Blot. Ilościowa analiza białek została przeprowadzona za pomocą zestawu do analizy stężenia białka BCA. Równe ilości białka zostały rozdzielone za pomocą 10% elektroforezy żelu sodowego dodecylosiarczanu i poliakrylamidu (SDS-PAGE) i przeniesione do błony nitrocelulozowej. Błona była zablokowana na 1 godzinę 5% odtłuszczonego mleka w soli fizjologicznej z buforem Tris-buffer zawierającą 0,1% Tween-20 w temperaturze pokojowej. Błony inkubowano przez noc w temperaturze 4°C z pierwotnymi przeciwciałami przeciwko VEGFA (1:1000, ab46154), TGF-β1 (1:1000, 21898-1-AP), IL-6 (1:1000, 26404-1-AP) oraz TNF-α (1:1000, 17590-1-AP). Po trzech płukaniach PBS błony były inkubowane z przeciwciałami wtórnymi (1:5000) przez 90 minut w temperaturze pokojowej. Pasma białkowe były wizualizowane za pomocą zestawu podłoża chemiluminescencyjnego ECL (szczegóły w Tabeli Materiałów ) zgodnie z protokołem producenta i analizowane za pomocą oprogramowania ImageJ (wersja 1.8; Narodowych Instytutów Zdrowia). GAPDH (10494-1-AP) był używany jako kontrola załadunku.

Analiza statystyczna

Analizy statystyczne przeprowadzano za pomocą oprogramowania R Studio. Pakiety TwoSampleMR i ieugwasr R były wykorzystywane do wyodrębniania danych ekspozycji i sprawdzania prawidłowych IV, w tym zgrupowania (r² < 0,001, rozmiar okna = 10 000 kb), harmonizacji alleli oraz obliczania statystyki F-(F = β²_exposure/SE²_exposure). Do analiz MR i odwrotnych MR korzystaliśmy z pakietów VariantAnnotation, gwasglue i TwoSampleMR, które umożliwiły solidne wnioskowanie przyczynowe i testy wrażliwości. Przeprowadzono badanie MR z dwoma próbkami w celu zbadania cech związanych z metabolitami plazmy. Zastosowano pięć odrębnych podejść analitycznych: ważenie odwrotnej wariancji (IVW), MR-Egger, mediana ważona (WM), tryb prosty oraz tryb ważony. Wyniki podstawowe zostały określone metodą IVW, z istotnością statystyczną na poziomie P < 0,01. Metoda IVW przypisuje wagi, aby zminimalizować wpływ zmienności, zapewniając dokładniejsze oszacowania efektów. Regresja MR-Egger została wykorzystana do oceny plejotropii (zjawiska, w którym geny wpływają na wiele cech), przy czym pozioma plejotropia była oceniana przez wartość P przecięcia (P > 0,05), a heterogeniczność testowano metodą IVW w połączeniu ze statystyką Q MR-Eggera. Nie zaobserwowano istotnej heterogeniczności, gdy P > 0,05. Wielokrotna korekta testowa została zastosowana metodą fałszywego wykrywania (FDR) Benjamini-Hochberga, przy czym FDR < 0,05 uznano za istotne. Heterogeniczność była kwantyfikowana za pomocą statystyki Q Cochrana oraz statystyki I2 , gdzie I2 > 50% wskazywało na istotną heterogeniczność. Dla wartościI 2 obliczono 95% przedziałów ufności według metody opisanej przez Ioannidisa i in. Analizy czułości przeprowadzono poprzez kolejne usuwanie każdego SNP, aby ocenić wpływ poszczególnych wariantów na ogólne wyniki.

Aby ocenić wiarygodność pomiarów, przeprowadzono analizy test-retest kluczowych miar wyników (kwantyfikacja WB i ocena histologiczna) z wykorzystaniem współczynników korelacji wewnątrzklasowych (ICC). ICC został wykorzystany do oceny wiarygodności między oceniającymi i wewnątrz-oceniającymi w zakresie ilościowania i oceny histologicznej Western Blot (WB). Kryteria interpretowano następująco: poniżej 0,50 (słabe), między 0,50 a 0,75 (umiarkowane), między 0,75 a 0,90 (dobre) oraz powyżej 0,90 (doskonałe)32. Trzech niezależnych badaczy ślepo oceniło ten sam zestaw próbek w dwóch punktach czasowych oddzielonych tygodniem. ICC do ilościowej zachodniej plamki IL-6, TNF-α, VEGFA i TGF-β wahały się od 0,87 do 0,93, co wskazuje na doskonałą niezawodność. ICC dla oceny histologicznej wynosiły 0,85 dla organizacji kolagenu i 0,82 dla oceny neowaskularyzacji.

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Wyniki

Związek przyczynowy między 1 400 metabolitami osocza a ATI

Przeprowadzono kompleksową analizę MR 1 400 metabolitów osocza, aby ocenić ich przyczynowy wpływ na ATI. Główna analiza wykorzystała podejście IVW, z rygorystyczną kontrolą LD i potencjalnych czynników zakłócających, aby zidentyfikować metabolity znacząco wpływające na progresję i regenerację ATI. Rysunek 1 przedstawia przyczynowe powiązania między 144 metabolitami osocza a ATI, gdzie powi...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Dyskusja

W tym badaniu przeprowadzono kompleksową analizę MR, aby zbadać przyczynowe zależności między 1 400 metabolitami osocza a ATI. Zidentyfikowano dziewiętnaście metabolitów osocza jako istotnie powiązane z progresją i gojeniem ATI, przy czym Dih i Hyd okazały się kluczowymi czynnikami wpływającymi na wyniki ATI. Kolejne eksperymenty in vivo potwierdziły korzystną rolę tych metabolitów w wspomaganiu gojenia ścięgien. Leczenie Dih i Hyd skutkowało znaczącą, zależną od dawki obniżeniem poziomu cytokin prozapalnych IL-...

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Oświadczenia

Autorzy deklarują brak konkurencyjnych interesów.

Podziękowania

Badania kliniczne dotyczące oceny flory jelitowej i leczenia przewlekłych wrzodów w stopie cukrzycowej oparte na krokach, projekt innowacji naukowo-technologicznych Yinchuan (2024SF005). Badania stosowane nad wpływem różnych metod chirurgicznych na ukrwienie tkanki obrzędowej oraz biomechaniczną naprawę ostrego pęknięcia zamkniętego ścięgna Achillesa w ramach Programu Ningxia Key Research and Development (2019BEG3036).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Materiały

Lista materiałów użytych w tym artykule
NazwaFirmaNumer katalogowyKomentarze
5,6-dihydrotyminaOdczynnik696-04-8Odczynnik
Zestaw do testowania białek BCAOdczynnikP0012Odczynnik
Zestaw do chemiluminescencji ECLOdczynnikP0018SOdczynnik
Przeciwciało GAPDHPrzeciwciała10494-1-APPrzeciwciała
Zestaw do barwienia hematoksyliny i eozynyOdczynnikG1120Odczynnik
HydroksyasparaginaOdczynnikH1126Odczynnik
Przeciwciało IL-6Przeciwciała26404-1-APPrzeciwciała
ImageJOprogramowanieWersja 1.8Oprogramowanie
Błona nitrocelulozowaMateriały jednorazoweHATF08130Materiały jednorazowe
ParaformaldehydOdczynnikP0099-3LOdczynnik
RStudioOprogramowanieWersja 4.5.2Oprogramowanie
Zestaw do przygotowania żelu SDS-PAGEOdczynnikP0012ACOdczynnik
Pentobarbital soduZnieczulenie200-323-9Znieczulenie
TGF i beta; 1 PrzeciwciałoPrzeciwciała21898-1-APPrzeciwciała
TNF-α PrzeciwciałaPrzeciwciała17590-1-APPrzeciwciała
Przeciwciało VEGFAPrzeciwciałaAB46154Przeciwciała
System rentgenowskiInstrumentMX-20Instrument

Bibliografia

  1. Kvist, M. Achilles tendon injuries in athletes. Sports Med. 18 (3), 173-201 (1994).
  2. Järvinen, T. A., et al. Achilles tendon injuries. Curr Opin Rheumatol. 13 (2), 150-155 (2001).
  3. Barfod, K. W. Achilles tendon rupture; assessment of nonoperative treatment. Dan Med J. 61 (4), B4837(2014).
  4. Buddecke, D. Jr Acute Achilles Tendon Ruptures. Clin Podiatr Med Surg. 38 (2), 201-226 (2021).
  5. Bullock, M., Pierson, Z. Achilles Tendon Rupture. Clin Podiatr Med Surg. 41 (3), 535-549 (2024).
  6. Oliva, F., et al. Influence of Exercise on Musculoskeletal Disorders Associated with Gut Microbiota: A Narrative Review. MLTJ. 13 (1), (2023).
  7. Caldwell, J. E., Vosseller, J. T. Maximizing Return to Sports After Achilles Tendon Rupture in Athletes. Foot Ankle Clin. 24 (3), (2019).
  8. King, C. M., Vartivarian, M. Achilles Tendon Rupture Repair: Simple to Complex. Clin Podiatr Med Surg. 40 (1), 75-96 (2023).
  9. Kraeutler, M. J., Purcell, J. M., Hunt, K. J. Chronic Achilles Tendon Ruptures. Foot Ankle Int. 38 (8), 921-929 (2017).
  10. Vascellari, A., et al. Orthobiologics Injection Therapies in the Treatment of Muscle and Tendon Disorders in Athletes: Fact or Fake. MLTJ. 14 (2), (2024).
  11. Winnicki, K., Ochała-Kłos, A., Rutowicz, B., Pękala, P. A., Tomaszewski, K. A. Functional anatomy, histology and biomechanics of the human Achilles tendon - A comprehensive review. Ann Anat. 229, 151461(2020).
  12. Strom, A. C., Casillas, M. M. Achilles tendon rehabilitation. Foot Ankle Clin. 14 (4), 773-782 (2009).
  13. Sun, J. Y., Li, C., Du, F. Y. Adenylate cyclase activates the cAMP signalling pathway to enhance platelet-rich plasma-treated Achilles tendon disease,a theoretical bioinformatics-based study. World Journal of Orthopedics. 15 (2), 192-200 (2024).
  14. Restuccia, G., Varchetta, G. E. Platelet rich plasma (PRP) in the surgical treatment of Haglund's syndrome: the use of PRP membranes as an intra-operative local adjuvant. medicinski glasnik. 21 (1), 196-202 (2024).
  15. Wang, K., Cheng, L., He, B. Therapeutic effects of asperosaponin VI in rabbit tendon disease. Regen Ther. 20, 1-8 (2022).
  16. Shen, H., Lane, R. A. Extracellular Vesicles From Primed Adipose-Derived Stem Cells Enhance Achilles Tendon Repair by Reducing Inflammation and Promoting Intrinsic Healing. Stem Cells. 41 (6), 617-627 (2023).
  17. Bisciotti, G. N., et al. Achilles Tendon Repair after Tenorraphy Imaging and the Doughnut Metaphor. Int J Environ Res Public Health. 20 (11), (2023).
  18. Roh, C. Metabolomics in Radiation-Induced Biological Dosimetry: A Mini-Review and a Polyamine Study. Biomolecules. 8 (2), (2018).
  19. Malinowska, J. M., et al. Derivation of metabolic point of departure using high-throughput in vitro metabolomics: investigating the importance of sampling time points on benchmark concentration values in the HepaRG cell line. Arch Toxicol. 97 (3), 721-735 (2023).
  20. He, L., et al. Causal Associations of Obesity With Achilles Tendinopathy: A Two-Sample Mendelian Randomization Study. Front Endocrinol (Lausanne). 13, 902142(2022).
  21. Koike, Y., et al. Genetic insights into ossification of the posterior longitudinal ligament of the spine. Elife. 12, (2023).
  22. Birney, E. Mendelian Randomization. Cold Spring Harb Perspect Med. 12 (4), (2022).
  23. Burgess, S., Thompson, S. G. Interpreting findings from Mendelian randomization using the MR-Egger method. Eur J Epidemiol. 32 (5), 377-389 (2017).
  24. Georgakis, M. K., Gill, D. Mendelian Randomization Studies in Stroke: Exploration of Risk Factors and Drug Targets With Human Genetic Data. Stroke. 52 (9), 2992-3003 (2021).
  25. Ho, J., Mak, C. C. H., Sharma, V., To, K., Khan, W. Mendelian Randomization Studies of Lifestyle-Related Risk Factors for Osteoarthritis: A PRISMA Review and Meta-Analysis. Int J Mol Sci. 23 (19), (2022).
  26. Larsson, S. C., Butterworth, A. S., Burgess, S. Mendelian randomization for cardiovascular diseases: principles and applications. Eur Heart J. 44 (47), 4913-4924 (2023).
  27. Sekula, P., Del Greco, M. F., Pattaro, C., Köttgen, A. Mendelian Randomization as an Approach to Assess Causality Using Observational Data. J Am Soc Nephrol. 27 (11), 3253-3265 (2016).
  28. Zhao, X., Wang, Q., Wang, W., Lu, S. Increased neutrophil extracellular traps caused by diet-induced obesity delay fracture healing. Faseb j. 38 (20), e70126(2024).
  29. Lin, K., et al. Exosomal miR-212-5p promotes tendon repair via targeting FOXO1 to activate PP1A/YAP1 signaling. Commun Biol. 8 (1), 1798(2025).
  30. Migliorini, F., et al. Management of transient bone osteoporosis: a systematic review. Br Med Bull. 147 (1), 79-89 (2023).
  31. Napoli, R., et al. Cross Cultural Adaptation and Multi Centric Validation of The Italian Version of The Tegner Activity Scale. Muscle Ligaments Tendons J. , (2023).
  32. Koo, T. K., Li, M. Y. A Guideline of Selecting and Reporting Intraclass Correlation Coefficients for Reliability Research. J Chiropr Med. 15 (2), 155-163 (2016).
  33. Hafez, A. E., Ismail, F. M., Abdelhakeem, M. A., Ragaee, S., Soliman, S. A. Musculoskeletal Ultrasound Changes in Chronic Plantar Fascia after Treatment with Platelet Rich Plasma Compared to Steroid. Muscle Ligaments Tendons J. 13 (01), 126(2023).
  34. Xiangyang, Y., et al. Sirtuin1 mitigation of calcium oxalate nephropathy via enhancing itaconate abundance through reduction of histone trimethylation. Clin Transl Med. 15 (8), (2025).
  35. Roland, K., et al. Ceramides in cardiovascular disease: emerging role as independent risk predictors and novel therapeutic targets. Cardiovasc Res. 121 (9), (2025).
  36. Kathryn, A. M., Bernard, D. K., Anna, N. Circulating ceramides as biomarkers of cardiovascular disease: Evidence from phenotypic and genomic studies. Atherosclerosis. 327 (0), (2021).
  37. Kuliś, S., Pietraszewski, P., Callegari, B. Characteristics of Post-Exercise Lower Limb Muscle Tremor Among Speed Skaters. Sensors (Basel). 25 (14), (2025).
  38. Tuniyazi, M., et al. Changes of microbial and metabolome of the equine hindgut during oligofructose-induced laminitis. BMC Vet Res. 17 (1), 11(2021).
  39. Dobritzsch, D., et al. β-Ureidopropionase deficiency due to novel and rare UPB1 mutations affecting pre-mRNA splicing and protein structural integrity and catalytic activity. Mol Genet Metab. 136 (3), 177-185 (2022).
  40. Nakajima, Y., et al. Dihydropyrimidinase deficiency in four East Asian patients due to novel and rare DPYS mutations affecting protein structural integrity and catalytic activity. Mol Genet Metab. 122 (4), 216-222 (2017).
  41. Hirano, M., et al. Mitochondrial neurogastrointestinal encephalomyopathy (MNGIE): Position paper on diagnosis, prognosis, and treatment by the MNGIE International Network. J Inherit Metab Dis. 44 (2), 376-387 (2021).
  42. Mukherjee, A., et al. Adipocytes reprogram cancer cell metabolism by diverting glucose towards glycerol-3-phosphate thereby promoting metastasis. Nat Metab. 5 (9), 1563-1577 (2023).
  43. Tighanimine, K., et al. A homoeostatic switch causing glycerol-3-phosphate and phosphoethanolamine accumulation triggers senescence by rewiring lipid metabolism. Nat Metab. 6 (2), 323-342 (2024).
  44. Blackwell, L. F., Cooke, D. G., Brown, S. The Use of Estrone-3-Glucuronide and Pregnanediol-3-Glucuronide Excretion Rates to Navigate the Continuum of Ovarian Activity. Front Public Health. 6, 153(2018).
  45. Chen, J., et al. Quantitation of serum pregnanediol-3-glucuronide level in different endocrine statuses by LC-MS/MS. J Pharm Biomed Anal. 184, 113171(2020).
  46. Usala, S. J., Alliende, M. E., Trindade, A. A. Algorithms with Area under the Curve for Daily Urinary Estrone-3-Glucuronide and Pregnanediol-3-Glucuronide to Signal the Transition to the Luteal Phase. Medicina (Kaunas). 58 (1), (2022).
  47. Feng, J., Huang, Z., Cui, C., Zhao, M., Feng, Y. Synthesis, taste characteristics and taste mechanism of N-lactoyl leucine from soy sauce using sensory analysis and UPLC-MS/MS. Food Chem. 454, 139670(2024).
  48. Fernandes Silva, L., Hokkanen, J., Vangipurapu, J., Oravilahti, A., Laakso, M. Metabolites as Risk Factors for Diabetic Retinopathy in Patients With Type 2 Diabetes: A 12-Year Follow-up Study. J Clin Endocrinol Metab. 109 (1), 100-106 (2023).
  49. Ito, T., Tono, M., Kitaura, Y., Hemmi, H., Yoshimura, T. Urinary l-erythro-β-hydroxyasparagine-a novel serine racemase inhibitor and substrate of the Zn2+-dependent d-serine dehydratase. Biosci Rep. 41 (4), (2021).
  50. Xia, Y., et al. N(γ) -Hydroxyasparagine: A Multifunctional Unnatural Amino Acid That is a Good P1 Substrate of Asparaginyl Peptide Ligases. Angew Chem Int Ed Engl. 60 (41), 22207-22211 (2021).
  51. Schmidt, C., et al. Lactoyl leucine and isoleucine are bioavailable alternatives for canonical amino acids in cell culture media. Biotechnol Bioeng. 118 (9), 3395-3408 (2021).
  52. Castro, B. M., Prieto, M., Silva, L. C. Ceramide: a simple sphingolipid with unique biophysical properties. Prog Lipid Res. 54, 53-67 (2014).
  53. Cogolludo, A., Villamor, E., Perez-Vizcaino, F., Moreno, L. Ceramide and Regulation of Vascular Tone. Int J Mol Sci. 20 (2), (2019).
  54. Zhang, J., Wei, L., Tan, H., Pang, W. Gut microbiota and postpartum depression: a Mendelian randomization study. Front Psychiatry. 15, 1282742(2024).
  55. Liu, Y., et al. The risk of Alzheimer's disease and cognitive impairment characteristics in eight mental disorders: A UK Biobank observational study and Mendelian randomization analysis. Alzheimers Dement. 20 (7), 4841-4853 (2024).
  56. Chi, J., et al. Causal effects for neurodegenerative diseases on the risk of myocardial infarction: a two-sample Mendelian randomization study. Aging (Albany NY). 16 (11), 9944-9958 (2024).
  57. Tan, Z., Hong, J., Sun, A., Ding, M., Shen, J. Causal effects of circulating lipids and lipid-lowering drugs on the risk of urinary stones: a Mendelian randomization study. Front Endocrinol (Lausanne). 14, 1301163(2023).
  58. Kitsios, G. D., Thaler, D. E., Kent, D. M. Potentially large yet uncertain benefits: a meta-analysis of patent foramen ovale closure trials. Stroke. 44 (9), 2640-2643 (2013).
  59. Sung, C. W., et al. Prediction of high-risk emergency department revisits from a machine-learning algorithm: a proof-of-concept study. BMJ Health Care Inform. 31 (1), (2024).
  60. Lidi, L., Jennifer, H., Daniel, J. L., Hui, B. S. Advances of stem cell based-therapeutic approaches for tendon repair. J Orthop Translat. 9 (0), (2018).
  61. Daibang, N., Yiqin, Z., Wang, W., Jianying, Z., James, H. -C. W. Mechanical Overloading Induced-Activation of mTOR Signaling in Tendon Stem/Progenitor Cells Contributes to Tendinopathy Development. Front Cell Dev Biol. 9 (0), (2021).
  62. Mathieu, M., et al. Trigonelline is an NAD(+) precursor that improves muscle function during ageing and is reduced in human sarcopenia. Nat Metab. 6 (3), (2024).
  63. Yoshida, M., Funasaki, H. Optimal Platelet Concentration for The Therapeutic Effect of Autologous Neutrophil-Reduced Platelet Rich Plasma in A Rat Model of Achilles Tendinopathy. Muscles, Ligaments & Tendons Journal (MLTJ). 10 (4), (2020).
  64. Kuan-Ju, C., Li-Cheng, C., Yi-No, K., Chiehfeng, C. Autologous Stem Cell Therapy for Chronic Lower Extremity Wounds: A Meta-Analysis of Randomized Controlled Trials. Cells. 10 (12), (2021).
  65. Gupta, S., Paliczak, A., Delgado, D. Evidence-based indications of platelet-rich plasma therapy. Expert Rev Hematol. 14 (1), 97-108 (2021).
  66. Impellizzeri, F. M., Bizzini, M. Systematic review and meta-analysis: A primer. International Journal of Sports Physical Therapy. 7 (5), 493-503 (2012).

Dostęp ograniczony. Zaloguj się lub rozpocznij wersję próbną, aby wyświetlić tę treść.

Przedruki i uprawnienia

Przeglądaj więcej artykułów

Naprawa tkanekdane genetycznezmienne instrumentalneWestern blotmarkery stanu zapalnegotkanka ścięgna myszyzwiązki przyczynowe
Skontaktuj się z nami
Poleć bibliotece

Prywatność

Warunki korzystania z usługi

Zasady

Prawa autorskie © 2026 MyJoVE Corporation. Wszelkie prawa zastrzeżone.